unidad iii ensayos confirmatorios 27 03 3º
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Ensayos confirmatorios
1. Ensayo del Luminol
2. Pruebas microscópicas
3. Identificación espectroscópica
4. Identificación espectrofotométrica
5. Identificación cromatográfica
6. Transformación de porfirinas
7. Ensayos microcristalográficos
1. Ensayo del Luminol
Esta técnica es altamente sensiblea la presencia de manchas que hansido limpiadas.También se emplea para visualizarhuellas sanguinolentas de zapatosdejadas en la escena del delito.
1. Ensayo del Luminol
• derivado del ácido ftálico (3-aminonaftilhidracina)
• sólido verdoso poco soluble
• reacción de quimioluminiscencia con peróxidos en presencia de complejos de Fe como catalizadores.
• usada para la visualización de manchastan diluidas que son invisibles al examenocular directo
1. Ensayo del Luminol
Este producto puede ser preparado enel laboratorio ó bien adquirido en supreparación comercial.
Laboratorio: presenta la dificultad deser difícil de preparar y estabilizar.
1. Ensayo del Luminol
Método
Altamente sensible
Específico
Permite tratar rápidamente grandessuperficies y localizar manchasinvisibles al examen ocular directo.
No interfiere en la ejecución deensayos similares.
1. Ensayo del Luminol
Se aplica por aspersión sobre la zonadonde se cree puede existir un rastrode sangre, de donde viene su principalventaja: se puede aplicar en extensassuperficies, detectando sangre hasta anivel de trazas.
es una prueba inmunocromatográfica de confirmación dela presencia de trazas de sangre humana.Se comercializa como complemento de BLUESTAR®.Es una prueba muy simple de usar.DOS ó TRES minutos son suficientes para comprobar,si la traza revelada por BLUESTAR® es o no sangrehumana.
La hemoglobina humana (hHb), reacciona con unconjugado compuesto de partículas azuladas yanticuerpos monoclonales de hemoglobinahumana.
Hexagon OBTI®
2. Pruebas microscópicas
• Puede usarse aún en manchas secas
• Método:
a.Tinción con colorantes hemáticosapropiados ( MG-G)
b.Observación al MO.
Dificultad: mamíferos: carnero, vacuno,equino.
2. Pruebas microscópicas
MO sangre
Pruebas de aglutinación ( grupo y factor: GR intactos).
humana
animal
menstrual
vaso
mamífero
3.Identificación espectroscópica
• Método: comparación visual con unpatrón
• Coloración de la hemoglobina en medioácido
Hb hematina +HCl
4.Identificación espectrofotométrica
• Fundamento:
Hb MetaHb CianmetaHb
NaHCO3= 1gKCN = 0,05 gFeCNK= 0,2 g H2Od csp= 1000ml
reactivo de Drabkin
reactivomuestra
Filtro verde
540 nm
5. Identificación cromatográfica
• Cromatografía sobre papel.
• Técnica resolutiva, específica,prácticay sensible.
• No interfieren: citocromos,herrumbre,oxidantes directos, sales metálicas
• Peroxidasa vegetales: se destruyenpor tratamiento térmico a 100º - 10 ‘
5. Identificación cromatográfica
Cromatografía en capa delgadaMateriales: Placas de vidrio
Placas de Silicagel GLíquido resolutivo: MetOH- AcAc= 99:1Revelador: mezclar al momento de usar,volúmenes iguales de sol. de bencidina(acética o alcohólica) +H2O2 10 VolTécnica: se recomienda usar placascompradas.
7.Ensayos microcristalográficos
a. Modificación de Bertrand
MgCl2= 1gGlicerol= 5mlAcAc g= 20 mlH2O d= 1ml
Reactivo
flamear
7.Ensayos microcristalográficos
a. Modificación de Bertrand
MgCl2= 1gGlicerol= 5mlAcAc g= 20 mlH2O d= 1ml
Reactivo
flamear
5. Identificación cromatografica
Mancha: tratarla con 0,5 ml de H2Od,macerar hasta obtención del pigmentohemático
Machas antiguas: HCl 0,02N: hematina ácida.
Cromatografía ascendente
6. Transformación de porfirinas
Luz de Wood: filtro azul
fluorescencia
mancha
semen
H2SO4 c
fluorescencia
sangre
7.Ensayos microcristalográficos
Fundamento: obtener derivados dedescomposición de la Hb de forma ycolor definidos realizando tratamientosadecuados con reactivos H+ o HO-
7.Ensayos microcristalográficos
•Método de Teichmann: al tratar la muestra de sangre con AcAc aparecerán cristales castaños característicos
60 º
7.Ensayos microcristalográficos
a. Modificación de Bertrand
MgCl2= 1gGlicerol= 5mlAcAc g= 20 mlH2O d= 1ml
Reactivo
flamear
7.Ensayos microcristalográficos
b. Modificación de Nippe
KCl= 0,1gKBr= 0,1gKI=0,1gAcAc=100ml
Reactivo
flamear