vÉrcsoportszerolÓgia - revosystems honlapkészítés...2012.02.24. 1 vÉrcsoportszerolÓgia...
TRANSCRIPT
-
2012.02.24.
1
VÉRCSOPORTSZEROLÓGIAVÉRCSOPORTSZEROLÓGIAImmunológiai alapfogalmakVércsoport antigének,antitestekAlloimmunizáció mechanizmusaAgglutináció
Dr. Nemes Nagy ZsuzsaSzakképzés 2011.
Immunrendszer
Immunrendszer védi a szervezetintegritását, önazonosságátFelismeri és eltávolítja a számáraidegen anyagokat.Antigén:minden olyan struktúra,amelyet az immunrendszer idegenként ismer fel
Immunrendszer
Immunszervek:� Thymus(T limfociták)� Bursa ekvivalens szervek( nyirok
csomók, tonsillák, bél, bőr nyirokszervei, B limfociták)
-
2012.02.24.
2
Immunválasz
� Celluláris( sejtes védekezés)főként T limfocitákhoz kötött
� Humorálisfőként B limfocitákhoz, immungobulinokhoz kötött
Immunválasz
� Celluláris( sejtes védekezés)főként T limfocitákhoz kötött
� Humorálisfőként B limfocitákhoz, immungobulinokhoz kötött
Az immunválasz részei
� Kognitív szakasz� Centrális szakasz� Efferens szakasz
-
2012.02.24.
3
Az transzfúzióhoz kapcsolódó alloimmunizáció
Humorális immunitás� A bejutó antigének • Minősége• Mennyisége• Gyakorisága� Recipiens immunrendszere
A vér antigén rendszerei
Sejtek:� Vörösvérsejtek� Fehérvérsejtek� Trombociták
Szolubilis antigének( proteinek,szénhidrátok, zsírok, nukleinsavak)
Vércsoportszerológia kezdetei
Karl Landsteiner
-
2012.02.24.
4
Vörösvérsejt antigének
Vércsoport antigének
• Örökletes tulajdonságok
• Genetikusan allélrendszerek és/ vagy kapcsolt gének határozzák meg
• Az egyedfejlődés során különböző időben jelennek meg
Vércsoportrendszerek
• A vörösvérsejtek felületén található antigéneket vércsoportrendszerekbe sorolták
• Jelenlegi rendszerezés: genetikai alapú
• ISBT( International Sociaty for Blood Transfusion)
• 30 vércsoport rendszer- több száz antigén
-
2012.02.24.
5
A vörösvérsejt antigének szerkezete
A vörösvérsejtmembrán alkotói
Kémiai tulajdonságukszerint:
� szénhidrátok � proteinek � glikoproteinek � glikolipidek
Az epitópok
Egy antigén több epitópbólvagy antigén determinánsbólépül fel.
Az immunválasz során akülönböző epitópok más ésmás effektor sejtek ésantitestek képződését váltják
ki (poliklonális immunválasz)
Vércsoport antitestek
-
2012.02.24.
6
Az antitestek osztályozása
• ALLOANTITESTEKidegen, de saját fajon belüli antigénnel szemben termelődnek
• AUTOANTITESTEKsaját antigénnel szemben termelődnek
• XENOANTITESTEKmás fajon belüli antigénnel szemben termelődnek
Vércsoport specifikus antitestek
A specificitást az antitest képződését kiváltó antigénhatározza meg.A vércsoport specifikus antitest mindig csak a kiváltóantigénnel lép reakcióba.
Az antitestek hőoptimumaAntitestek: Meleg HidegReakciók: +37oC 0; +4oC Immunglobulin típus:
IgG IgM
-
2012.02.24.
7
Az antitestek IN VITRO reakció mód szerint
Komplett vagy direktagglutinálók IgM
Inkomplett antitestek IgG
Az IgG típusú ellenanyag
• Az ellenanyagok 75%-a• 2 nehéz, 2 könnyű lánc• A placentán átjut
• Inkomplett, meleg típusú, immunantitest
Az IgG alosztályok
IgG1 és IgG3 jelentősége:• Transzfúziós szövődmény• Újszülöttkori hemolitikus betegség (ÚHB)
-
2012.02.24.
8
Az IgM immunglobulin
• Az immunglobulin készlet 10% -a• Makromolekula: pentamer szerkezetű• A korai immunválaszra jellemző• Komplex, szénhidrát antigénekkel reagál• Természetes, hideg típusú antitest
A komplement rendszer
• 21 szérum fehérje• Enzimek inaktív formái • Aktivizálódás: klasszikus és alternatív úton• Az antigén-antitest reakciók a klasszikus utat aktiválják
A vörösvérsejt antigénekkel szemben kialakuló alloimmunizáció mechanizmusa
vörösvérsejt antigén → APC → specifikus B sejt aktiváció→ specifikus alloantitest → immunkomplex →komplement, fagocita rendszer aktiváció → antigén eliminálása
-
2012.02.24.
9
Az immunválasz lefolyása1.lag fázis: az antitestmég nem mutathatóki2.log fázis: az antitesttitere logaritmusosannő3.plateau fázis: azantitest titere magasés állandó4.leszálló fázis: azantitest titer csökken,vagy az antitest márnem mutatható kiIDŐ: változó!FÜGG: antigéntől, egyéntől
Az elsődleges és másodlagos immunválasz
Az elsődleges immunválasz � első találkozás az
antigénnel� időben késik� IgM típusú ellenanyagok
dominálnak
A másodlagos immunválasz� ismételt találkozás az
antigénnel� az ellenanyagok hamarabb
jelennek meg� titerük magas� IgG típusú ellenanyagok
dominálnak
Vércsoport szerológiai vizsgálatok
• Ismeretlen vörösvérsejt antigénkimutatása ismert antitest tartalmú reagenssel
• Ismeretlen antitest kimutatásaa savóból/ plazmából ismert antigenitású teszt vörösvérsejtekkel
-
2012.02.24.
10
Vérminta(24 órán belüli)
• Natív• Citrátos• EDTA- s
Heparinos nem megfelelő!
Az antigén- antitest reakciókIN VITRO formái
• Precipitáció• Hemolízis • Agglutináció• Abszorbció• Elúció
Az agglutináció Specifikus fázis
Specifikus antigén-antitest kötődés
-
2012.02.24.
11
Az agglutináció Aspecifikus fázis
Az immunkomplexek összekapcsolódnak, térrács alakul ki.
Az agglutinációt befolyásoló tényezők 1.Reakcióhő
• hideg (0-4oC) típusú antitestek• meleg (37oC) típusú antitestek2.Reakció időAz antigén-antitest kötődéshez szükségesidőFügg:• vércsoport rendszertől• módszertől• vizsgálati technikától 3.Antigén- antitest arányAz antitest túlsúly az optimális
Az agglutinációt befolyásoló tényezők
4.Reakció közegKomplett agglutininek: fiz.sóInkomplett agglutininek:• LISS (alacsony ionerősségű közeg)• albumin és egyéb makromolekulák• proteolitikus enzimek (papain, bromelin)• AHG (Coombs) technikák
-
2012.02.24.
12
Az agglutinációt befolyásoló tényezők/Reakció közegFiziológiás sós közeg
I.
Az IgM típusú antitestekagglutinálnak, az IgGtípusúak kötődnek azantigénhez, de nem agglutinálnak
Az agglutinációt befolyásoló tényezők/Reakció közeg
Fiziológiás sós közeg II.Alkalmazás:• ABO rendszer vizsgálata
• Hideg típusú antitestek kimutatása
• Szalin típusú reagensek alkalmazása
Az agglutinációt befolyásoló tényezők/Reakció közeg/LISS
LISS= low ionic strengh solution
Hatása:• növeli a sejt felszínt (a sejtmegduzzad)
• csökkenti az elektromos kettős réteget• közelebb hozza a sejteket• szabaddá tesz antigéneket• gyorsítja az antitestek kötődését
-
2012.02.24.
13
Az agglutinációt befolyásoló tényezők/Reakció közeg/Enzim
Proteolitikus enzimek• papain• bromelin• ficinHatás:• csökkentik a felszín negatív töltését• szabaddá tesznekantigéneket (Rh, Kidd)• Elroncsolnakantigéneket (Duffy, MNS)
ELLENANYAGSZŰRÉS
Az agglutinációt befolyásoló tényezők/Reakció közeg/ AHG (Coombs) technikák
Direkt Coombs tesztA vörösvérsejtek antitest fedettségének kimutatása• alloantitestek • autoantitestek• gyógyszer elleni antitestek
Indirekt Coombs teszt• A savó inkomplett antitestjeinekkimutatása(ellenanyagszűrés és azonosítás, kompatibilitási vizsgálatok)• Antigén vizsgálatok (Kell,Fy,Jk stb)
A direkt Coombs teszt (DAT)
A sejtek immunglobulin és/ vagy komplement fedettségének
vizsgálata ( ÚHB, AIHA, transzfúziós szövődmény)
-
2012.02.24.
14
A direkt Coombs teszt (DAT)
Mosás: a kötetlen immunglobulinok eltávolítása
A direkt Coombs teszt (DAT)
Coombs reagens (AHG) hozzáadása
A direkt Coombs teszt(DAT)
Az antihuman globulin hidat képez az antitesttel fedett sejtek között
-
2012.02.24.
15
A direkt Coombs teszt(DAT)
Agglutináció jön létre
Az indirekt Coombs teszt
• A savó inkomplett antitestjeinek kimutatása (ellenanyagszűrés és azonosítás,vérválasztás )
• Antigének kimutatására(Kell, Duffy, Kidd)
Ismert antigenitású teszt vörösvérsejtek
Az indirekt Coombs teszt
A savóból antitestek kötődnek a vörösvérsejtekre
-
2012.02.24.
16
Az indirekt Coombs teszt
Coombs reagens (AHG) hozzáadása
Az indirekt Coombs teszt
Az antihuman globulin hidat képez az antitesttel fedett sejtek között
Az agglutinációt befolyásoló tényezők
5.A vizsgált vérminta koraA vvs-ek agglutinabilitása idővel csökken• a szobahőmérsékleten tárolt vérminta 24
óráig• hűtőben tárolt natív vérminta 48-72 óráig• CPD-A- s vérminta 35 napig• fagyasztott vvs 1 (több) évig vizsgálható
6.A vizsgált egyén kora, állapota• Idős korban az agglutinabilitás csökken• Bizonyos betegségekben csökken vagy nő
-
2012.02.24.
17
Az agglutinációt befolyásoló tényezők
7.A diagnosztikum
• fajta• kor• tárolási mód
Az agglutinációs reakciók értékelése
1. Pozitív reakcióagglutináció jelenléte
(++++ → +,+/-)1. Negatív reakció
agglutináció hiánya
1. Kevert mező pozitív és negatív reakció egyidejű jelenléte
Az agglutinációs reakciók értékelése
Kevert mező● nem csoport azonos vér transzfúzióját követően-szerológiai okok/ vérkészlet miatt a beteg nem csoport azonos vért kapott-transzfúziós szövődmény
• csontvelő transzplantációt követően • haematológiai betegség esetén • chimerizmus
-
2012.02.24.
18
Autoagglutinációs kontroll 1.A vérminta sejtjének és savójának vizsgálata
reagens nélkül2. A vérminta sejtjének vizsgálata hatóanyag
nélküli közegbenÉrtékelhető vizsgálat= autokontroll negatív
Az autokontroll pozitív,ha• a vörösvérsejtek fedettek• autoantitesttel• alloantitesttel • gyógyszerellenes antitesttel • sympexis képző savó
Sympexis = pénztekercs képződésNem antigén- antitest reakció!
Az agglutinációtól elkülönítendő!OKA: a vvs-ek lapszerinti összetapadása
o A vizsgált csepp széli beszáradásao A savó viszkozitása nő: • albumin/globulin arány eltolódik• kóros fehérjék (myeloma, cirrhosis, tumor)• makromolekulák (dextrán, kontrasztanyag)
FIZIOLÓGIÁS SÓ → SYMPEXIS ↓
Poliagglutinabilitás
vörösvérsejt tulajdonságT antigénhez kötött
� VELESZÜLETETT � SZERZETT � infekció � hematológiai betegség
-
2012.02.24.
19
Panagglutináció� a savó tulajdonsága
� panantitestek okozzák
� a panantitesteknek nincs vércsoport specificitása
� autokontroll ált. pozitív
Hivatkozások
Immunobase oktató program 2000.Falus A.Buzás E.Rajnavölgyi É:Az immunológia
alapjai 2007.Czirják L.szerk.Klinikai immunológia 2006.J.Brostoff et al.:Clinical immunology 1992.W.H.Ouwehand et al.:Adaptive immunity and
transfusion Vox Sanguinis 2004/87 s35-s38R.M.Minchunton et al. The body as fortress…
Vox Sanguinis 2004/87 s30-s34