การตรวจยืนยันกระท่อมในปัสสาวะdmsc2.dmsc.moph.go.th/webroot/drug/km/illicit_test/kratom... ·...
TRANSCRIPT
การตรวจยนยนกระทอมในปสสาวะ
ดร. เจรญด ปงสทธวงศ ส านกยาและวตถเสพตด กรมวทยาศาสตรการแพทย 7 พ.ค. 2551
พชกระทอม เปนพชยนตนขนาดกลาง ชอวทยาศาสตร Mitragyna
speciosa Korth. ตระกล Rubiaceae
พบในไทย (ภาคกลางและภาคใต) มาเลเซย อนโดนเซย ฟลปปนส
1a 1b
1c
1a 1b
1c
กฎหมายควบคมพชกระทอม จดเปนยาเสพตดในไทย พมา มาเลเซย ยาเสพตดใหโทษประเภท 5 ตาม พ.ร.บ ยาเสพตดใหโทษ (ฉบบท 5) พ.ศ. 2545 หามปลก ผลต ครอบครอง จ าหนาย น าเขาสงออก หรอเสพพชกระทอม
จดเขาในบญชของกลมยาและสารพษ ประเภท 9 ในออสเตรเลย หามปลกและน าเขาพชกระทอมตงแตวนท 1 ม.ค. 2548 ยกเวนการน าเขาเพอการศกษาวจย
ยาและสารพษในกลมประเภท 9: เปนสารทไมมการใชบ าบดอาการหรอโรคแตมแนวโนมในการใชในทางทผด
สรรพคณทางยา
สรรพคณใบกระทอมทางแพทยแผนไทยและหมอพนบาน แกปวดทอง แกบด แกทองเสย แกปวดเมอยรางกาย ระงบประสาท
มการใชใบกระทอมรกษาการอดฝนหรอใชเพอทดแทนฝน แตยงไมมการพฒนากระทอมใหเปนยารกษาผเสพตดฝน
ฤทธของกระทอม ท าใหผใชมอาการประสาทมนชา บรรเทาอาการปวดเมอกลามเนอ ทนทานตอความรอน และงานหนก
อาการและผลขางเคยงจากใบกระทอม เกดอาการหนาวสนเวลาครมฟาครมฝน ไมนกอยากอาหาร รางกายซบผอม ผวหนงจมกและโหนกแกมด า ทองผก อจจาระด าเหมอนมลแพะ
อาการขาดยา ไมมแรงท างาน กระสบกระสาย น ามกน าตาไหล ปวดเมอยตามขอ มอาการกระตกบรเวณแขนและขา พฤตกรรมกาวราวรนแรง
กลมผใชใบกระทอม พบการใชพชกระทอมในกลมทท างานหนกมอาชพท าไร ท านา ท าสวน กรรมกร คนขบรถ ชาวเรอ มการใหชางกนใบกระทอมเพอท างานหนก
ในกลมวยรนใชตมน าผสมกบเครองดมและยาแกไอ
ปญหารนแรงใน 3 จงหวดชายแดนภาคใต
พฤตกรรมการเสพ/การใชพชกระทอม กนใบสด-รดกาน-ไมคายกาก กนใบสด-รดกาน-คายกาก กนใบสด-ไมรดกาน-ไมคายกาก ใบสดตมน าดม
ตากใบแหงชงน ารอนกน หนตากแหงชงเหมอนใบชา สบใบแหง สบยางทอม 4x100
โครงสรางสารอลคาลอยดในใบกระทอม
NH
N
OCH3
R'
OCH3
O
R9
3
4
20
1
A C
15 19
17
16
7
D
E
B
Corynanthe Type Alkaloids 33 ชนด
NH
N
OCH3
O
R
O
CH3
9
3
4
20
1
A C
15 19
17
16
7
D
E
B
NH
R
O
OCH3
O
R'
N
OMe
9
3
4
201
A
C
15 19
1716
7
D
E
B
2 NH
R
O
OCH3
O O
CH3
N9
3
4
201
A
C
15 19
1716
7
D
E
B
2
Heteroyohimbine
Open E ring
Closed E ring
Oxindole
Open E ring
Closed E ring
Mitragynine เปนสารอลคาลอยดหลกทพบเฉพาะในใบกระทอมเทานน สามารถใชตรวจเอกลกษณพชกระทอมได มรายงานพบประมาณรอยละ 0.5 ของน าหนกใบ และพบรอยละ
66.2 ของ crude alkaloid extract และพบรวมกบ speciogynine (รอยละ 6.6) speciociliatine (รอยละ 0.8) paynantheine (รอยละ 8.6)
โครงสรางของ Mitragynine และ Isomers
NH
N
OCH3
CH2CH
3
OCH3
O
OCH3
9
3
4
20
1
15 19
17
16
7
m/z 398
C3H C15H C20H Speciogynine (normal) α α β Mitraciliatine (pseudo) β α β Mitragynine (allo) α α α Speciociliatine (epiallo) β α α
เปน Open E Ring Heteroyohimbine type alkaloids
NH
N
OCH3
CH2CH
3
OCH3
O
OCH3
9
3
4
20
15
m/e 398
-H
-CH3
-CH2CH3
-OCH3
m/e 397
m/e 383
m/e 369
m/e 367
NH
OCH3
CH2
NH
NH
OCH3
NH
N
OCH3
NH
NCH
2
OCH3
NH
N
OCH3
NH
N
OCH3
CHCH2CH
3CHCH
2CH
3CH
2
9
3
9
3
9
3
+
9
3
9
3
4
9
3
4
+
+
+
+
+
m/e 186 m/e 199
m/e 200 m/e 214
m/e 255 m/e 269
Possible m/z fragments from Mitragynine type Alkaloids
m/z ส าคญ: 398, 383, 214, 200, 255, 269, 281
Mass fragments of Mitragynine type Alkaloids
(mainlib) Corynan-16-carboxylic acid, 16,17-didehydro-9,17-dimethoxy-, methyl ester, (3á,16E)-
150 170 190 210 230 250 270 290 310 330 350 370 390 410
0
50
100
156 169
186 200
214
227
255
269 281297 311 328
342362
383398
O
NH
N
O O
O
(mainlib) Mitragynine
150 170 190 210 230 250 270 290 310 330 350 370 390 410
0
50
100
155 169
186 200
214
239255
269
281342
368
383
398
O
NH
N
OO
O
(mainlib) Corynan-16-carboxylic acid, 16,17-didehydro-9,17-dimethoxy-, methyl ester, (3á,16E,20á)-
150 170 190 210 230 250 270 290 310 330 350 370 390 410
0
50
100
156 169
186200
214
228255
269
281296 311
342368
383
398O
NH
N
O O
O
Mitragynine Mitraciliatine
(mainlib) Corynan-16-carboxylic acid, 16,17-didehydro-9,17-dimethoxy-, methyl ester, (16E)-
150 170 190 210 230 250 270 290 310 330 350 370 390 410
0
50
100
156 169
186
200
214
227 239
255
269281
312342
366
383
398
O
NHN
O
O
O
Speciociliatine Speciogynine
Possible m/z fragments from Corynantheidine type Alkaloids
NH
N
OCH3
CH2CH
3
OCH3
O
9
3
4
20
15
m/e 368
-H
-CH3
-CH2CH3
-OCH3
m/e 367
m/e 353
m/e 339
m/e 337
NH
CH2
+
NH
NH+
NH
N+
NH
N+
CH2
NH
NNH
N
CHCH2CH
3CHCH
2CH
3CH
2
3
9
3
9
3
9
3
9
m/e 156 m/e 169
m/e 170 m/e 184
3
9
3
9
+
+
m/e 225 m/e 239
m/e ส าคญ: 156, 169,184,
239, 368
Mass fragments of Corynantheidine type Alkaloids
(mainlib) Yohimbine
40 70 100 130 160 190 220 250 280 310 340 370
0
50
100
55 6777 91115 129
156
169
184
195221
235 251 267 293 323
353
O O
HO
N
NH
m/e ส าคญ: 156, 169,184, 239, 368
Yohimbine
Possible m/e fragments from Oxyndole type Alkaloids
NH
O
N
OCH3
CH2CH
3
OCH3
O
94
20
15
7
3
m/e 384
N
O
OCH3
OCH3
CH2
-OCH3
-CH2CH
3
-CH3
NCH
2
CH2
+
m/e 208
m/e 210
m/e 224
+
m/e 69
m/e 239
NH
OCH3
O
N
OCH3
CH2CH
3
OCH3
O
94
20
15
7
3
m/e 414 m/e ส าคญ: (414), 384, 239, 224
(mainlib) Speciofoline
60 90 120 150 180 210 240 270 300 330 360 390
0
50
100
69
110
129
146
160
208
224
239
283369 385
400
NH
O
N
OH
O
O
O
m/z ส าคญ: 384 (414), 239, 224, 210, 208, 69
Mass fragments of Oxyndole type Alkaloids
Speciofoline
วธการสกดปสสาวะอยางงาย สามารถใชเปนวธตรวจปสสาวะ เพอคดแยกผใช/ผกนใบกระทอม คอ
- ปรบ pH 9-9.5 ดวย sodium tetraborate
- สกดดวย EtOAc 5 ml x 2 ครง - แตละครงเขยา 5 นาท ดวย Vortex mixer
ปสสาวะ 10 ml
ชนน า ชน EtOAc
ทง
- เตม Anhyd. Sodium Sulphate เพอดดน าออก
ชน EtOAc
-ตงทงใหแหงในตดดควน
-ละลาย residue ดวย EtOAc 200 ul
ฉดเขาเครอง GC/MS 1 ul, EI mode
Solid Phase Extraction
DSC-MCAX SPE (Supelco):100 mg x 3ml
Mixed-mode cation exchange
Si (CH2)7CH3
(H2C)
2SO
3-H+Si
1. Condition Sorbent
2. Load Sample
3. Interference
Elution
4. Analyte Elution
Methanol
Water
Buffer
Eluted Interference
Analyte
ขนตอนการสกด SPE
Alkaloids (RT)
AK3 AK4 AK1 AK5 AK6 AK7 MG* AK2 SG**
Sample
Inject ng/μl
No. of Alkaloids
Found M+ 384 M
+ 384 M
+ 414 M
+ 414 M
+ 368 M
+ 414 M
+ 398 M
+ 396 M
+ 398
1
10.5 4 12.170 14.673 14.874 15.270
1
63 5 12.168 14.085 14.785 14.950 15.300
37.5 4 12.179 14.800 14.989 15.300
93.5 9 10.693 10.780 12.198 12.426 13.350 14.100 14.850 15.025 15.320
Average RT 10.693 10.780 12.179 ±0.014
12.426 13.350 14.093 ±0.011
14.777 ±0.075
14.979 ±0.036
15.297 ±0.021
สารอลคาลอยดทตรวจพบในพชกระทอม
สารอลคาลอยดทตรวจพบในปสสาวะผเสพใบกระทอม
ตวอยางปสสาวะ
Inject
ug/ul
ชนด ตรวจพบ
ตวอยาง1 37 4 12.139, 14.610, 14.872, 15.210
(414) (398) (396) (398)
ตวอยาง2
25 4 12.129, 14.614, 14.892, 15.199
(414) (398) (396) (398)
Mitragynine STD
2 mg/ml, inject 1 ul
(Text File) 15.174 min. Scan: 545 40.0:500.0> Ion: NA RIC: 3.823e+6 (BC)
40 90 140 190 240 290 340 390 440 490
0
50
100
4259
75
115158
200
214
239
269
281
309 342
367
383
398
420 462 485
สารอลคาลอยด 4 ชนดทตรวจพบในพชกระทอม
1 2
3 4
สารอลคาลอยด 4 ชนดทตรวจพบในปสสาวะผเสพใบกระทอม
1 2
3
4
Mass fragments of the 4 alkaloids
(Text File) 12.142 min. Scan: 512 50.0:450.0> Ion: NA RIC: 1.379e+7 (BC)
50 90 130 170 210 250 290 330 370 410
0
50
100
69
94110
129
146 176208
238
252270 291 310329 349
414
428
(Text File) 14.613 min. Scan: 653 50.0:450.0> Ion: NA RIC: 5.315e+6 (BC)
50 90 130 170 210 250 290 330 370 410 450
0
50
100
57
75
103
128148
186
214
227 250
269
281327 367
383
398
429 450
(Text File) 14.876 min. Scan: 668 50.0:450.0> Ion: NA RIC: 4.851e+6 (BC)
50 90 130 170 210 250 290 330 370 410 450
0
50
100
50
72
96
110
125148
159
175200
252
268
292325
357
396
417
(Text File) 15.209 min. Scan: 687 50.0:450.0> Ion: NA RIC: 4.892e+6 (BC)
50 90 130 170 210 250 290 330 370 410 450
0
50
100
64
77
108128
155186
207
269
282
341
357
383
398
429
1 2
3 4
สารอลคาลอยด 2 ชนดทตรวจพบในปสสาวะผเสพ 4x100
(Text File) 11.954 min. Scan: 493 50.0:450.0> Ion: NA RIC: 422480 (BC)
50 90 130 170 210 250 290 330 370 410 450
0
50
100
57
71
85
99
127156
184
197
207
224
239
254 295 321343
369
390
414
446
(Text File) 14.542 min. Scan: 639 50.0:450.0> Ion: NA RIC: 271238 (BC)
50 90 130 170 210 250 290 330 370 410 450
0
50
100
54
69
80
96
112
130
167186
214
231
281
317
359
384
398
419
449
10 ml urine, SPE, 50 ul EtOAc+50 ul BSTFA
1 2
1
2
สารอลคาลอยด 4 ชนด ทตรวจพบไดทงในใบกระทอมแหงใบสด กานใบและในปสสาวะผเสพใบกระทอม
1. 9-Methoxy Oxyndole
Alkaloid:
RT 12.179 (M 414)
2. Mitragynine:
RT 14.777(M 398)
3. Paynantheidine:
RT 14.979(M 396),
4. Speciogynine:
RT 15.297(M 398)
NH
OCH3
O
N
OCH3
CH2CH
3
OCH3
O
94
20
15
7
3
m/e 414
NH
N
OCH3
OCH3
O
OCH3
9
3
4
20
15
m/e 396
NH
N
OCH3
CH2CH
3
OCH3
O
OCH3
9
3
4
20
15
m/e 398
สามารถใชตรวจเอกลกษณพชกระทอม และตรวจปสสาวะเพอแยกผเสพยาได
2 (4)
3
1
สารอลคาลอยด 2 ชนด ทตรวจพบในปสสาวะผเสพ 4x100
1. 9-Methoxy Oxyndole Alkaloid:
RT 12.179 (M 414)
2. Mitragynine:
RT 14.777(M 398)
NH
OCH3
O
N
OCH3
CH2CH
3
OCH3
O
94
20
15
7
3
m/e 414
NH
N
OCH3
CH2CH
3
OCH3
O
OCH3
9
3
4
20
15
m/e 398
2
1