alatop allergy screen - dpcweb.com · 4 immulite 2500 alatop allergy screen (pil5kat-4, 2005-04-05)...

AlaTOP Allergy Screen

IMMULITE® 2500AlaTOP Allergy Screen

2 IMMULITE 2500 AlaTOP Allergy Screen (PIL5KAT-4, 2005-04-05)

English

Intended Use: For in vitro diagnostic usewith the IMMULITE 2500 Analyzer — forthe qualitative detection of IgE antibodiesspecific to inhalant allergens in serum, asan aid in the differential diagnosis ofatopic allergy.Catalog Number: L5KAT2 (200 tests)Test Code: TOP Color: Dark Gray

Summary and ExplanationIn patients with extrinsic asthma, hay feveror atopic eczema, symptoms may appearimmediately after exposure to specificallergens. Allergic response of this type(atopic or anaphylactic) is a function ofserum reagins, principally immunoglobulinE (IgE). IgE molecules act as points ofcontact between the allergen andspecialized cells that release histamineand other agents upon exposure to theallergen; this initiates the events which werecognize as allergic reactions.1,2 Whenevaluated in the light of other clinical andlaboratory findings, in vitro allergyscreening tests followed by allergen-specific IgE tests can help the physicianidentify the allergen (or allergens) to whichan individual is sensitive.5,6,7,8

Principle of the ProcedureIMMULITE 2500 AlaTOP Allergy Screen isa chemiluminescent enzyme-labeledsequential immunoassay, based on liquidligand-labeled allergens, monoclonalantibodies, and separation by anti-ligand-coated solid phase. AlaTOP assays use apatented technology (U.S. Patent No.4,778,751) exploiting liquid-phase kineticsin a bead format.3,4 It represents asignificant advance over conventionalmethods relying on allergens attached to asolid-phase support, such as a paper disk.

AlaTOP is unique in its use of allergens ina liquid format. The allergens arecovalently bound to a solublepolymer/copolymer matrix, which in turn is

labeled with a ligand; anti-ligand is coatedon the polystyrene bead to capture theligand-labeled allergens.Incubation: 60 minutes.

Specimen CollectionThe use of an ultracentrifuge isrecommended to clear lipemic samples.Hemolyzed samples may indicatemistreatment of a specimen before receiptby the laboratory; hence the results shouldbe interpreted with caution.Centrifuging serum samples before acomplete clot forms may result in thepresence of fibrin. To prevent erroneousresults due to the presence of fibrin,ensure that complete clot formation hastaken place prior to centrifugation ofsamples. Some samples, particularlythose from patients receivinganticoagulant therapy, may requireincreased clotting time.Blood collection tubes from differentmanufacturers may yield differing values,depending on materials and additives,including gel or physical barriers, clotactivators and/or anticoagulants.MMULITE 2500 AlaTOP Allergy Screenhas not been tested with all possiblevariations of tube types.Volume Required: 50 µL serum.Storage: 3 days at 2–8°C,9,10 or6 months at –20°C.10

Warnings and PrecautionsFor in vitro diagnostic use.Reagents: Store at 2–8°C. Dispose of inaccordance with applicable laws.

Follow universal precautions, and handleall components as if capable oftransmitting infectious agents. Sourcematerials derived from human blood weretested and found nonreactive for syphilis;for antibodies to HIV 1 and 2; for hepatitisB surface antigen; and for antibodies tohepatitis C.Sodium azide, at concentrations less than0.1 g/dL, has been added as a

IMMULITE 2500 AlaTOP Allergy Screen (PIL5KAT-4, 2005-04-05) 3

preservative. On disposal, flush with largevolumes of water to prevent the buildup ofpotentially explosive metal azides in leadand copper plumbing.Chemiluminescent Substrate: Avoidcontamination and exposure to directsunlight. (See insert.)Water: Use distilled or deionized water.

Materials SuppliedComponents are a matched set. Labels onthe inside box are needed for the assay.

AlaTOP Bead Pack (L2AT12)With barcode. 200 beads, coated withanti-ligand. Stable at 2–8°C untilexpiration date.L5KAT2: 1 pack.

AlaTOP Reagent Wedge (L2ATA2)With barcode. 11.5 mL allergen screen,with preservative. 11.5 mL alkalinephosphatase (bovine calf intestine)conjugated to monoclonal murine anti-IgEantibodies in buffer, with preservative.Stable at 2–8°C until expiration date.L5KAT2: 1 wedge.

Before use, tear off the top of the label atthe perforations, without damaging thebarcode. Remove the foil seal from the topof wedge; snap the sliding cover down intothe ramps on the reagent lid.

AlaTOP Adjustor (LATL)2 mL IgE-free human serum. Stable at 2–8°C for 30 days after opening. Do notfreeze.L5KAT2: 1 vial.Before making an adjustment, place theappropriate Aliquot Labels (supplied withthe kit) on test tubes so that the barcodescan be read by the on-board reader.

Alatop Allergy Screen Negative Control(L2ATC1)2 mL IgE-free human serum. Stable at 2–8°C for 4 months after opening, or until theexpiration date marked on the label. Donot freeze. Do not use if signs ofmicrobiological contamination, such as acloudy appearance, have occurred.L5KAT2: 1 vial.

Place the appropriate Aliquot Labels(supplied with the kit) on test tubes so that

the barcodes can be read by the on-boardreader.

AlaTOP Allergy Screen Positive Control(L2ATC2)2 mL human serum IgE specific for theIMMULITE 2500 AlaTOP Allergy Screenassay. Stable at 2–8°C for 4 months afteropening, or until the expiration datemarked on the label. Do not freeze. Do notuse if signs of microbiologicalcontamination, such as a cloudyappearance, have occurred.L5KAT2: 1 vial.

Place the appropriate Aliquot Labels(supplied with the kit) on test tubes so thatthe barcodes can be read by the on-boardreader.

Kit Components SuppliedSeparatelyL2SUBM: Chemiluminescent SubstrateL2PWSM: Probe WashL2KPM: Probe Cleaning KitLRXT: Reaction Tubes (disposable)Also RequiredDistilled or deionized water; test tubes.

Assay ProcedureNote that for optimal performance, it isimportant to perform all routinemaintenance procedures as defined in theIMMULITE 2500 Operator's Manual.

See the IMMULITE 2500 Operator'sManual for: preparation, setup, dilutions,adjustment, assay and quality controlprocedures.

Recommended Adjustment Interval:4 weeks.Quality Control Samples: The controlssupplied with the kit should be used tomonitor assay performance and thecontinued applicability of the storedreactive/nonreactive Cutoff.

Interpretation of ResultsReactive: A reactive result indicates thatantibodies to one or more of thecomponent allergens in the panel arepresent in the patient sample.Nonreactive: A nonreactive resultindicates nondetectable antibodies to thecomponent allergens.


LimitationsThe IMMULITE 2500 AlaTOP procedureprovides qualitative (reactive/nonreactive)results only. It does not provideinformation on the amounts of IgE specificfor any component allergens.

As with all diagnostic screening tests, adefinitive clinical diagnosis should not bebased on the result of a single test, butshould only be made by the physicianafter all clinical and laboratory findingshave been evaluated.Heterophilic antibodies in human serumcan react with the immunoglobulinsincluded in the assay components causinginterference with in vitro immunoassays.[See Boscato LM, Stuart MC. Heterophilicantibodies: a problem for allimmunoassays. Clin Chem 1988:34:27-33.] Samples from patients routinelyexposed to animals or animal serumproducts can demonstrate this type ofinterference potentially causing ananomalous result. These reagents havebeen formulated to minimize the risk ofinterference; however, potentialinteractions between rare sera and testcomponents can occur. For diagnosticpurposes, the results obtained from thisassay should always be used incombination with the clinical examination,patient medical history, and other findings.

Performance DataThe following sections contain datarepresentative of the IMMULITE 2500AlaTOP Allergy Screen kit's performance.Results are expressed in kCPS.Unless otherwise specified, all resultswere generated on serum samplescollected in tubes without anticoagulants,gel separators, or clot-promoting additives.The IMMULITE 2500 assay employs thesame reagent and bead formulation asIMMULITE 2000. All performancecharacteristics are equivalent between thetwo platforms.All performance data except MethodComparison 1 were generated on theIMMULITE 2000 analyzer.Precision: Samples were assayed induplicate over the course of 20 days, tworuns per day, for a total of 40 runs and 80replicates. (See “Precision” table.)

Specificity: The antibodies are highlyspecific for human IgE, with nocrossreactivity to other humanimmunoglobulins (IgA, IgD, IgG, IgM).Bilirubin: Presence of conjugated andunconjugated bilirubin in concentrationsup to 200 mg/L has no effect on results,within the precision of the assay.Hemolysis: Presence of hemoglobin inconcentrations up to 500 mg/dL has noeffect on results, within the precision of theassay.Lipemia: Presence of triglycerides inconcentrations up to 3,000 mg/dL has noeffect on results, within the precision of theassay.Method Comparison 1: IMMULITE 2500AlaTOP Allergy Screen was compared toIMMULITE 2000 AlaTOP Allergy Screenon 200 samples.

IML 2500 AlaTOP Allergy Screen

IMMULITE 2000 Nonreactive Reactive

Reactive 2 134

Nonreactive 64 0

Agreement: 99.0%Sensitivity: 98.5%; Specificity: 100.0%

Method Comparison 2: The IMMULITE2000 assay was compared to DPC'sIMMULITE AlaTOP (LKAT) on 110 patientspecimens.


IMMULITE Nonreactive Reactive

Reactive 0 64

Nonreactive 43 3

Agreement: 97.3%Sensitivity: 100%; Specificity: 93.5%

References1) Halpern GM. Markers of human allergicdisease. J Clin Immunoassay 1983;6:131–8. 2)Wide L, Bennich H, Johansson SGO. Diagnosisof allergy by an in vitro test for allergenantibodies. Lancet 1967;2:1105–7. 3) El ShamiAS, Alaba O. Liquid-phase in vitro allergen-specific IgE assay with in situ immobilization.Adv Biosci 1989;74:191–201. 4) Alaba O, ElShami AS. Evaluation of non-specific IgEbinding: comparison of two in vitro allergenassays. Adv Biosci 1989;74:203–14. 5)Lichtenstein LM, et al. IgE antibodymeasurements in ragweed hay fever;relationship to clinical severity and the results ofimmunotherapy. J Clin Invest 1973;52:472–82.6) Lowenstein H. Cross reactions among pollen


antigens. Allergy 1980;35:198–200. 7) WeberRW, Nelson HS. Pollen allergens and theirinterrelationships. Clin Rev Allergy 1985;3:291–318. 8) Merrett J, Merrett TG. Screening for IgE-mediated allergy. J Clin Immunoassay1993;16:164-72. 9) Bazaral M, Hamburger RN.Standardization and stability of immunoglobulinE (IgE). J Allergy 1972;49:189-91. 10) Tietz NW,editor. Clinical guide to laboratory tests. 3rd ed.Philadelphia: WB Saunders, 1995:358.

Technical AssistanceIn the United States, contact DPC'sTechnical Services department.Tel: 800.372.1782 or 973.927.2828Fax: 973.927.4101. Outside the UnitedStates, contact your National Distributor.The Quality System of Diagnostic ProductsCorporation is registered to ISO 13485:2003.

Tables and Graphs

Precision (kCPS)

Within-Run1 Total2

Mean3 SD4 CV5 SD CV

1 104 10.12 9.8% 10.84 10.5%

2 560 24.58 4.4% 25.76 4.6%

3 600 22.14 3.7% 23.52 3.9%

4 2,028 110 5.4% 107 5.3%

5 7,078 290.14 4.1% 305.47 4.3%

6 25,829 1,685 6,5% 1,549 6.0%

Deutsch. Precision: 1Intra-Assay, 2Gesamt,3Mittelwert, 4SD (Standardbereich), 5CV(Variationskoeffizient).

Español. Precision: 1 Intraensayo, 2Total,3Media, 4DS, 5CV.

Français. Precision: 1Intraessai, 2Total,3Moyenne, 4SD, 5CV.

Italiano. Precision: 1Intra-serie, 2Totale, 3Media,4SD (Deviazione Standard), 5CV (Coefficiente diVariazione).

Português. Precision: 1Entre-ensaios, 2Total,3Média, 4Desvio padrão, 5Coeficiente devariação.

Deutsch

IMMULITE 2500AlaTOP Allergie-ScreeningtestAnwendung: Zur in vitro-Diagnostik unterVerwendung des IMMULITE 2500 Sytems- zur qualitativen Bestimmung vonspezifischen IgE-Antikörpern gegenInhalationsallergene im Serum zurDifferenzialdiagnose bei allergischerAtopie.Artikelnummer: L5KAT2 (200 Tests)Testcode: TOP Farbe: dunkelgrau

Klinische RelevanzPatienten mit allergischem Asthma,Heuschnupfen oder Atopischer Dermatitiskönnen bereits kurz nach Allergenkontakttypische Symptome einer Allergieentwickeln. Diese atopischen oder garanaphylaktischen Symptome sind durchim Serum enthaltene Reagine,insbesondere dem IgE-Antikörper,vermittelt. IgE-Antikörper dienen alsBrücke zwischen Allergenen undsensibilisierten Zellen, die auf einenallergenen Reiz hin Histamin u. a.Mediatoren ausschütten. Dieser Vorgangleitet die uns mit allergischen Symptomenbekannte Reaktion ein. Neben anderenklinischen und labordiagnostischen Daten,kann der in vitro-Allergie-Screeningtest,gefolgt von spezifischen IgE-Tests gegenEinzelallergene, dem Arzt helfen, dasAllergen zu identifizieren, gegen das derPatient sensibilisiert ist.5,6,7,8

MethodikDer IMMULITE 2500 AlaTOP Allergie-Screeningtest ist ein Chemilumineszenz-Enzymimmunoassay, basierend aufflüssigen, ligandmarkierten Allergenen,monoklonalen Antikörpern und einer mitantiligand beschichteten Festphase zurTrennung. AlaTOP basiert auf einerpatentierten Technologie (U.S. Patent No.4 778 751), die die Vorteile derFlüssigphasen-Kinetik undFestphasentrenntechnik (Kugel) vereint.Diese Technologie bietet enorme Vorteilegegenüber herkömmlichen Methoden, dieAllergene an Festphasen wie zum Beispiel


Papierscheiben koppelt. AlaTOP isteinzigartig in der Nutzung von Allergenenin Flüssigphase. Die Allergene sindkovalent an eine löslichePolymer/Kopolymer-Matrix gebunden, ander wiederum ein Ligand ist. Derentsprechende Antiligand ist an diePolystyrolkugel gebunden, so dass ligand-markierte Allergene fixiert werden.Inkubation: 60 Minuten.

ProbengewinnungDer Einsatz einer Ultrazentrifuge wird zurKlärung von lipämischen Probenempfohlen.Hämolyse kann auf eine unsachgemäßeBehandlung der Probe vor dem Eintreffenim Labor hinweisen. Dies sollte bei derBeurteilung der Ergebnisse einer solchenProbe berücksichtigt werden.

Die Zentrifugation der Serumproben vordem völligen Abschluss der Gerinnungkann zu Fibringerinnseln führen. Umfehlerhaften Analysenergebnissen infolgevon Gerinnseln vorzubeugen, istsicherzustellen, dass die Gerinnung vorder Zentrifugation der Proben vollständigabgeschlossen ist. Insbesondere Probenvon Patienten unter Antikoagulantien-therapie können eine verlängerteGerinnungszeit aufweisen.Blutentnahmeröhrchen von verschiedenenHerstellern können differierende Werteverursachen. Dies hängt von denverwendeten Materialien und Additiven(Gel oder physische Trennbarrieren,Gerinnungsaktivatoren und /oderAntikoagulantien) ab. IMMULITE 2500AlaTOP Allergie-Screeningtest sind nichtmit allen möglichen Röhrchenvariationenausgetestet worden.Probenvolumen: 50 µl Serum.

Lagerung: 3 Tage bei 2–8°C,9,10 oder6 Monate bei –20°C.10

Hinweise undVorsichtsmaßnahmenZur In-vitro-Diagnostik.

Reagenzien: Bei 2–8°C lagern. UnterEinhaltung der geltenden gesetzlichenVorschriften entsorgen.Die generell geltendenVorsichtsmaßnahmen sind einzuhalten

und alle Komponenten als potenziellinfektiös zu behandeln. Alle ausmenschlichem Blut gewonnenenMaterialien wurden auf Syphilis,Antikörper gegen HIV-1 und HIV-2,Hepatitis-B-Oberflächenantigen undHepatitis-C-Antikörper untersucht undnegativ befundet.

Bestimmten Komponenten wurdeNatriumazid (<0,1 g/dl) hinzugefügt. Umdie Bildung von explosiven Metallaziden inBlei- und Kupferrohren zu vermeiden,sollten die Reagenzien nur zusammen mitgroßen Wassermengen in die Kanalisationgespült werden.Chemilumineszenz-Substrat:Kontamination und direkteSonneneinstrahlung vermeiden (SiehePackungsbeilage).Wasser: Destilliertes oder deionisiertesWasser verwenden.

Im Lieferumfang enthaltenDie Bestandteile der Testpackung sindaufeinander abgestimmt. Die Barcode-Aufkleber auf der Innenverpackungwerden zur Testdurchführung gebraucht.

AlaTOP Kugel-Kontainer (L2AT12)Der barcodierte Kugel-Container enthält200 Kugeln, beschichtet mit Anti-Ligand.Gekühlt (2–8°C) haltbar bis zumangegebenen Verfallsdatum.L5KAT2: 1 Container.

AlaTOP Reagenzbehälter (L2ATA2)Mit Barcode. 11,5 ml Allergenscreen, mitKonservierungsstoffen. 11,5 ml mitalkalischer Phosphatase des Rindesmarkierter monoklonaler Anti-IgEMausantikörper im Puffer, mitKonservierungsstoffen. Bei 2–8°C bis zumVerfallsdatum haltbar.L5KAT2: 1 Container.

Vor Gebrauch den Aufkleber an derPerforation abreißen, ohne dabei dieBarcodierung zu beschädigen. Die Folievon der Oberseite des Kontainersentfernen. Den Schiebedeckel nach untenin die Führung des Reagenziendeckelseinrasten lassen.

AlaTOP Kalibrator (LATL)2 ml IgE-freies Human-Serum. 30 Tagenach dem Öffnen bei 2–8°C haltbar. Nicht


einfrieren.L5KAT2: 1 Flasche.

Vor der Kalibrierung die entsprechendenvorgedruckten Aufkleber (dem Kitbeiliegend) auf Röhrchen kleben, so dassdie Barcodes vom Barcodereader desSystems gelesen werden können.

AlaTOP Allergie-Screening Negativ-Kontrolle (L2ATC1)2 ml IgE-Antikörperfreie humane Serum-Matrix. Bei 2–8°C für 4 Monate nach demÖffnen oder bis zum Verfallsdatum aufdem Etikett haltbar. Nicht einfrieren. BeiAnzeichen mikrobieller Kontamination(Trübung) verwerfen.L5KAT2: 1 Flasche.Kleben Sie den im Kit enthaltenenvorgedruckten Barcode auf das Röhrchenmit der Kontrolle, so dass er vomBarcodereader im Gerät gelesen werdenkann.

AlaTOP Allergie-Screening Positiv-Kontrolle (L2ATC2)2 ml humanes Serum mit IgE-Antikörpern,spez. für IMMULITE 2500 AlaTOPAllergie-Screening. Bei 2–8°C für4 Monate nach dem Öffnen oder bis zumVerfallsdatum auf dem Etikett haltbar.Nicht einfrieren. Bei Anzeichenmikrobieller Kontamination (Trübung)verwerfen.L5KAT2: 1 Flasche.Kleben Sie den im Kit enthaltenenvorgedruckten Barcode auf das Röhrchenmit der Kontrolle, so dass er vomBarcodereader im Gerät gelesen werdenkann.

Separat erhältliche Testsystem-KomponentenL2SUBM: Chemilumineszenz-SubstratmodulL2PWSM: WaschmodulL2KPM: ReinigungsmodulLRXT: Einweg-ReaktionsgefäßeEbenfalls benötigt:destilliertes bzw. deionisiertes Wasser;Probenröhrchen.

TestdurchführungFür eine optimale Funktion des Gerätes istunbedingt zu beachten, dass dieWartungen, wie im IMMULITE 2500-

Handbuch beschrieben, regelmäßigdurchgeführt werden.

Die Angaben zur Vorbereitung,Einrichtung, Kalibration, Test- undQualitätskontrollverfahren entnehmen Siebitte dem IMMULITE 2500 Handbuch.Kalibrationsintervall: 4 Wochen.

Proben zur Qualitätskontrolle: Die im Kitenthaltenen Kontrollen sollten im Sinneeiner Qualitätskontrolle zur Überprüfungder Testdurchführung und zurfortlaufenden Kontrolle des gespeichertenreaktiv/nicht reaktiv cut-off dienen.

Interpretation der ErgebnisseReaktiv: Das Ergebnis "reaktiv" deutet aufvorhandene Antikörper gegen eine odermehrere im Panel enthalteneKomponenten hin.Nicht reaktiv: Das Ergebnis "nichtreaktiv" deutet auf nicht nachweisbareAntikörper gegen die im Panel enthalteneKomponenten hin.

Grenzen der MethodeDer IMMULITE 2500 AlaTOP liefertlediglich qualitative (reaktiv/nicht reaktiv)Testergebnisse. Er gibt keine Auskunftüber die Menge spezifischer IgE-Antikörper für die einzelnenAllergenkomponenten .

Wie für alle diagnostischen Screeningtestsgilt auch hier, dass eine klinischeDiagnose nicht nur auf der Basis einesTests beruhen sollte. Diese sollte der Arztaufgrund der vollständigen klinischen undlabordiagnostischen Ergebnisse erstellen.Heterophile Antikörper in Humanserenkönnen mit Immunglobulinen aus denAssaykomponenten reagieren undInterferenzerscheinungen innerhalb des invitro-Immunoassays verursachen. (sieheBoscato LM, Stuart MC. Heterophilicantibodies: a problem for allimmunooassay. Clin. Chem. 1998:34:27-33). Proben von Patienten, die häufig mitTier- bzw. Tierserumprodukten in Kontaktstehen, können die erwähntenInterferenzen verursachen und anomaleResultate zeigen. Die verwendetenReagenzien sind so konzipiert, dass dasRisiko einer Interferenz mit den zumessenden Proben minimiert ist. Dennochkönnen Interaktionen zwischen seltenen


Seren und den Testkomponentenauftreten. Zu diagnostischen Zweckensollten die mit dem Assay erhaltenenErgebnisse immer im Zusammenhang mitder klinischen Untersuchung, derPatientenanamnese und anderenBefunden gesehen werden.

LeistungsdatenDie folgenden Abschnitte zeigen Daten,die für den AlaTOP Allergie-Screeningtestauf dem IMMULITE 2500 gelten. DieErgebnisse sind in kCPS dargestellt.Sofern nicht anders angegeben, wurdenhierfür Serumproben in Röhrchen ohneGeltrennung und Gerinnungshilfeneingesetzt.Der IMMULITE 2500 verwendet diegleichen Reagenzien und Kugeln wie derIMMULITE 2000. Dadurch ist dieAssaycharakteristik auf beiden Systemengleichwertig.Alle Leistungsdaten, mit Ausnahme desMethodenvergleichs 1, wurden auf demIMMULITE 2000 System generiert.Präzision: Proben wurden innerhalb von20 Tagen mit jeweils zwei Testansätzen inDoppelbestimmung gemessen (insgesamt40 Testläufe und 80Doppelbestimmungen). (Siehe “Precision”Tabelle.)

Spezifität: Die verwendeten Antikörpersind hochspezifisch für humanes IgE undzeigen keine Kreuzreaktivität mit anderenhumanen Immunglobulinen (IgA, IgD, IgG,IgM).Bilirubin: Unkonjugiertes undkonjugiertes Bilirubin hat inKonzentrationen bis 200 mg/l keinenEinfluss auf die Ergebnisse, der größer alsdie Impräzision des Assays selbst ist.Hämolyse: Hämoglobin hat inKonzentrationen bis zu 500 mg/dl keinenEinfluss auf die Ergebnisse, der größer alsdie Impräzision des Assays selbst ist.Lipämie: Triglyceride haben inKonzentrationen bis zu 3 000 mg/dlkeinen Einfluss auf die Ergebnisse, dergrößer als die Impräzision des Assaysselbst ist.Methodenvergleich 1: DerIMMULITE 2500 AlaTOP Allergy ScreenAssay wurde unter Verwendung von 200Patientenproben mit dem IMMULITE 2000

AlaTOP Allergy Screen Assay der DPCverglichen.


IMMULITE 2000 Nicht reaktiv Reaktiv

Reaktiv 2 134

Nicht reaktiv 64 0

Übereinstimmung: 99,0%Sensitivität: 98,5%; Spezifität: 100,0%

Methodenvergleich 2: Der Assay wurdeunter Verwendung von 110Patientenproben mit dem IMMULITEAlaTOP Assay der DPC (LKAT)verglichen.


IMMULITE Nicht reaktiv Reaktiv

Reaktiv 0 64

Nicht reaktiv 43 3

Übereinstimmung: 97,3%Sensitivität: 100%; Spezifität: 93,5%

AnwendungsberatungBei Rückfragen wenden Sie sich bitte an IhreDPC Niederlassung.

Das Qualitätssystem der Diagnostic ProductsCorporation ist nach ISO 13485:2003 registriert.

Español

IMMULITE 2500AlaTOP Screening de AlergiaUtilidad del test: Para uso en diagnósticoin vitro con el autoanalizador IMMULITE2500 — para la detección de anticuerposIgE especificos frente a alergenosinhalantes en suero, como ayuda para eldiagnostico diferencial de la alergiaatópica.Nº de Catálogo: L5KAT2 (200 tests)Código del Test: TOP Color: Gris oscuro

Resumen y Explicacióndel TestEn pacientes con asma, fiebre alta oeczema atópico, los síntomas puedenaparecer inmediatamente después de laexposición a alergenos específicos. Estetipo de respuesta alérgica (atópica oanafiláctica) es provocada por las


reaginas del suero, principalmenteinmunoglobulina E (IgE). Las moléculasIgE actuan como puntos de contacto entrelos alergenos y células especializadas enla emisión de histamina y otros agentestras la exposición al alergeno; el inicio deestos sucesos es conocido como reacciónalérgica.1,2 Cuando son evaluados losdatos clínicos y otros datos por parte dellaboratorio, los test de screening dealergenos seguidos por la determinaciónde IgE alergeno-específica ayudan alfacultativo en la identificación del alergeno(o alergenos) a los cuales es sensible elpaciente.5,6,7,8

Principio del AnálisisIMMULITE 2500 AlaTOP Screening dealergenos es un ensayo porquimioluminiscencia, basado en alergenosen fase liquida, anticuerposmonoclonales, y separación por anti-ligando unido a la fase sólida. El ensayoAlaTOP usa una tecnología patentada(U.S. Patent No. 4 778 751) conjugando lacinética en fase líquida sobre el formatode la bola de poliestireno.3,4 Lo cualrepresenta un avance significativo sobreotros métodos convencionales basadosen la detección de alergenos unidos a unafase sólida, como los discos de celulosa.

AlaTOP es único en el uso de alergenosen fase líquida. Los alergenos estáncovalentemente unidos a una matrizpolímero-copolímero soluble, la cual tienetambién unida un ligando; el anti-ligandoesta recubriendo la bola de poliestireno afin de capturar los alergenos unidos a eseligando.Incubación: 60 minutos.

Recogida de la muestraSe recomienda el uso de unaultracentrífuga para aclarar las muestraslipémicas.Las muestras hemolizadas podrían indicaruna mala manipulación de la muestraantes de ser recibida por el laboratorio; eneste caso, los resultados debeninterpretarse con precaución.

La centrifugación de los sueros antes dela formación completa del coágulo puededar como resultado la presencia de fibrina.Para prevenir estos resultados erróneosdebidos a la presencia de fibrina,

asegurese que se forma completamenteel coagulo antes de centrifugar lasmuestras. Algunas muestras,particularmente de aquellos pacientesrecibiendo terapia anticoagulante, podríannecesitar mayor tiempo de coagulación.Los tubos para recoger sangre dedistintos fabricantes pueden producirvalores diferentes, dependiendo delmaterial del tubo y de los aditivos,incluyendo barreras de gel o barrerasfísicas, activadores de la coagulación y/oanticoagulantes. El AlaTOP Screening deAlergia IMMULITE 2500 no ha sidoanalizado con todos los distintos tipos detubos.Volumen Requerido: 50 µl suero.

Conservación: 3 días 2–8°C,9,10 o6 meses a –20°C.10

Advertencias y PrecaucionesPara uso diagnóstico in vitro.Reactivos: Mantener a 2–8°C. Desecharde acuerdo con las normas aplicables.Siga las precauciones universales ymanipule todos los componentes como sifueran capaces de transmitir agentesinfecciosos. Los materiales derivados desangre humana han sido analizados y sonnegativos para sífilis; para anticuerposfrente al HIV 1 y 2; para el antígeno desuperficie de hepatitis B y para losanticuerpos de hepatitis C.Se ha usado Azida sodica, enconcentraciones menores de 0,1 g/dl,como conservante. Para su eliminación,lavar con grandes cantidades de aguapara evitar la constitucion de residuos deazidas metalicas, potencialmenteexplosivas, en las cañerias de cobre yplomo.Substrato quimioluminiscente: Evitar lacontaminación y exposición a la luzdirecta del sol. (Ver el prospecto).Agua: Usar agua destilada o desionizada.

Materiales SuministradosLos componentes representan un juegocompleto. Las etiquetas incluidas en lacaja son necesarias para el ensayo.

Cartucho de bolas de AlaTOP (L2AT12)Con códigos de barras. 200 bolas,recubiertas con antiligando. Estable a


2–8°C hasta la fecha de caducidad.L5KAT2: 1 cartucho.

Vial de reactivo de AlaTOP (L2ATA2)Con códigos de barras. 11,5 ml screeningde alergenos. 11,5 ml fosfatasa alcalina(intestino bovino) conjugada a unanticuerpo monoclonal de ratón anti-IgEhumana en buffer, con conservante.Estable a 2–8°C hasta la fecha decaducidad.L5KAT2: 1 vial.Antes de usar, cortar la parte superior dela etiqueta en la perforación, sin dañar elcódigo de barras. Quitar el precinto delorificio del vial; encajar la cubiertadeslizante en las rampas de la tapa delreactivo.

Ajustador AlaTOP (LATL)2 ml de suero humano libre de IgE.Estable a 2–8°C durante 30 días despuésde abrirse. No congelar.L5KAT2: 1 vial.Antes de hacer un ajuste, colocar lasetiquetas a las alícuotas apropiadas(suministradas con el kit) sobre tubos deensayo, de forma tal que los códigos debarras puedan ser leídos por el lector.

Control Negativo AlaTOP Screening deAlergenos (L2ATC1)Un vial que contiene 2 ml libres de IgEespecifica en suero humano. Estable a 2–8°C durante 4 meses después de suapertura, o hasta la fecha de caducidadmarcada en la etiqueta. No congelar. Noutilizar si muestra signos decontaminación microbiana, la cual darálugar a una apariencia turbia.L5KAT2: 1 vial.Antes de hacer un ajuste, colocar lasetiquetas a las alícuotas apropiadas(suministradas con el kit) sobre tubos deensayo, de forma tal que los códigos debarras puedan ser leídos por el lector.

Control Positivo (L2ATC2) AlaTOPScreening de AlergenosUn vial que contiene 2 ml de IgEespecifica en suero humano para elensayo IMMULITE 2500 AlaTOPScreening de Alergenos. Estable a 2–8°Cdurante 4 meses después de su apertura,o hasta la fecha de caducidad marcada enla etiqueta. No congelar. No utilizar simuestra signos de contaminación

microbiana, la cual dará lugar a unaapariencia turbia.L5KAT2: 1 vial.Colocar las etiquetas a las alícuotasapropiadas (suministradas con el kit)sobre tubos de ensayo, de forma tal quelos códigos de barras puedan ser leídospor el lector.

Componentes del kit que sesuministran por separadoL2SUBM: Substrato quimioluminiscenteL2PWSM: Lavado de sondaL2KPM: Kit de limpieza de sondaLRXT: Tubos de reacción (desechables)

También necesariosAgua destilada o desionizada; tubos deensayo.

EnsayoNótese que para una óptima ejecución, esimportante realizar los procedimientos demantenimiento rutinario definidos en elmanual del operador IMMULITE 2500.Ver el Manual del Operador IMMULITE2500 para: preparación, inicialización,diluciones, ajuste, ensayo yprocedimientos de control de calidad.Intervalo de ajuste: 4 semanas.Muestras de Control de Calidad: Utilizarcontroles suministrados con el kit paramonitorizar el ensayo y su continuaaplicabilidad en base al punto de cortereactivo / no reactivo establecido.

Interpretación de losresultadosReactivo: Un resultado reactivo indicaque los anticuerpos frente a uno o más delos componentes alérgenicos del panelestán presentes en la muestra delpaciente.No reactivo: Un resultado no reactivoindica la no detección de anticuerposfrente a los componentes alergénicos.

LimitacionesEl ensayo IMMULITE 2500 AlaTOP sóloofrece resultados cualitativos (reactivo /no reactivo). No ofrece ningunainformación sobre las cantidades de IgEespecíficas para ningún componentealergenico.


Como todos los test diagnósticos descreening, un diagnóstico clínico definitivono debe estar basado en el resultado deun único test, y debería ser realizado porel facultativo después de evaluar todos losdatos clínicos y el resto de pruebas dellaboratorio.Los anticuerpos heterofílicos en el suerohumano pueden reaccionar con lasinmunoglobulinas de los componentes delensayo provocando interferencias con losinmunoanálisis in vitro. [Ver Boscato LM,Stuart MC. Heterophilic antibodies: aproblem for all immunoassays. Clin Chem1988:34:27-33.] Las muestras de lospacientes que frecuentemente estánexpuestos a animales o a productosséricos animales pueden presentar estetipo de interferencia que potencialmenteocasione un resultado anómalo. Estosreactivos han sido formulados paraminimizar el riesgo de interferencia, noobstante, pueden darse interaccionesanómalas entre sueros conflictivos y loscomponentes del ensayo. Con fines dediagnóstico, los resultados obtenidos coneste ensayo siempre deben ser usados encombinación con el examen clínico, lahistoria médica del paciente y cualquierotro dato clínico relevante.

Características AnalíticasPara ver resultados representativos de lascaracterísticas del ensayo IMMULITE2000 AlaTOP Screening de Alergenos verlas tablas y los gráficos. Los resultadosson expresados en kCPS

A no ser que se indique lo contrario, todoslos resultados fueron generados enmuestras de suero recogidas en tubos singeles o activadores de la coagulación.El IMMULITE 2500 usa la mismaformulación de reactivos y bolas que elIMMULITE 2000. Todas las característicasanalíticas son equivalentes en las dosplataformas.

Todos los datos excepto Comparación deMétodos 1 fueron generados con elanalizador IMMULITE 2000.Precisión: Las muestras fueronanalizadas por duplicado durante 20 días,en dos tandas de trabajo por día, para untotal de 40 tandas y 80 replicados. (Ver latabla de “Precision”.)

Especificidad: El anticuerpo es altamenteespecifico para IgE humana, nomostrando reacción cruzada frente a otrasinmunoglobulinas (IgA, IgD, IgG, IgM)..(Ver la tabla de “Especificidad”).

Bilirrubina: La presencia de bilirrubinaconjugada y no conjugada, enconcentraciones hasta 200 mg/L, no tieneningún efecto sobre los resultados entérminos de precisión.Hemólisis: La presencia de hemoglobina,en concentraciones hasta 500 mg/dL, notiene ningún efecto sobre los resultadosen términos de precisión.

Lipemia: La presencia de triglicéridos, enconcentraciones hasta 3 000 mg/dL, notiene ningún efecto sobre los resultadosen términos de precisión.

Metodo Comparativo 1: IMMULITE 2500AlaTOP Screening de alergenos fuecomparado con IMMULITE 2000 AlaTOPScreening de alergenos en 200 pacientes.

IML 2500 AlaTOP Screening dealergenos

IMMULITE 2000 No reactivo Reactivo

Reactivo 2 134

No reactivo 64 0

Correlación: 99.0%Sensibilidad: 98.5%; Especificidad: 100.0%

Metodo Comparativo 2: IMMULITE 2000AlaTOP Screening de alergenos fuecomparado con IMMULITE AlaTOPScreening de alergenos (LKAT) en 110pacientes.

IML 2000 AlaTOP Screening dealergenos

IMMULITE No reactivo Reactivo

Reactivo 0 64

No reactivo 43 3

Correlación: 97,3%Sensibilidad: 100%; Especificidad: 93,5%

Asistencia técnicaPóngase en contacto con el distribuidornacional.El Sistema de Calidad de Diagnostic ProductsCorporation está registrado para laISO 13485:2003.


Français

IMMULITE 2500 AlaTOPDomaine d'utilisation : dosage des IgEspécifiques des pneumallergènes dans lesérum. Ce test est réservé à un usagediagnostique in vitro avec l'analyseurIMMULITE 2500 et constitue une aide audiagnostic différentiel de l'allergieatopique.Référence catalogue : L5KAT2 (200 tests)Code produit : TOPCode couleur : Gris foncé

IntroductionChez les patients souffrant d'asthmeextrinsèque, de rhume des foins oud'eczéma atopique, les symptômespeuvent apparaître immédiatement aprèsexposition aux allergènes spécifiques. Laréponse allergique de ce type (atopiqueou anaphylactique) est une fonction desréagines sériques, principalementl'immunoglobuline E (IgE). les moléculesd'IgE agissent comme des points decontact entre l'allergène et les cellulesspécialisées qui relarguent l'histamine etd'autres agents lors de l'exposition àl'allergène; c'est l'initiation desévénements que nous reconnaissonscomme réactions allergiques.1,2 Etudiésconjointement à la clinique et aux autresrésultats de laboratoire, les dosages invitro d'IgE spécifiques peuvent aider leclinicien à identifier l'allergène (ou lesallergènes) auquel est sensibilisé lepatient.5,6,7,8

Principe du testLe test IMMULITE 2500 AlaTOP est unimmunodosage séquentielchimiluminescent utilisant un mélanged'allergènes liquides (associés à unligand), des anticorps monoclonaux et unanti-ligand fixé sur une phase solide. Ledosage AlaTOP utilise une technologiebrevetée (Brevet U.S. No. 4 778 751)exploitant une cinétique en phase liquidesur un format de bille.3,4 Cela représenteune avancée significative par rapport auxméthodes conventionnelles reposant surdes allergènes fixés sur une phase solide,telle qu'un disque de papier.

AlaTOP est unique dans son utilisationd'allergènes en milieu liquide. Lesallergènes sont fixés par covalence à unematrice polymère/copolymère qui estmarquée par un ligand. L'anti-ligand dontest revêtu la bille de polystyrène captureles allergènes marqués par le ligand.Incubation : 60 minutes.

Recueil des échantillonsIl est recommandé de clarifier leséchantillons hyperlipémiques parultracentrifugation.Des échantillons hémolysés peuvent êtresigne d'une souffrance du prélèvementavant son arrivée au laboratoire ; il faudradonc interpréter les résultats avecprudence.La centrifugation des échantillonssériques avant la formation complète ducaillot peut entraîner la présence defibrine. Pour éviter les résultats erronésdûs à la présence de fibrine, s'assurer dela formation complète du caillot avant decentrifuger les échantillons. Certainséchantillons, en particulier ceux provenantde patients sous anti-coagulants, peuventnécessiter un temps plus long pour laformation du caillot.Des tubes pour prélèvements sanguinsprovenant de fabricants différents peuventdonner des résultats différents, selon lesmatériaux et additifs utilisés, y comprisgels ou barrières physiques, activateursde la coagulation et/ou anticoagulants. Lecoffret AlaTOP IMMULITE 2500 n'a pasété testé sur tous les types de tubespossibles. Veuillez consulter le chapitreintitulé Autres Types d'Échantillons pourplus de renseignements sur les tubes quiont été évalués.Volume nécessaire : 50 µl de sérum.

Conditions de conservation :3 jours à +2°C/+8°C9,10 ou 6 moisà -20°C.10

Précautions d'emploiRéservé à un usage diagnostique in vitro.Réactifs : conserver les réactifs à +2/+8°C. Eliminer les déchets conformémentà la réglementation en vigueur.Respecter les précautions d'emploi etmanipuler tous les composants du coffretcomme des produits potentiellement


infectieux. Les réactifs dérivés de produitshumains et utilisés dans ce coffret ont subiun test sérologique pour la Syphilis et destests de dépistage pour les anticorps anti-VIH1 et 2, anti-VHC et pour l'antigène desurface de l'hépatite B, qui se sont tousavérés négatifs.De l'azide de sodium à des concentrationsinférieures à 0,1 g/dl a été ajouté commeconservateur ; lors de l'élimination,l'évacuer avec de grandes quantités d'eaupour éviter une accumulation d'azidesmétalliques explosifs dans lescanalisations.Substrat chimiluminescent : éviter toutecontamination et l'exposition directe à lalumière solaire (voir la fiche technique).

Eau : utiliser de l'eau distillée oudésionisée.

Matériel fourniLes composants de la trousse ne peuventêtre utilisés que conjointement. Lesétiquettes à l'intérieur du coffret sontnécessaires au dosage.

Cartouche de billes AlaTOP (L2AT12)Avec code-barre. 200 billes revêtues d'unanti-ligand. Stable à +2°C/+8°C jusqu'à ladate d'expiration.L5KAT2: 1 cartouche.

Cartouche réactif (L2ATA2)Avec code-barre. 11,5 ml d'allergènesdans un conservateur. 11,5 ml d'anticorpsmonoclonal murin anti-IgE marqué à laphosphatase alcaline (intestins de veau)dans un tampon, avec conservateur.Stable à +2°C/+8°C jusqu'à la dated'expiration.L5KAT2: 1 cartouche. Avant l'emploi, retirer la partie supérieurede l'étiquette au niveau des perforationsen ayant soin de ne pas endommager lecode-barres. Retirer le film protecteursitué sur la partie supérieure de lacartouche-réactif ; insérer le couverclecoulissant entre les glissières sur ledessus de la cartouche-réactif.

Ajusteur AlaTOP (LATL)2 ml de sérum humain sans IgE. Stable à+2°C/+8°C pendant 30 jours aprèsouverture. Ne pas congeler.L5KAT2: 1 flacon.

Avant de réaliser un ajustement, placerl'étiquette correspondante (fournie dans lecoffret) sur les tubes de manière à ce quele code-barre puisse être lu par le lecteurcode-barre.

Contrôle négatif AlaTOP (L2ATC1)2 ml de sérum humain sans IgE. Stable à+2°C/+8°C pendant 4 mois aprèsouverture ou jusqu'à la date d'expirationindiquée sur l'étiquette. Ne pas congeler.Ne pas utiliser si des signes decontamination microbienne, comme unaspect trouble, sont observés.L5KAT2: 1 flacon.Avant de réaliser un contrôle, placerl'étiquette correspondante (fournie dans lecoffret) sur les tubes de manière à ce quele code-barre puisse être lu par le lecteurcode-barre.

Contrôle positif AlaTOP (L2ATC2)2 ml de sérum humain contenant des IgEspécifiques des dosages IMMULITE 2500AlaTOP. Stable à +2°C/+8°C pendant 4mois après ouverture ou jusqu'à la dated'expiration indiquée sur l'étiquette. Nepas congeler. Ne pas utiliser si des signesde contamination microbienne, comme unaspect trouble, sont observés.L5KAT2: 1 flacon.Avant de réaliser un contrôle, placerl'étiquette correspondante (fournie dans lecoffret) sur les tubes de manière à ce quele code-barre puisse être lu par le lecteurcode-barre.

Composants du coffret fournisséparémentL2SUBM : Substrat chimiluminescentL2PWSM : Solution de lavageL2KPM : Coffret de décontamination del'aiguille de prélèvementLRXT : Godets réactionnels (jetables)Egalement nécessaire :Eau distillée ou désionisée ; tubes.

Protocole de dosageNoter que pour des performancesoptimales, il est important de réalisertoutes les procédures de maintenance deroutine selon les instructions du Manueld'Utilisation IMMULITE 2500.Voir le manuel d'utilisation de l'IMMULITE2500 pour la préparation, le démarrage du


système, les ajustements, le dosage et lesprocédures de contrôle de qualité.Intervalle d'ajustement : 4 semaines.

Protocole de dosageNoter que pour des performancesoptimales, il est important de réalisertoutes les procédures de maintenance deroutine selon les instructions du Manueld'Utilisation IMMULITE 2500.Voir le manuel d'utilisation de l'IMMULITE2500 pour la préparation, le démarrage dusystème, les ajustements, le dosage et lesprocédures de contrôle de qualité.Intervalle d'ajustement : 4 semaines.

Echantillons pour le contrôle dequalité : Les contrôles fournis dans lecoffret doivent être utilisés pour le suivides performances du coffret et lavalidation du seuil réactif / non-réactifsauvegardé.

Interprétation des résultatsRéactif: Un résultat « réactif » indique quedes anticorps spécifiques d'un ouplusieurs des allergènes composant lepanel sont présents dans l'échantillon dupatient.

Non-réactif: un résultat « non-réactif »indique que les anticorps spécifiques desallergènes testés sont indétectables.

LimitesLe test IMMULITE 2500 AlaTOP fournituniquement des résultats qualitatifs(Réactif / Non-réactif). Il ne fournit aucuneinformation sur les taux d'IgE spécifiquesde ses composants allergéniques.

Comme pour tout test de dépistage, undiagnostic clinique définitif ne doit pas êtrebasé sur le résultat d'un seul test, maisdoit impérativement être interprété selonle contexte clinique du patient, lasymptomatologie et d'autres données delaboratoire.Les anticorps hétérophiles du sérumhumain peuvent réagir avec lesimmunoglobulines faisant partie descomposants du coffret et interférer avecles immunodosages in vitro. [Voir BoscatoLM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: aproblem for all immunoassays. Clin Chem1998:34:27-33.] Les échantillons

provenant de patients fréquemmentexposés aux animaux ou aux produitssériques d'origine animale peuventprésenter ce type d'interférence pouvantpotentiellement donner un résultatanormal. Ces réactifs ont été mis au pointafin de minimiser le risque d'interférence,cependant des interactions potentiellesentre de rares sérums et les composantsdu test peuvent se produire. Dans un butdiagnostique, les résultats obtenus avecce dosage doivent toujours être utilisés enassociation avec un examen clinique,l'histoire médicale du patient et d'autresrésultats.

Performances du testLes chapitres suivants présentent desdonnées représentatives desperformances du test IMMULITE 2500AlaTOP. Les résultats sont exprimés enkCPS.En l'absence d'indication contraire, tousles résultats ont été obtenus sur deséchantillons sériques recueillis sur tubes,sans anticoagulant, ni gel, ni activateur dela coagulation.L'Immulite 2500 utilise, pour les réactifs etles billes, la même composition quel'IMMULITE 2000. Toutes lescaractéristiques des performances sontéquivalentes entre les deux plateformes.

Tous les résultats de performance àl'exception de la Comparaison deméthode 1 ont été obtenus avecl'automate IMMULITE 2000.

Précision: Les échantillons ont été dosésen doublets pendant 20 jours, 2 séries parjour, soit un total de 40 séries et de 80résultats. (Voir le tableau “Precision”.)Spécificité: Les anticorps sont hautementspécifiques des IgE humaines et neprésentent pas de réaction croisée avecles autres classes d'immunoglobulineshumaines (IgA, IgD, IgG, IgM).

Bilirubine : La présence de bilirubineconjuguée et non conjuguée ne présenteaucun effet sur les résultats ni sur laprécision du dosage si la concentration nedépasse pas 200 mg/l.Hémolyse : La présence d'hémoglobinene présente aucun effet sur les résultats nisur la précision du dosage si laconcentration ne dépasse pas 500 mg/dl.


Lipémie : La présence de triglycérides neprésente aucun effet sur les résultats nisur la précision du dosage si laconcentration ne dépasse pas3 000 mg/dl.

Comparaison de méthode 1:IMMULITE 2500 AlaTOP a été comparéau test IMMULITE 2000 AlaTOP de DPCsur 200 échantillons de patients.


IMMULITE 2000 Non-réactif Réactif

Réactif 2 134

Non-réactif 64 0

Concordance: 99.0%Sensibilité: 98.5%; Spécificité: 100.0%

Comparaison de méthode 2: IMMULITE2000 AlaTOP a été comparé au testIMMULITE AlaTOP (LKAT) de DPC sur110 échantillons de patients.


IMMULITE Non-réactif Réactif

Réactif 0 64

Non-réactif 43 3

Concordance: 97,3%Sensibilité: 100%; Spécificité: 93,5%

Assistance techniqueContacter votre distributeur national. EnFrance distribué par DPC France 90 bdNational 92257 La Garenne-Colombes.Le système d'assurance qualité de DPC estcertifié ISO 13485 (2003).

Italiano

IMMULITE 2500AlaTOP Allergy ScreenUso: Ad uso diagnostico in vitro conl'analizzatore IMMULITE 2500 — per larilevazione qualitativa degli anticorpi IgEspecifici per gli allergeni inalanti nel siero,quale ausilio nella diagnosi differenziale diallergia atopica.Codice: L5KAT2 (200 test)Codice del test: TOPColore: Grigio Scuro

Riassunto e Spiegazione delTestIn pazienti con asma estrinseca,raffreddore da fieno, o eczema atopico, isintomi possono comparireimmediatamente dopo l'esposizione adallergeni specifici. La risposta allergica diquesto tipo (atopica o anafilattica)costituisce una funzionalità delle reaginesieriche, principalmente delleimmunoglobuline E (IgE). Le molecole IgEagiscono come punti di contatto tral'allergene e le cellule specializzate cherilasciano istamina ed altri agenti inseguito all'esposizione all'allergene; ciòscatena la reazione che conosciamo sottoil nome di allergica.1,2 Laddove valutati allaluce di altri dati clinici e di laboratorio, itest di screening per l'allergia in vitrounitamente ai test IgE allergeno-specificipossono essere utili al medico peridentificare l'allergene (o gli allergeni) aiquali un soggetto è sensibile.5,6,7,8

Principio della ProceduraIl test IMMULITE 2500 AlaTOP AllergyScreen è un immunodosaggio inchemiluminescenza sequenziale marcatocon enzima, basato su allergeni liquidimarcati con ligando, anticorpi monoclonali,e separazione mediante una fase solidacoattata con un anti-ligando. I dosaggiAlaTOP utilizzano una tecnologiabrevettata (Brevetto US No. 4 778 751)che utilizza la cinetica in fase liquida sottoforma di sferetta.3,4 Questo dosaggiorappresenta un miglioramento significativorispetto ai metodi convenzionali basati suallergeni adesi ad una fase solida qualeun dischetto di carta.

AlaTOP è unico nell'utilizzo di allergeni informa liquida. Gli allergeni sono adesi inmaniera covalente ad una matrice solubiledi polimeri/copolimeri, che a sua volta èmarcata con ligando: l'anti-ligando èadeso alla sferetta di polistirene percatturare gli allergeni marcati con ligando.Cicli di Incubazione: 60 minuti.

Raccolta del CampioneSi consiglia l'utilizzo di un'ultracentrifugaper schiarire i campioni lipemici.

Campioni emolizzati possono indicare untrattamento non idoneo del campioneprima dell'arrivo al laboratorio; quindi, i


risultati devono essere interpretati concautela.

La centrifugazione di campioni di sieroprima che la coagulazione sia completapuò produrre fibrina. Per evitare risultatierrati dovuti alla presenza di fibrina,assicurarsi che il processo dicoagulazione sia completo prima dicentrifugare i campioni. Alcuni campioni,in modo particolare quelli provenienti dapazienti sottoposti a terapia conanticoagulanti, possono richiedere tempidi coagulazione più lunghi.

Provette per il prelievo di sangue diproduttori diversi possono dare valoridifferenti, a seconda dei materiali e degliadditivi usati, incluso gel o barriere fisiche,attivatori di coaguli e/o anticoagulanti.L'IMMULITE 2500 AlaTOP Allergy Screennon é stato verificato con tutte le possibilivariazioni di tipi di provette.Volume Richiesto: 50 µL di siero.Conservazione: 3 giorni a 2–8°C,9,10 o6 mesi a –20°C.10

Avvertenze e PrecauzioniAd uso diagnostico in vitro.Reagenti: Conservare a 2–8°C. Eliminarein conformità alle leggi applicabili.

Seguire le precauzioni generali emanipolare tutti i componenti come sefossero potenzialmente infetti. I materialiderivati dal sangue umano sono statitestati con esito negativo per la Sifilide, gliAnticorpi Anti-HIV 1 e 2, l'Antigene diSuperficie dell'Epatite B e gli AnticorpiAnti-Epatite C.E' stata aggiunta Sodio Azide aconcentrazioni inferiori a 0,1 g/dL comeconservante. Al momentodell'eliminazione, irrorare con molta acquaper evitare la formazione di azidimetalliche potenzialmente esplosive nelletubature di piombo e di rame.

Substrato Chemiluminescente: Evitarela contaminazione e l'esposizione alla lucesolare diretta. (Vedi metodica.)Acqua: Utilizzare solo acqua distillata odeionizzata.

Materiali FornitiI componenti costituiscono un unico set.Le etichette all'interno della confezionesono necessarie per eseguire i dosaggi.

AlaTOP Confezione di Sferette(L2AT12)Con codice a barre. 200 sferette, coattatecon anti-ligando. Stabile a 2–8°C fino alladata di scadenza.L5KAT2: 1 confezione.

Porta Reagente AlaTOP (L2ATA2)Con codice a barre. 11,5 mL di screendegli allergeni, con conservanti. 11,5 mLdi fosfatasi alcalina (Intestino di vitello)coniugato con anticorpi monoclonali murinianti-IgE in un tampone, con conservanti.Stabile a 2–8°C fino alla data di scadenza.L5KAT2: 1 Porta Reagente.

Prima dell'utilizzo rimuovere la partesuperiore dell'etichetta lungo laperforazione senza danneggiare il codicea barre. Togliere il foglio protettivo dallaparte superiore del flacone. Far scattarenella corretta posizione il coperchioscorrevole lungo le guide del coperchiodel reagente.

Calibratore Alatop (LATL)2 mL di siero umano privo di IgE. Stabile a2–8°C per 30 giorni dopo l'apertura. Noncongelare.L5KAT2: 1 flacone.Prima di ricalibrare collocare le etichettegiuste sulle provette delle aliquote fornitecol kit cosicché i codici a barre possanoessere registrati dal lettore.

Controllo Negativo Screen d'AllergiaAlatop (L2ATC1)2 mL di siero umano privo di IgE. Stabile a2–8°C per 4 mesi dopo l'apertura, o finoalla data di scadenza indicatasull'etichetta. Non congelare. Nonutilizzare se sono presenti segni dicontaminazione microbica, quali aspettotorbido del campione.L5KAT2: 1 flacone.Collocare le etichette giuste sulle provettedelle aliquote (fornite col kit) cosicché icodici a barre possano essere registratidal lettore.


Controllo Positivo Screen d'AllergiaAlaTOP (L2ATC2)2 mL di siero umano con IgE specificheper i dosaggi IMMULITE 2500 AlaTOPScreen d' Allergia. Stabile a 2–8°C per4 mesi dopo l'apertura, o fino alla data discadenza indicata sull'etichetta. Noncongelare. Non utilizzare se sono presentisegni di contaminazione microbica, qualiaspetto torbido del campione.L5KAT2: 1 flacone.

Collocare le etichette delle Aliquote giuste(fornite col kit) cosicché i codici a barrepossano essere registrati dal lettore.

Componenti del Kit FornitiSeparatamenteL2SUBM: Substrato ChemiluminescenteL2PWSM: Tampone di Lavaggio dell'AgoL2KPM: Kit di pulizia dell'AgoLRXT: Tubi di Reazione (monouso)

Materiali richiestiAcqua distillata o deionizzata; provette.

Procedura del DosaggioAttenzione: per avere prestazioni ottimali,è importante effettuare tutte le proceduredi manutenzione di routine così comedefinito nel Manuale dell'Operatoredell'IMMULITE 2500.Vedi Manuale dell'Operatore IMMULITE2500 per: preparazione, messa a punto,diluizione, calibrazione, dosaggio eprocedure di controllo di qualità.Intervallo di Calibrazione: 4 settimane.Campioni per il Controllo di Qualità: Icontrolli forniti con questo kit devonoessere utilizzati per monitorare leprestazioni del dosaggio e la continuaapplicabilità del Cutoff reattivo / nonreattivo memorizzato.

Interpretazione dei RisultatiReattivo: Un risultato reattivo indica chegli anticorpi verso una o più dellecomponenti allergeniche all'interno delpannello sono presenti nel campione.

Non reattivo: Un risultato non reattivoindica anticorpi non rilevabili verso lecomponenti allergeniche.

LimitiLa procedura IMMULITE 2500 AlaTOPfornisce solo risultati qualitativi (reattivo /non reattivo). Non fornisce informazionisul quantitativo di IgE specifiche perqualsivoglia componente allergenica.

Come avviene per tutti i test di screening,una diagnosi clinica definitiva non puòbasarsi sul risultato di un unico test, madeve essere formulata dal medico solodopo aver valutato i risultati di tutti gliesami clinici e di laboratorio.Gli anticorpi eterofili presenti nel sieroumano possono reagire con leimmunoglobuline presenti nellecomponenti del dosaggio provocandoun'interferenza con gli immunodosaggi invitro. [Vedi Boscato LM, Stuart MC.Heterophilic antibodies: a problem for allimmunoassays. Clin Chem 1988:34:27-33.] Campioni di pazienti routinariamenteesposti agli animali o a prodotti derivati dasiero di animali possono presentarequesto tipo di interferenza causapotenziale di risultati anomali. Questireagenti sono stati formulati perminimizzare il rischio di interferenze,tuttavia, possono verificarsi interazionipotenziali tra sieri rari e componenti deltest. A scopo diagnostico, i risultati ottenutida questo dosaggio devono sempreessere utilizzati unitamente all'esameclinico, all'anamnesi del paziente e adaltre indagini di laboratorio.

Prestazioni del DosaggioLe seguenti sezioni contengono i datirappresentativi delle prestazioni deldosaggio IMMULITE 2500 AlaTOP AllergyScreen. I Risultati sono espressi in kCPS.

Laddove non diversamente specificato,tutti i risultati sono stati generati sucampioni di siero raccolti in provette privedi anticoagulanti, gel separatori o additiviche favoriscano la formazione di coaguli.L'IMMULITE 2500 utilizza gli stessireagenti e la stessa formulazione dellesferette dell'IMMULITE 2000. Tutte lecaratteristiche delle prestazioni sonoequivalenti tra le due piattaforme.Tutti i dati relativi alle prestazioni eccettoquelli della Comparazione di Metodi 1sono stati generati utilizzandol'analizzatore IMMULITE 2000.


Precisione: I campioni sono stati dosati induplicato nel corso di 20 giorni, duesedute al giorno, per un totale di 40sedute e 80 replicati. (Vedi tabella“Precision”)

Specificità: Gli anticorpi sono altamentespecifici per le IgE umane, con nessunacrossreattività verso altreimmunoglobuline umane (IgA, IgD, IgG,IgM).Bilirubina: La presenza di bilirubinaconiugata e non coniugata inconcentrazioni fino a 200 mg/L non hanessun effetto sui risultati entro il range diprecisione del dosaggio.Emolisi: La presenza di emoglobina inconcentrazioni fino a 500 mg/dL non hanessun effetto sui risultati entro il range diprecisione del dosaggio.Lipemia: La presenza di trigliceridi inconcentrazioni fino a 3 000 mg/dL non hanessun Effetto sui risultati entro il range diprecisione del dosaggio.Comparazione di Metodi 1:IMMULITE 2500 AlaTOP è statocomparato al test DPC IMMULITE 2000AlaTOP su 200 campioni dei pazienti.


IMMULITE 2000 Non reattivo Reattivo

Reattivo 2 134

Non reattivo 64 0

Correlazione: 99.0%Sensibilità: 98.5%; Specificità: 100.0%

Comparazione di Metodi 2: IMMULITE2000 AlaTOP è stato comparato al testDPC IMMULITE AlaTOP (LKAT) su 110campioni dei pazienti.


IMMULITE Non reattivo Reattivo

Reattivo 0 64

Non reattivo 43 3

Correlazione: 97,3%Sensibilità: 100%; Specificità: 93,5%

Assistenza TecnicaAll'estero contattare il DistributoreNazionale.Il Sistema Qualità della Diagnostic ProductsCorporation è certificato secondo le normeISO 13485:2003.

Português

IMMULITE 2500AlaTOP Ratreio de AlergiasUtilização: Para o diagnóstico in vitrocom o Analisador IMMULITE 2500— paraa detecção qualitativa de ImunoglobulinasEspecíficas (IgE) a alergénios inaláveis,no soro, como auxiliar no diagnóstico deatopia diferencial.

Números de catálogoL5KAT2 (200 testes)Código do Teste: TOP Cor: Cinzento escuro

Sumário e explicação do testeNos doentes com asma extrínsica, febrede fenos ou eczema atópico, os sintomaspodem aparecer imediatamente após ocontacto com o alergénio. Uma respostaalérgica deste tipo (atópica ou anafilática)é normalmente função de imunoglobulinasespecíficas, IgE. As moléculas IgE actuamcomo pontos de contacto entre oalergénio e as células especializadas, quelibertam histaminas e outros agentes,quando expostas ao alergénio; esteprocesso desencadeia o quedenominamos por reacção alérgica.1,2 Ostestes de IgE específica, associados aoutros dados clínicos, permitem identificaros alergénios aos quais o doente estásensibilizado. 5,6,7,8

Príncipio do TesteIMMULITE 2500 AlaTOP Rastreio deAlergias é um imunoensaioquimioluminiscente, que utiliza alergénioslíquidos marcados, anticorposmonoclonais e uma fase sólida revestidacom anti-ligante. Este imunoensaio utilizauma tecnologia patenteada (U.S. PatentNo. 4 778 751), baseada numa tecnologiade fase-líquida.3,4 Esta tecnologiarepresenta um avanço significativo face aoutros métodos convencionais, onde osalergénios estão ligados a um suporte defase sólida, como um disco de papel.AlaTOP é o único painel de inaláveisexistente em fase líquida. Os alergéniosligam-se co-valencialmente à matrizpolimérica/co-polímerica solúvel, que por


sua vez está marcada com um ligante. asAs esferas de poliestireno estãorevestidas com um ligante, de forma acaptar os alergénios marcados com oligante,Incubação: 60 minutos.

ColheitaPara clarear amostras lipémicasrecomenda-se a ultra-centrifugação.As amostras hemolisadas podem indiciarum tratamento incorrecto, antes do enviopara o laboratório; portanto os resultadosdevem ser interpretados com cuidado.

A centrifugação de amostras de soroantes da formação completa do coágulopode resultar na presença de fibrina. Paraprevenir resultados erróneos, devido àpresença de fibrina, certifique-se que aformação do coágulo se completou, antesda centrifugação das amostras. Algumasamostras, em especial as de doentessubmetidos a terapia anti-coagulante,podem requerer um maior tempo deformação do coágulo.Os tubos para colheita sanguínea, dediferentes fabricantes, podem originardiferentes valores, dependendo dosmateriais e aditivos, incluíndo gel oubarreiras fisicas, activadores do coáguloe/ou anti coagulantes. IMMULITE 2500AlaTOP Rastreio de Alergias não foi aindatestado com todas as variações possíveis,originadas pelos tipos de tubos.Volume de Amostra: 50 µL de soro.

Estabilidade: 3 dias a 2–8°C,9,10 ou por6 meses a –20°C. 10

PrecauçõesPara uso de diagnóstico in vitro.

Reagentes: Manter a 2–8 °C. Elimine deacordo com a legislação em vigor.Manipule com as devidas precauçõestodos os materiais capazes de transmitirdoenças infecciosas. As matérias primasobtidas de soro humano, foram testadas,revelando resultados negativos para asífilis, para os anticorpos do vírus daimunodeficiência humana (HIV) 1 e 2;para o antigénio de superfície da hepatiteB (HBsAg) e para os anticorpos do vírusda hepatite C.

Adicionou-se azida de sódio comoconservante; para evitar acumulações deazidas metálicas explosivas, emcanalizações de cobre e alumínio, osreagentes devem ser despejados noesgoto apenas se diluídos e lavados comágua abundante.Substrato quimioluminescente: Evitecontaminação e exposição à luz directa(ver bula do substrato).Água: Use água destilada oudesionizada.

Materiais fornecidosOs componentes formam um conjunto unoe indivisível. As etiquetas no interior dascaixas são necessárias para o ensaio.

Embalagem de esferas de AlaTOP(L2AT12)Com código de barras. 200 esferasrevestidas com anti-ligante. Estável àtemperatura 2–8ºC, até expirar o prazo devalidade.L5KAT2: 1 embalagem.

Embalagem de reagentes AlaTOP(L2ATA2)Com código de barras. 11,5 mL dealergénios inaláveis com conservantes.11,5 mL de anticorpo monoclonal de ratoanti-IgE marcado com fosfatase alcalina(intestino de bovino) em tampão, comconservantes. Estável a 2–8ºC até expiraro prazo de validade.L5KAT2: 1 embalagem.

Antes de utilizar, retire a etiqueta deprotecção da tampa deslizante; levante atampa, tire o resto da etiqueta comcuidado para não danificar o código debarras. Remova o selo de alumínio docimo da embalagem, encaixe a tampadeslizante nas ranhuras e verifique sedesliza.

Ajustes AlaTOP (LATL)2 mL de soro humano sem IgE. Apósabertura, estável a 2–8º C durante 30dias. Não congelar.L5KAT2: 1frasco.Antes de realizar qualquer ajuste, coloqueas etiquetas de alíquota apropriadas(fornecidas com o "kit") em tubos deamostra de forma que os códigos debarras possam ser lidos pelo dispositivode leitura do aparelho.


Controlo Negativo AlaTOP (L2ATC1)2 mL de soro humano sem IgE. Estável a2–8° C durante 4 meses, depois deaberto, ou até ao prazo de validadeindicado no rótulo. Não congele. Sehouver sinais de contaminaçãomicrobiológica, tal como aparência turva,não usarL5KAT2: 1 frasco.Coloque as etiquetas de alíquotaapropriadas (fornecidas com o "kit") emtubos de amostra, de forma que oscódigos de barras possam ser lidos pelodispositivo de leitura do aparelho.

Controlo Positivo AlaTOP (L2ATC2)2 mL de soro humano com IgE específicaanti- alergénios inaláveis, a usar noensaio IMMULITE 2500 AlaTOP Rastreiode Alergias. Estável a 2–8°C durante 4meses depois de aberto ou até ao prazode validade indicado no rótulo. Nãocongele. se houver sinais decontaminação microbiológica, tal comoaparência turva, não use.L5KAT2: 1frasco.Coloque as etiquetas de alíquotaapropriadas (fornecidas com o "kit") emtubos de amostra, de forma que oscódigos de barras possam ser lidos pelodispositivo de leitura do aparelho.

Componentes do kit fornecidosseparadamenteL2SUBM: Substrato quimioluminescenteL2PWSM: Solução de lavagemL2KPM: Kit de limpeza do pipetadorLRXT: Tubos de reacção (descartáveis)Também necessárioPipetas de transferência de amostra; águadestilada ou desionizada.

Procedimento de doseamentoTer em atenção que para obter umdesempenho óptimo, é importanteefectuar todos os procedimentos rotineirosde manutenção, conforme indicado no"Manual do Operador" do IMMULITE2500.Consulte as instruções sobre preparação,ajuste, doseamento e procedimentos decontrolo de qualidade, no Manual doOperador do Sistema IMMULITE 2500.Intervalo entre ajustes: 4 semanas.

Amostras de controlo de qualidade: Ocontrolo fornecido com o kit deve serusado para analisar o desempenho doensaio, bem como para verificar autilização (reactiva ou não) do cutoffarmazenado.

Interpretação dos resultadosReactivo: Um resultado reactivo significaque na amostra do doente há anticorpos,que reconhecem um ou mais alergéniopresentes no painel.Não-reactivo: Um resultado não-reactivoindica que, na amostra do doente, não háanticorpos detectáveis a nenhum dosalergénios presentes no painel.

LimitaçõesO doseamento proporciona apenasresultados qualitativos (reactivo / não-reactivo). Não quantifica a IgE específicade cada um dos alergénios presentes nopainel.Não devem ser feitos diagnósticos clínicosdefinitivos, unicamente com base noresultado de um único teste de rastreio.Odiagnóstico deve ser efectuado pelomédico, após a avalição de todos osdados clínicos laboratoriais.

Os anticorpos heterofílicos no sorohumano podem reagir com asimunoglobulinas presentes no ensaio,causando interferência com osimunoensaios in vitro. [Ver Boscato LM,Stuart MC. Heterophilic antibodies: aproblem for all immunoassays. Clin Chem1998:34:27-33.] Amostras de doentesfrequentemente expostos a animais ouprodutos de soros de origem animal,podem demonstrar este tipo deinterferência, potencial causador deresultados anómalos. Estes reagentesforam formulados para minimizar o riscode interferência, contudo podem ocorrerpotenciais interacções entre soros (raros)e componentes do teste. Para fins dediagnóstico, os resultados obtidos nesteensaio devem ser sempre analisados emcombinação com o exame clínico, históriaclínica do doente e outros resultados.

Características do EnsaioNesta secção apresentam-se dadosrepresentativos do desempenho doIMMULITE 2500 AlaTOP Rastreio de


Alergias. Os resultados são expressos emkCPS.

Salvo referência em contrário, todos osdados provêm de amostras de sorocolhidas em tubos sem anticoagulantes,barreiras de gel ou aditivos promotores dacoagulação.O IMMULITE 2500 utiliza o mesmo tipo dereagente e esferas que o IMMULITE2000. O desempenho é equivalente emambos os sistemas.Todos os dados do desempenho, exceptoa Comparação de Métodos 1, foramobtidos no sistema IMMULITE 2000.Precisão: Amostras foram processadasem duplicado num período de 20 dias, doisensaios por dia, perfazendo um total de 40ensaios e 80 réplicas. (Consulte a tabela“Precisão”.)

Especificidade: O doseamento éespecífico para IgEs humanasespecíficas, sem reacções cruzadas comoutras imunoglobulinas (IgA, IgD, IgG,IgM).Bilirrubina: A presença de bilirrubinaconjugada e não-conjugada emconcentrações até 200 mg/L não temefeito nos resultados, dentro dos limitesde precisão do ensaio.Hemólise: A presença de hemoglobinaem concentrações até 500 mg/dL não temefeito nos resultados, dentro dos limitesde precisão do ensaio.Lipemia: A presença de trigliceridos iemconcentrações até 3 000 mg/dL não temefeito nos resultados, dentro dos limitesde precisão do ensaio.Comparação de Métodos 1:IMMULITE 2500 AlaTOP Rastreio deAlergias foi comparado ao IMMULITE2000 AlaTOP Rastreio de Alergias daDPC em 200 amostras de doentes.

IML 2500 AlaTOP Rastreio deAlergias

IMMULITE 2000 Não-reactivo Reactivo

Reactivo 2 134

Não-reactivo 64 0

Concordância: 99.0%Sensibilidade: 98.5%; Especificidade: 100.0%

Comparação de Métodos 2: IMMULITE2000 AlaTOP Rastreio de Alergias foicomparado ao IMMULITE AlaTOP

Rastreio de Alergias da DPC (LKAT) em110 amostras de doentes.

IML 2000 AlaTOP Rastreio deAlergias

IMMULITE Não-reactivo Reactivo

Reactivo 0 64

Não-reactivo 43 3

Concordância: 97,3%Sensibilidade: 100%; Especificidade: 93,5%

Assistência TécnicaPor favor contacte o seu DistribuidorNacional.O Sistema de Qualidade da Diagnostic ProductsCorporation está registado sob ISO 13485:2003.

Diagnostic Products CorporationCorporate Offices5210 Pacific Concourse DriveLos Angeles, CA 90045-6900USA2005-04-05PIL5KAT – 4

alatop allergy screen - dpcweb.com · 4 immulite 2500 alatop allergy screen (pil5kat-4, 2005-04-05)...

Documents