universidad autÓnoma de chihuahua facultad de ciencias quÍmicas cinÉtica de crecimiento de...

UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE CHIHUAHUAFACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS

CINÉTICA DE CRECIMIENTO DE Saccharomyces cerevisiae

Microbiología de alimentos

Dr. Iván Salmerón

I.Q. Edmundo Juárez Enríquez 213548Q.B.P. Carolina Nájera Domínguez 207445

I.Q. Ana Herrera Ponce 20753123/03/2011

INTRODUCCIÓN

Saccharomyces cerevisiae

Clase: HemiascomycetesOrden Saccharomycetales Familia: Sacchacromycetaceae

Biomasa

Etanol

Tamaño: 5-10 micrasReproducción: gemación

En el transcurso de la fermentación hay 4 fases de crecimiento: • 1) lag o de adaptación • 2) exponencial o log• 3) estacionaria• 4) mortalidad

Introducción

C6H1206 —» 2 CH3CH2OH + 2 CO2

Introducción

OBJETIVO

Monitorear el crecimiento de Saccharomyses cerevisiae, con el fin de medir el cambio de diferentes parámetros, como pH, consumo de

azúcar, acidez y unidades formadoras de colonias, así como la duración de cada etapa del crecimiento

MATERIALESY

MÉTODOS

• Microbiología III• Alimentos I

Preparación del Caldo de Crecimiento

• Glucosa 5 g/L• Extracto de Malta 5%• Solución M9• Inóculo 1%

Inoculado el 15 de Marzo

Acidez y pH• Acidez: valoración de la

muestra con NaOH 0.1 N• % de ácido acético

• Muestra directa en potenciómetro Hanna

Instruments Hi225

Cuantificación de consumo de sustrato

• Dubois y col. (1956)y = 0.0115x + 0.009

R2 = 0.9822

0.0000

0.2000

0.4000

0.6000

0.8000

1.0000

1.2000

1.4000

0 20 40 60 80 100

Glucosa (μg/mL)

D.O

. (4

92 n

m)

1 mL muestra o estándar

0.6 mL Fenol 5%3.6 mL H2S

492 ג nm

• Al momento de realizar la cinética de crecimiento, se separó 1 mL de la muestra

• Se centrifugó a 1500 rpm por 5 min

• El sobrenadante se guardó en refrigeración para su análisis al día siguiente

D.O.

• Determinar la D.O. a 600 nm (Durango, 2007)• Espectrofotómetro PerkinElmer Lambda 25

UFC• Milles y Misra “ Método de la Gota”

1 mL1 mL 10-1 10-2 10-3

10-4

PDA X 2

37° C12 horas

37° C12 horas

Cinética de Crecimiento Microlector

• Blanco: caldo de crecimiento• Cinética: caldo de crecimiento inoculado con Saccharomyces

cerevisiae

25 °C24 horasD.O. 595 nm

BioTekGen 5

Monitoreo de la Cinética Manual

RESULTADOS

Frotis

pH y Acidez

7.15

7.557.65

7.757.82

7.867.88y = 0.0002x

2 - 0.034x + 7.9161

R2 = 0.9855

7

7.2

7.4

7.6

7.8

8

0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26

Tiempo (h)

pH

y = -2E-05x3 + 0.0009x2 - 0.004x + 0.0978

R2 = 0.9983

0.00

0.05

0.10

0.15

0.20

0.25

0.30

0.35

0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26

Tiempo (h)

% Á

cid

o A

céti

co

0.3

0.4

0.5

0.6

0.7

0.8

0.9

41 42 43 44 45 46 47 48 49 50

Tiempo (h)

D.O

. (60

0 n

m)

Densidad Óptica

y = -0.0003x2 + 0.0363x - 0.0272

R2 = 0.997y = 0.022x2 - 0.1423x + 0.3181

R2 = 1

0

0.1

0.2

0.3

0.4

0.5

0.6

0.7

0.8

0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26

Tiempo (h)

D.O

. (60

0 n

m)

Consumo de sustrato

y = 0.0115x + 0.009

R2 = 0.9822

0.0000

0.2000

0.4000

0.6000

0.8000

1.0000

1.2000

1.4000

0 20 40 60 80 100

Glucosa (μg/mL)

D.O

. (49

2 n

m)

y = -0.9944x + 45.159R2 = 0.3165

0

10

20

30

40

50

60

70

0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26

Tiempo (h)

Glu

cosa

[µ

g/m

l)] y = -0.3673x + 38.004

R2 = 0.0681

0

10

20

30

40

50

40 44 48 52 56 60 64 68 72 76

Tiempo (h)

Glu

cosa

[µ

g/m

L]

UFC

Cuadro 1. Resultados del conteo de UFC por el “método de la gota”, agar PDA, incubación a 37ºC. El conteo se realizó a las 29 horas después de la toma de la primera muestra.

Caja Monitoreo Directo 1:10 1:100 1.1000 1:10000 1.100000

Blanco - - - - - - -

1.10

X

1.2 X X

2.11

X

2.2

3.12

3.2 X

4.13

X

4.2 X

5.14

X

5.2

6.15

6.2

GRACIAS!!