Análisis CEDIA® Ácido valproico II Para uso diagnostico in vitro

100013 (Kit de 13 mL, 11 mL)

IndicacionesEl análisis CEDIA® Ácido valproico II es un dispositivo médico de diagnóstico in vitro concebido para cuantificar las concentraciones de ácido valproico en suero o plasma humano.

Resumen y explicación del análisisEl ácido valproico (VPA; ácido 2-propilpentanoico; Depakene®) es un anticonvulsivo empleado principalmente para el tratamiento de convulsiones generalizadas primarias y secundarias, pero también es efectivo contra las crisis de ausencia.1-5

A concentraciones terapéuticas, más del 90% del VPA de la circulación está unida a proteínas plasmáticas; principalmente albúmina.6

El VPA tiene las menores reacciones adversas de todos los antiepilépticos de uso común.7,8 Los efectos secundarios más frecuentes son trastornos gastrointestinales, tales como náuseas y vómitos.

La farmacocinética del VPA es muy variable, y depende de la forma del fármaco y de la vía de administración, así como de las variaciones individuales en volumen de distribución, metabolismo y aclaramiento.9,10 La vigilancia de las concentraciones de VPA durante el tratamiento es esencial para ofrecer al médico una indicación para el ajuste de la dosificación.

El análisis CEDIA Ácido valproico II emplea la tecnología del ADN recombinante (patente estadounidense n.º 4708929) para producir un sistema único y homogéneo de enzimoinmunoanálisis.11

Este análisis se basa en la enzima bacteriana -galactosidasa, que se ha preparado genéticamente dividiéndola en dos fragmentos inactivos: un aceptor enzimático (AE) y un donante enzimático (DE). Estos fragmentos se vuelven a asociar espontáneamente para formar una enzima totalmente activa que, en el formato del análisis, descompone un sustrato y genera un cambio de color que puede medirse mediante espectrofotometría.

En el análisis, el analito de la muestra compite con el analito conjugado con un fragmento inactivo de -galactosidasa por los lugares de unión de los anticuerpos. Si la muestra contiene analito, éste se fija al anticuerpo y deja libres los fragmentos enzimáticos inactivos, que forman enzimas activas. Si la muestra no contiene analito, el anticuerpo se fija al analito conjugado en el fragmento inactivo e inhibe la recombinación de los fragmentos de -galactosidasa inactivos, impidiendo la formación de una enzima activa. La cantidad de enzima

activa formada y el cambio de absorbencia resultante son directamente proporcionales a la cantidad de fármaco que contenga la muestra.

Reactivos1 Tampón de reconstitución de AE: contiene N-(2-hidroxietil) piperazina-N’-(2-ácido

etanosulfónico), estabilizador y conservante (13 mL).1a Reactivo de AE: contiene 0,25 g/L de aceptor enzimático, 24 mg/L de anticuerpos

monoclonales anti-VPA, BSA, salicilato sódico, sales de tampón y conservante.2 Tampón de reconstitución de DE: contiene N-(2-hidroxietil) piperazina-N’-(2-ácido

etanosulfónico), estabilizadores y conservante (11 mL).2a Reactivo de DE: contiene 40 µg/L de donante enzimático conjugado con VPA, 2,4 g/L de

rojo de clorofenol- -D-galactopiranósido, 27 ml/L de anticuerpos antirratón de cabra, sales de tampón, estabilizador y conservante.

Material adicional requerido (se vende por separado):

Descrizione del kit100007 Calibrador CEDIA Core TDM Multi-Cal

Controles comerciales: si desea recibir recomendaciones, consulte con el servicio de asistencia técnica al cliente

Precauciones y advertenciasLos reactivos contienen azida sódica. Evite el contacto con la piel y las mucosas. En caso de contacto, lave las áreas afectadas con abundante agua. En caso de contacto con los ojos o de ingestión, consulte inmediatamente con un médico. La azida sódica puede reaccionar con el plomo o el cobre de las cañerías y formar azidas metálicas que pueden ser explosivas. Al desechar dichos reactivos, debe enjuagarse siempre con abundante agua para evitar la acumulación de azidas. Limpie las superficies metálicas expuestas con hidróxido sódico al 10%.

Preparación y almacenamiento de los reactivosExtraiga el kit del almacenamiento refrigerado inmediatamente antes de preparar las soluciones.

Prepare las soluciones en el orden siguiente para reducir el riesgo de una posible contaminación.

Solución de donante enzimático R2: conecte el frasco 2a (reactivo de DE) al frasco 2 (tampón de reconstitución de DE) utilizando uno de los adaptadores incluidos. Mezcle los líquidos mediante una suave inversión y asegúrese de que todo el material liofilizado del frasco 2a pasa al frasco 2. Evite la formación de espuma. Separe el frasco 2a y el adaptador del frasco 2 y deséchelos. Tape el frasco 2 y déjelo reposar unos 5 minutos a entre 15 y 25°C. Mezcle de nuevo. Anote la fecha de la reconstitución en la etiqueta del frasco. Coloque el frasco directamente en el compartimiento de reactivos del analizador o en el almacenamiento refrigerado y déjelo reposar 30 minutos antes de utilizarlo.

Solución de aceptor enzimático R1: conecte el frasco 1a (reactivo de AE) al frasco 1 (tampón de reconstitución de AE) utilizando uno de los adaptadores incluidos. Mezcle los líquidos mediante una suave inversión y asegúrese de que todo el material liofilizado del frasco 1a pasa al frasco 1. Evite la formación de espuma. Separe el frasco 1a y el adaptador del frasco 1 y deséchelos. Tape el frasco 1 y déjelo reposar unos 5 minutos a entre 15 y 25°C. Mezcle de nuevo. Anote la fecha de la reconstitución en la etiqueta del frasco. Coloque el frasco directamente en el compartimiento de reactivos del analizador o en el almacenamiento refrigerado y déjelo reposar 30 minutos antes de utilizarlo.

NOTA 1: los componentes suministrados en este kit están concebidos para utilizarse como una unidad integral. No mezcle componentes de lotes diferentes.NOTA 2: para evitar la contaminación cruzada de los reactivos, no intercambie los tapones de los frascos de reactivo. La solución R2 (donante enzimático) debe tener un color amarillo naranja. Un color rojo o rojo púrpura indica que el reactivo está contaminado y debe desecharse.NOTA 3: antes de realizar el análisis, las soluciones R1 y R2 deben estar a la temperatura de almacenamiento del compartimiento de reactivos del analizador. Para obtener más información, consulte la hoja de aplicaciones específica del analizador.NOTA 4: para garantizar la estabilidad de la solución de AE reconstituido, evite la exposición continuada y prolongada a luz brillante.

Almacene los reactivos a entre 2 y 8°C. NO LOS CONGELE. Para determinar la estabilidad de los componentes sin abrir, consulte la fecha de caducidad en las etiquetas de la caja o del frasco.

Solución R1: 45 días refrigerada en el analizador o a entre 2 y 8°C.Solución R2: 45 días refrigerada en el analizador o a entre 2 y 8°C.

Recogida y manipulación de muestrasLas muestras de suero o plasma (heparina de sodio o de litio; ácido edético [EDTA] con sodio) son adecuadas para utilizarse en el análisis. No induzca la formación de espuma y evite las congelaciones y descongelaciones repetidas para mantener la integridad de la muestra desde el momento de la recogida hasta el del análisis. Centrifugue las muestras que contengan partículas. Tape las muestras, almacénelas a entre 2 y 8°C y analícelas en la semana posterior a la recogida. Si el análisis no puede realizarse en la semana posterior a la recogida, o si la muestra debe enviarse a algún sitio, tape la muestra y manténgala congelada. Almacene las muestras a -20°C y analícelas en las 4 semanas posteriores. Manipule todas las muestras de pacientes como si pudieran ser infecciosas.

Procedimiento del análisisPara la realización de este análisis pueden utilizarse analizadores químicos capaces de mantener una temperatura constante, pipetear muestras, mezclar reactivos, medir índices enzimáticos y cronometrar la reacción de manera precisa. Microgenics, parte de Thermo Fisher Scientific puede suministrar hojas de aplicación con los parámetros específicos de los instrumentos.

NOTA: si el analizador no lee el código de barras, puede introducirse manualmente la secuencia numérica de la etiqueta del código de barras mediante el teclado.

Control de calidad y calibración12

Se recomienda realizar una calibración de dos puntos:• trascambiarelfrascodereactivo,• trascambiarellotedereactivo,y• cuandolorequieranlosprocedimientosdecontroldecalidad.

2

Las prácticas correctas de laboratorio recomiendan efectuar al menos dos niveles (puntos alto y bajo de decisión médica) de control de calidad cada día que se analicen muestras de pacientes, y cada vez que se realice una calibración. Vigile los valores de los controles para comprobar si muestran tendencias o cambios. Si se detectan tendencias o cambios, o si el control no se recupera dentro del rango especificado, revise todos los parámetros de funcionamiento. Para obtener más ayuda, póngase en contacto con el servicio de asistencia técnica al cliente. Todos los requisitos de control de calidad deben realizarse de acuerdo con las normas o los requisitos de acreditación locales, estatales o federales.

Resultados y valores esperadosEl análisis CEDIA Ácido valproico está diseñado para cuantificar las concentraciones de ácido valproico en un intervalo de entre 3 µg/mL y el valor del calibrador alto Core TDM Multi-Cal (aproximadamente 150 µg/mL) en muestras de pacientes. Las muestras que obtengan resultados por debajo de 3 µg/mL deben clasificarse como < 3 µg/mL. Las muestras que obtengan valores de más de 150 µg/mL pueden clasificarse como > 150 µg/mL; también puede diluirse una parte de la muestra con una parte de calibrador bajo Core TDM Multi-Cal y volverse a analizar. El valor obtenido en el segundo análisis debe hallarse de la forma siguiente:

Valor real = (2 x valor diluido) - concentración del calibrador bajo Core TDM Multi-Cal

Utilice el siguiente factor de conversión para convertir µg/mL a µmol/L:

µg/mL x 6,93 = µmol/Lµmol/L x 0,144 = µg/mL

La eficacia terapéutica y los efectos tóxicos están estrechamente relacionados con la concentración sérica del fármaco. Se ha informado de que la concentración sérica efectiva de VPA para controlar las crisis está entre 50 y 100 µg/mL.13-15 Sin embargo, hay una serie de factores que pueden complicar la interpretación de las concentraciones séricas de VPA,3 que incluyen el intervalo de tiempo entre las administraciones del fármaco, el tipo de crisis, la concentración de albúmina y la presencia de otros antiepilépticos. Por lo tanto, los ajustes de la dosificación del fármaco deben basarse en datos clínicos y de laboratorio.

Limitaciones1. La incidencia de pacientes que tienen anticuerpos anti- -galactosidasa de E. coli es

bajísima. No obstante, en algunas muestras que contengan dichos anticuerpos pueden obtenerse resultados de procainamida artificialmente altos que no se ajusten al perfil clínico.

2. Como en todos los análisis que emplean anticuerpos de ratón, existe la posibilidad de que los anticuerpos antirratón humanos (HAMA) de la muestra interfieran y hagan que se obtengan resultados falsos demasiado altos.

Características específicas de rendimientoA continuación se muestran los datos de rendimiento típicos obtenidos con el analizador Hitachi 911.16 Los resultados obtenidos en su laboratorio pueden ser distintos a estos datos.

PrecisiónSe analizaron sueros de control y sueros humanos combinados para comprobar la precisión en un analizador Hitachi siguiendo las pautas modificadas de la NCCLS para la realización de repeticiones de experimentos. Se obtuvieron los siguientes resultados.

Precisión Intraserial Precisión Total

n 120 120 119 120 120 119

x- (μg/mL) 24,4 95,0 136,8 24,4 95,0 136,8

SD (μg/mL) 0,59 1,43 1,81 0,83 1,93 2,48

CV % 2,4 1,5 1,3 3,4 2,0 1,8

Comparación de métodosAl comparar los resultados del análisis CEDIA Ácido valproico (y) con los de un inmunoanálisis de polarización de fluorescencia comercial (x), se obtuvo la siguiente correlación:

Regresión lineal Regresión de Passing y Babloky = -0,61 + 1,08x y = -3,22 + 1,10xr = 0,972 r = 0,972Sy.x = 7,042 SD (md95) = 4,442

Número de muestras medidas: 77Las concentraciones de la muestra estuvieron entre 2,6 y 119,8 µg/mL.

LinealidadSe diluyó una muestra de alta concentración con el calibrador bajo Core TDM Multi-Cal. A continuación se determinó el porcentaje de recuperación dividiendo el valor obtenido con el análisis por el valor esperado.

% Muestra de AltaConcentración

Valor Esperado(μg/mL)

Valor Obtenido(μg/mL) % Recuperación

100,0 130,1 - -

83,3 108,3 112,7 104

66,7 86,7 87,5 101

50,0 65,0 67,4 104

33,3 43,3 43,3 100

16,7 21,7 20,9 96

0,0 0 - -

RecuperaciónSe añadió ácido valproico en forma de muestra de paciente de alta concentración (a la que se le había añadido el fármaco) a una muestra de paciente de baja concentración. A continuación se determinó el porcentaje de recuperación dividiendo el valor obtenido con el análisis por el valor esperado.

% Muestra de AltaConcentración

Valor Esperado(μg/mL)

Valor Obtenido(μg/mL) % Recuperación

100,0 141,1 - -

83,3 117,7 116,0 99

66,7 94,2 93,0 99

50,0 70,7 67,3 95

33,3 47,1 44,2 94

16,7 23,6 21,6 92

0,0 0,1 - -

EspecificidadSe ha comprobado la reactividad cruzada de los siguientes compuestos en el análisis CEDIA Ácido valproico II.

Compuesto % de reactividad cruzada

Ácido 3-hidroxi-2-propilpentanoico 4,4

Ácido 4-hidroxi-2-propilpentanoico 4,4

Ácido 5-hidroxi-2-propilpentanoico 5,8

Ácido 3-oxo-2-propilpentanoico 3,8

2-fenil-2-etilmalonamida (PEMA) < 0,16

Ácido 2-propil-2,3’-pentadienoico 14,2

Ácido 2-propil-2-pentanoico 1,0

Ácido 2-propil-4-pentanoico 22,3

Ácido 2-propilglutárico < 0,4

Ácido 2-propilsuccínico < 0,9

Carbamazepina < 0,04

Carbamazepina-10,11-epóxido < 0,9

Clonazepam < 0,3

Diazepam < 0,3

Fenobarbital < 0,06

Fenitoína < 0,04

Primidona < 1,0

Ácido salicílico < 0,004

No se observaron interferencias en el análisis CEDIA Ácido valproico con:

Sustancia Concentración Sustancia Concentración

Bilirrubina < 60 mg/dL IgM < 840 mg/dL

Hemoglobina < 1,0 g/dL Factor reumatoideo < 200 IU/mL

IgA < 790 mg/dL Proteínas totales < 10 g/dL

IgG < 4,3 g/dL Triglicérido < 1,0 g/dL

10003778-32011 01

Microgenics GmbHSpitalhofstrasse 94D-94032 Passau GermanyTel: +49 (0) 851-88 68 90Fax: +49 (0) 851-88 68 910

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Otros países:Póngase en contacto con su representante local de Thermo Fisher Scientific.

Depakene es una marca registrada de Abbott Laboratories.CEDIA es una marca registrada de Roche Diagnostics.

SensibilidadLa concentración mínima detectable del análisis CEDIA Ácido valproico es de 3,0 µg/mL (20,8 µmol/L).

Bibliografía1. Chadwick D. Comparison of monotherapy with valproate and other antiepileptic drugs

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16. Datos archivados en Microgenics Corporation, parte de Thermo Fisher Scientific.