篠崎連携研究グループ (機能開発研究チーム) -...

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189 植物の系では外部環境への応答や適応、光合成、植物 ホルモンによる成長制御、高効率での分化全能性など動 物の系とは明らかに異なった植物独自の個体レベル、細 胞レベル、分子レベルでの制御機構が存在している。 当協力研究グループではモデル植物のシロイヌナズナ を用いて遺伝子破壊型変異体や過剰発現型変異体(ミ FOX システム)のリソース開発、シロイヌナズナ・ ポプラ・ダイズ・コムギ・その他植物種の完全長 cDNA Kazuo SHINOZAKI, Ph.D. グループヘッド 篠崎 一雄(理博) Bioresource Research Collaborative Group バイオリソース連携研究グループ 職員とメンバー構成 グループヘッド 篠崎 一雄(平成 17 4 月~) 研究員 梅澤 泰史(平成 17 4 月~) 藤田 美紀(平成 18 4 月~) 黒森 崇(平成 17 4 月~) 明賀 史純(平成 17 4 月~) 特別研究員 浦野 薫(平成 17 4 月~) 高橋 史憲(平成 19 5 月~) (平成 16 4 月~平成 19 3 月 ジュニアリサーチアソシエイト) 基礎科学特別研究員 西山 りゑ(平成 18 4 月~) 日本学術振興会特別研究員 Behnam Babak(平成 19 10 月~) 特任職員 水門 佐保(平成 20 4 月~) (平成 18 4 月~平成 20 3 月 PSC テクニカルスタッフ) ジュニアリサーチアソシエイト 溝口 昌秀(平成 19 4 月~) 研修生 中村 正輝(平成 17 4 月~平成 19 3 月) 業務委託 正代 初代(平成 12 1 月~) 小林 裕子(平成 15 4 月~) 小澤 久美子(平成 15 4 月~) 植物分子生物学研究室 先任研究員 伊藤 卓也(平成 12 年4月~平成 19 3 月 [ 現・共同研究者 ]) 篠崎連携研究グループ (機能開発研究チーム) Shinozaki Research Collaborative Group リソース開発を通じてバイオリソースセンターのリソー ス業務に貢献している。さらに、表現型、遺伝子発現、 代謝産物、タンパク質などをそれぞれ網羅的に解析する 「オミクス解析」および、個々の遺伝子の詳細な解析に よって得られた情報を統合することで、これらリソース に付加価値をつける。また、環境ストレス応答機構の研 究を通じて人類が直面している環境・食料問題に取組ん でいる。

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― 189 ―

 植物の系では外部環境への応答や適応、光合成、植物

ホルモンによる成長制御、高効率での分化全能性など動

物の系とは明らかに異なった植物独自の個体レベル、細

胞レベル、分子レベルでの制御機構が存在している。

 当協力研究グループではモデル植物のシロイヌナズナ

を用いて遺伝子破壊型変異体や過剰発現型変異体(ミ

ニ FOXシステム)のリソース開発、シロイヌナズナ・

ポプラ・ダイズ・コムギ・その他植物種の完全長 cDNA

Kazuo SHINOZAKI, Ph.D.グループヘッド 篠崎 一雄(理博)

Bioresource Research Collaborative Groupバイオリソース連携研究グループ

職員とメンバー構成グループヘッド 篠崎 一雄(平成 17年 4月~)

研究員 梅澤 泰史(平成 17年 4月~)

藤田 美紀(平成 18年 4月~)

黒森 崇(平成 17年 4月~)

明賀 史純(平成 17年 4月~)

特別研究員 浦野 薫(平成 17年 4月~)

高橋 史憲(平成 19年 5月~)

(平成 16年 4月~平成 19年 3月 ジュニアリサーチアソシエイト)

基礎科学特別研究員 西山 りゑ(平成 18年 4月~)

日本学術振興会特別研究員 Behnam Babak(平成 19年 10月~)

特任職員 水門 佐保(平成 20年 4月~)

(平成 18年 4月~平成 20年 3月 PSCテクニカルスタッフ)

ジュニアリサーチアソシエイト 溝口 昌秀(平成 19年 4月~)

研修生 中村 正輝(平成 17年 4月~平成 19年 3月)

業務委託 正代 初代(平成 12年 1月~)

小林 裕子(平成 15年 4月~)

小澤 久美子(平成 15年 4月~)

植物分子生物学研究室

先任研究員 伊藤 卓也(平成 12年4月~平成 19年 3月 [ 現・共同研究者 ])

篠崎連携研究グループ(機能開発研究チーム)

Shinozaki Research Collaborative Group

リソース開発を通じてバイオリソースセンターのリソー

ス業務に貢献している。さらに、表現型、遺伝子発現、

代謝産物、タンパク質などをそれぞれ網羅的に解析する

「オミクス解析」および、個々の遺伝子の詳細な解析に

よって得られた情報を統合することで、これらリソース

に付加価値をつける。また、環境ストレス応答機構の研

究を通じて人類が直面している環境・食料問題に取組ん

でいる。

篠崎連携研究グループ(機能開発研究チーム)Shinozaki Research Collaborative Group

RIKEN BRC Annual Report 2006~ 2007

― 190 ―

年次計画と成果

1. トランスポゾン(Ds)挿入シロイヌナズナ変異体コレクションの表現型解析(フェノーム解析)

 ポストゲノム解析として我々は、シロイヌナズナ遺伝

子へのトランスポゾン Ds挿入変異体作製に引き続き、

Dsの同型接合体(ホモライン)を用いてフェノーム解

析(全遺伝子破壊変異体を用いた網羅的表現型解析)を

行っている。形態変化を指標にした表現型解析について、

我々が作製した約 18,000 Ds挿入変異体コレクションの

うち約 12,000ラインの解析は前年度に報告した。今年

度からは残り 6,000ラインの解析を開始し、現在継続中

である。

 フェノーム解析の過程で、雄性不稔を示す male

sterility1 (ms1)変異体(図 1)を単離し、今年度はその

詳細な機能解析を行った。雄性不稔の原因遺伝子 MS1

は転写活性化因子をコードし,花粉成熟に必要な下流遺

伝子を制御していることが明らかとなった。

梅澤、西山、伊藤、Behnam Babak、水門、小林、松尾、衞藤、浦野

高橋、藤田、溝口、篠崎グループヘッド、正代、小澤

図 1 シロイヌナズナの成熟途中の花粉と葯の透過電子顕微鏡写真

MI: 小胞子。TA: タペート層。Exine: エキシン。

(A, C) 野生型 (B, D) ms1 突然変異体

(Aと Bを比較)ms1 突然変異体では、小胞子(矢印)とタペート層(矢じり)

が空胞化して、最終的には成熟花粉が全くできない。

(Cと Dを比較)ms1 変異体では、野生型で見られる特徴的なエキシン構

造が見られない。

篠崎連携研究グループ(機能開発研究チーム)Shinozaki Research Collaborative Group

RIKEN BRC Annual Report 2006~ 2007

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ダイズRNAプールの準備

完全長cDNAライブラリーの作成

完全長cDNAのクローン化

完全長cDNAクローンの端読み

独立クローンの抽出

全長配列の決定分子マーカー etc. カスタムオリゴアレイ

ダイズRNAプールの準備

完全長cDNAライブラリーの作成

完全長cDNAのクローン化

完全長cDNAクローンの端読み

独立クローンの抽出

全長配列の決定分子マーカー etc. カスタムオリゴアレイ

図 2 ダイズ cDNAプロジェクトの概要

ムシグナル伝達とのクロストークについて研究を行っ

た。また、ストレス耐性獲得のシステムを明らかにする

ために、ストレス応答性カルシウム結合タンパク質の機

能解析、ストレス応答性アブシジン酸(ABA)合成酵

素の発現制御解析、ユビキチン化を介したストレス応答

性転写因子の分解系について研究を行った。

5. ストレス耐性植物の実用化に向けた形質転換作物の作製と圃場試験

 本研究グループではこれまでに、環境ストレス耐性に

関与する遺伝子を多く単離してきた。本研究では、これ

ら耐性遺伝子を利用したストレス耐性作物の実用化を目

指し、主要作物の一つであるコムギに注目して研究を

行っている。本年度は、コムギに乾燥耐性を付与させる

ための最適な遺伝子をシロイヌナズナより選抜し、導入

用ベクターを作製した。また乾燥ストレス付与に関わる

38遺伝子の完全長 cDNAを、コムギ相同遺伝子として

収集した。更にコムギのマイクロアレイ解析情報などを

用いて、恒常的発現型プロモーターの選抜を行った。今

後はこれらを組み合わせてコムギ品種等に導入し、得ら

れた形質転換体について圃場条件における乾燥耐性や収

量等を評価していく(図 3)。

6. トランスクリプトミクスとメタボロミクスの統合による ABA依存的な乾燥ストレス応答性代謝ネットワークの解明

 乾燥ストレス下の植物において、ABAは細胞内シグ

ナル伝達や多くの遺伝子の発現誘導に重要な働きを行

う植物ホルモンである。本研究では、シロイヌナズナ

ABA合成関連遺伝子 NCED3の破壊株を実験材料とし、

トランスクリプトミクスとメタボロミクス解析を組み合

わせることで、乾燥ストレス下で合成された ABAが制

御する代謝ネットワークの包括的な解明を行った。

2. ダイズ完全長 cDNAプロジェクト

 理研 PSCでは、ポストゲノム研究にとって有用なリ

ソースとなる完全長 cDNAの整備を、複数の有用作物

について進めている。本研究グループでは、代表的なマ

メ科作物であるダイズの完全長 cDNAプロジェクトを

担当し、約 40,000クローンについて塩基配列の収集お

よびデータ解析を終了した。現在、全てのデータの公開

に向けたシステムを構築中である(図 2)。

3. 過剰発現型トランスジェニック植物を利用したミニ FOXシステムの開発

 本研究グループでは、次世代型アクチベーションタ

ギング法である FOX Hunting System(full-length cDNA

over-expressor gene hunting system)を利用して、環境ス

トレス応答性を示すシロイヌナズナ転写因子の機能解析

を行った。41個の環境ストレス誘導性転写因子の完全

長 cDNAを高発現する植物ライブラリーを作製し、塩

ストレス耐性に関与する bZIP60遺伝子の単離に成功し

た。

4. 環境ストレス応答に関わる遺伝子の機能解析 植物は乾燥、塩、低温ストレスなどの様々な環境スト

レスに応答して、植物ホルモンを介したシグナル伝達と

遺伝子発現を行い環境に適応している。本研究グループ

では植物の生産力向上のため、環境ストレス応答に関連

した遺伝子探索と機能解析を中心に研究を行っている。

本年度は環境ストレス応答におけるシグナル伝達経路を

明らかにするために、環境ストレスと植物ホルモンで活

性化するプロテインキナーゼの機能解析および、ジャス

モン酸シグナル伝達に関わるMAPキナーゼとカルシウ

篠崎連携研究グループ(機能開発研究チーム)Shinozaki Research Collaborative Group

RIKEN BRC Annual Report 2006~ 2007

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図 3 環境ストレス耐性コムギの作出

乾燥ストレス耐性植物の分子育種のために、ストレス誘導性プロモーターや機能遺伝子を選抜する。

得られた知見をもとに、圃場で有効なストレス耐性コムギを作出する。

Ito Y., Katsura K., Maruyama K., Taji T., Kobayashi

M., Seki M., Shinozaki K. Yamaguchi-Shinozaki

K.:“Functional analysis of rice DREB1/CBF-type

transcription factors involved in cold-responsive gene

expression in transgenic rice”, Plant Cell Physiol., 47,

141-153 (2006).*

Yoshida T., Nishimura N., Kitahata N., Kuromori T.,

Ito T., Asami T., Shinozaki K. Hirayama T.: “ABA

Hypersensitive Germination3 encodes a protein

phosphatase 2C (AtPP2CA) that strongly regulates

ABA signaling during germination among Arabidopsis

PP2Cs”, Plant Physiol., 140, 115-126 (2006).*

Umezawa T., Okamoto M., Kushiro T., Nambara E.,

Oono Y., Seki M., Kobayashi M., Koshiba T., Kamiya Y.

Shinozaki K.: “CYP707A3, a major ABA 8’-hydroxylase

involved in dehydration rehydration response in

Arabidopsis thaliana”, Plant J., 46, 171-182 (2006).*

Furihata T., Maruyama K., Fujita Y., Umezawa T.,

Yoshida R., Shinozaki K. Yamaguchi-Shinozaki K.:

研究発表(誌上発表)

1.

2.

3.

4.

【原著論文】 * は査読制度がある論文誌“ABA-dependent multisite phosphorylation regulates the

activity of a transcription activation AREB1”, Proc. Natl.

Acad. Sci. USA., 103, 1988-1993 (2006).*

Yoshida R., Umezawa T., Mizoguchi T., Takahashi S.,

Takahashi F. Shinozaki K.: “The regulatory domain

of SRK2E/OST1/SnRK2.6 interacts with ABI1 and

integrates ABA and osmotic stress signals controlling

stomatal closure in Arabidopsis”, J. Bio. Chem., 281,

5310-5318 (2006).*

Yamasaki K., Kigawa T., Inoue M., Yamasaki T., Yabuki

T., Aoki M., Seki E., Matsuda T., Tomo Y., Terada

T., Shirouzu M., Tanaka A., Seki M., Shinozaki K.

Yokoyama S.: “An Arabidopsis SBP-domain fragment

with a disrupted C-terminal zinc-binding site retains its

tertiary structure”, FEBS Lett., 580, 2109-2116 (2006).*

Hasegawa Y., Seki M., Mochizuki Y., Heida N., Hirosawa

K., Okamoto N., Sakurai T., Satou M., Akiyama K.,

Iida K., Lee K., Kanaya S., Demura T., Shinozaki K.,

Konagaya A. Toyoda T.: “A flexible representation of

5.

6.

7.

篠崎連携研究グループ(機能開発研究チーム)Shinozaki Research Collaborative Group

RIKEN BRC Annual Report 2006~ 2007

― 193 ―

omic knowledge for thorough analysis of microarray

data”, Plant methods, 2,5 (2006).*

Sakuma Y., Maruyama K., Osakabe Y., Qin F., Seki M.,

Shinozaki K. Yamaguchi-Shinozaki K.:“Functional

analysis of an Arabidopsis transcription factor, DREB2A,

involved in drought-responsive gene expression”, Plant

Cell, 18,1292-1309 (2006).*

Noutoshi Y., Kuromori T., Wada T., Hirayama T., Kamiya

A., Imura Y., Yasuda M., Nakashita H., Shirasu K.

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(2006).*

Kuromori T., Wada T., Kamiya A., Yuguchi M., Yokouchi

T., Imura Y., Takabe H., Sakurai T., Akiyama K.,

Hirayama T., Okada K. Shinzoaki K.:“A trial of phenome

analysis using 4000 Ds-insertional mutants in gene-

coding regions of Arabidopsis”, Plant J., 47, 640-651

(2006).*

Kitahata N., Han S-Y., Noji N., Saito T., Kobayashi

M., Nakano T., Kuchitsu K., Shinozaki K., Yoshida

S., Matsumoto S., Tsujimoto M. Asami T.:“A 9-cis-

epoxycarotenoid dioxygenase inhibitor for use in

the elucidation of abscisic acid action mechanisms”,

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Shinozaki K., Yoshida S., Kimura M., Yamaguchi I.

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have an elicitor-like activity in Arabidopsis thaliana, but

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species”, Mol Plant Microve Interact., 19, 512-520

(2006).*

Machida M., Takechi K., Sato H., Chung S.J., Kuroiwa

H., Takio S., Seki M., Shinozaki K., Fujita T., Hasebe

M. Takano H.:“Gene for the peptidoglycan synthesis

pathway are essential for chloroplast division in moss”,

Proc. Natl. Acad. Sci. USA., 103, 6753-6758 (2006).*

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Oono Y., Seki M., Satou M., Iida K., Akiyama K.,

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genes during cold acclimation and deacclimation using

DNA microarrays”, Funct. Integr. Genomics, 6, 212-234

(2006).*

Myouga F., Motohashi R., Kuromori T., Nagata

N. Shinozaki K.:“An Arabidopsis chloroplast-

targeted Hsp101 homolog, APG6, has an essential

role in choloroplast development as well as heat stress

response”, Plant J., 48, 249-260 (2006).*

Sakuma Y., Maruyama K., Qin F., Osakabe Y., Shinozaki

K. Yamaguchi-Shinozaki K.: “Dual function of an

Arabidopsis transcription factor DREB2A in water-stress-

responsive and heat-stress-responsive gene expression”,

Proc. Natl. Acad. Sci. USA., 103. 18822-18827 (2006).*

Ichimura K., Casais C., Peck SC., Shinozaki K. Shirasu

K.:“MEKK1 is required for MPK4 activation and

regulates tissue specifi c and temperature dependent cell

death in Arabidopsis”, J. Bio. Chem., 281, 36969-36976

(2006).*

Ichikawa T., Nakazawa M., Kawashima M., Iizumi H.,

Kuroda H., Kondou Y., Tsuhara Y., Suzuki K., Ishikawa

A., Seki M., Fujita M., Motohashi R., Nagata N., Takagi

T., Shinozaki K. Matsui M.:“The FOX hunting system:

an alternative gain-of-function gene hunting technique”,

Plant J., 45, 974-986 (2006).*

Matsuda T., Kigawa T., Koshiba S., Inoue M., Aoki M.,

Yamasaki K., Seki M., Shinozaki K. Yokoyama S.: “Cell-

free synthesis of zinc-binding proteins”, J. Struct Funct

Genomics, 7, 93-100 (2006).*

Tran P. L-S., Nakashima K., Sakuma Y., Fujita Y.,

篠崎連携研究グループ(機能開発研究チーム)Shinozaki Research Collaborative Group

RIKEN BRC Annual Report 2006~ 2007

― 194 ―

Osakabe Y., Qin F., Simpson SD., Maruyama K., Fujita Y.,

Shinozaki K. Yamaguchi-Shinozaki K.: “Co-expression

of the stress-inducible zinc fi nger homeodomain ZFHD1

and NAC transcription factors enhances exporession

of the ERD1 gene in Arabidopsis”, Plant J., 49, 46-63

(2007).*

Qin F., Kakimoto M., Sakuma Y., Maruyama K., Osakabe

Y., Tran L-S., Shinzoaki K. Yamaguch-Shinozaki K.:

“Regulation and functional analysis of ZmDREB2A in

response to drought and heat stresses in Zea mays L.”,

Plant J.,50, 54-69 (2007).*

Mitsuda N.,Iwase A., Yamamoto H., Yoshida M., Seki

M., Shinozaki K. Ohme-Takagi M.: “NAC transcription

factors, NST1 and NST3, are key regulators of the

formation of secondary walls in woody tissues of

Arabidopsis”, Plant Cell, 19, 270-280 (2007).*

Takahashi F., Yoshida R., Ichimura K., Mizoguchi T., Seo

S., Yonezawa M., Maruyama K., Yamaguchi-Shinozaki

K. Shinozaki K.: “Dissecting the jasmonate signaling

pathway by a novel MAP kinase cascade, MKK3-MPK6,

in Arabidopsis”, Plant Cell, 19, 805-818 (2007).*

Itoh T., Tanaka, T., Barrero R.A., Yamasaki C., Fujii

Y., Hilton P.B., Antonio B.A., Aono H., Apweiler R.,

Bruskiewich R., Bureau T., Burr F., Fuks G., Habara T.,

Haberer G., Han B., Harada E., Hiraki A.T., Hirochika

H., Hoen D., Hokari H., Hosokawa S., Hsing Y.I., Ikawa

H., Ikeo K., Imanishi T., Ito Y., Jaiswal P., Kanno M.,

Kawahara Y., Kawamura T., Kawashima H., Khurana

J.P., Kikuchi S., , Komatsu S., Koyanagi K.O., Kubooka

H., Lieberherr D., Lin Y.C., Lonsdale D., Matsumoto

T., Matsuya A., McCombie W.R., Messing J., Miyao A.,

Mulder N., Nagamura Y., Nam J., Namiki N., Numa H.,

Nurimoto S., O'Donovan C., Ohyanagi H., Okido T., de

Oliveira A.C., Oota S., Osato N., Palmer L.E., Quetier

F., Raghuvanshi S.,Saichi N.,Sakai H., Sakai Y., Sakata

K., Sakurai T., Sato F., Sato Y., Schoof H., Seki M.,

Shibata M., Shimizu Y., Shinozaki K., Shinso Y., Singh

N.K., Smith-White B., Takeda J., Tanino M., Tatusova

T., Thongjuea S., Todokoro F., Tsugane M., Tyagi A.K.,

Vanavichit A., Wang A., Wing R.A., Yamaguchi K.,

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a NAC-type transcription factor OsNAC6 involved in

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篠崎連携研究グループ(機能開発研究チーム)Shinozaki Research Collaborative Group

RIKEN BRC Annual Report 2006~ 2007

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NUCLEAR MAGNETIC RESONANCE SPECTROSCOPY

AND TRANSCRIPTOME ANALYSIS OF ALBINO

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Shinozaki K. Hirayama T.: “ABA-Hypersensitive

Germination1 encodes a protein phosphatase 2C,

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9-hydroxy-10-oxo octadecadienoic acid [KODA] shows

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IPGSA 19th Annual Meeting, July21-25, Puerto Vallarta

Mexico (2007).

Ayano M., Godal H., Shinozaki K., Watanabe N.,

Yokoyama M. and Yoshida S.: Function analysis of

oxylipin, 9-hydroxy-10-oxo12(z), 15(z)-octadecadienoic

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Annual Meeting, July21-25, Puerto Vallarta Mexico

(2007).

Nishimura N., Yoshida T., Kitahata N., Asami T.,

Shinozaki K. and Hirayama T.: ABA-hypersensitive

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Shinozaki K. and Yamaguchi-Shinozaki K.: Functional

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Shinozaki K.: Comprehensive analysis of DREB1/CBF

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of rice functional genomics,Oct. 15-17, Tsukuba Japan

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a rice transcription factor involved in abiotic-stress-

responsive gene expression,The 5th International

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a NAC-type transcription factor OsNAC6 involved in

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Shinozaki K. and Yamaguchi-Shinozaki K.: Functional

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abiotic stress and Plant Growth and Development, Nov. 8,

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Todaka D., Nakashima K., Ito Y., Ohme-Takagi M.,

Shinozaki K. and Yamaguchi-Shinozaki K.: Functional

analysis of the OsPIFI gene down-regulated by drought

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Jul 15-18 (2008).

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International Conference on Plant Metabolomics,

Yokohama Japan, Jul 15-18 (2008).

Maruyama K., Kidokoro S., Takasaki H., Sakurai N.,

Suzuki H., Saito K., Shibata D., Shinozaki K. and

Yamaguchi-Shinozaki K.: A comparative analysis of

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Plant Metabolomics, Yokohama Japan, Jul 15-18 (2008).