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ENTEROBACTERIAS
P.Q.C. MIGUEL ANGEL ORTIZ GIL.
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• Las Enterobacteriaceae habitan en:
– Distribuidas en suelo,– agua,– alimentos.– Flora normal del intestino de humanos yanimales.
Características Generales:
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• MORFOLÓGICAS Y TINTORIALES– Bacilos o cocobacilos cortos gram
negativos,– no esporulados,– mótiles (flagelos perítricos) o no,– capsulados o no,– pilis.
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• BIOQUÍMICAS– Anaerobios facultativos,– catalasa positiva, (excepto Shigella
dysenteriae Tipo 1)– oxidasa negativa,– fermentan la glucosa,– reducen nitratos a nitritos.
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Reacción de catalasa
• Esta prueba detecta la presencia decitocromooxidasas
• La prueba se hace con peróxido dehidrógeno (H2O2) al 3% sobre unportaobjetos. La producción inmediata yabundante de burbujas indica la conversióndel H202 en agua y oxígeno gaseoso.
• La prueba de la catalasa debe realizarse apartir de un medio que no contenga sangreporque los eritrocitos pueden producir unareacción de catalasa débil.
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Prueba de la catalasa
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Reacción decitocromo oxidasa
Los citocromo sonhemoproteinas que contienenhierro y actuan como últimoeslabón de la cadena de larespiración aerobia ;transfireren electrones deHidrógeno al Oxígeno, con laformación de agua.El sistema citocromo seencuentra presente enmicroorganismos aerobios,microaerofílicos y en algunosanaerobios facultativos, peronunca en anaerobiosestrictos.
Dimetil-p-fenilendiamina al 1%
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• Los modos de transmisión a los sereshumanos son:
– Infecciones Nosocomiales• ( E. coli)
– Ingesta de alimentos o agua.• Salmonella,• Shigella,• Yersinia enterocolitica.
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Enterobacteriaceae
Patógenosoportunistas.
Patógenosevidentes.
Citrobacter.
Enterobacter.
Klebsiella.
Proteus.
Serratia
•Salmonella tiphy – (fiebretifoidea.)
•Shigella – (Disentería).
•Y. Pestis (peste negro).
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MEDIOS DE CULTIVO
1. Medios no selectivos: agar sangre
2. Medios selectivos-diferenciales: agar McConkey, agar EMB, SS agar,agar XLD.
McConkey: colonias rosadas (fermentan lactosa) y colonias transparentes(no fermentan lactosa).
Agar EMB: colonias azules (fermentan lactosa) y colonias transparentes(no fermentan lactosa).
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Mac Conkey
• Gram positivas ven inhibido - sales biliares ycristal violeta.
• Fermenten la lactosa liberarán productos ácidosque producirán un cambio de pH que sedetectará gracias al rojo neutro.
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Aspectos de las colonias.
• En agar sangre y agar chocolate lascolonias son:– Grandes.– Gris.– Lisas.
• Klebsiella o Enterobacter.– Mucoides – (polisacáridos).
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• E. Coli – ( Beta hemolítica).
P. mirabilis.• Motilidad. P. penneri.
P. Vulgaris.
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PRUEBAS DE IDENTIFICACIÓN
1. Pruebas bioquímicas
2. Pruebas serológicas
3. Pruebas de biología molecular
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• Estudia el metabolismo de la bacteria
• Estudio basado en la determinación de lapresencia o ausencia de diferentes enzimascodificadas por el material genético delcromosoma bacteriano
• Se detecta a través de medios de cultivoespeciales
Pruebas bioquímicas
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Los medios de cultivo generalmenteestán formados por:
• El sustrato sobre los cuales actúan lasenzimas
• Un indicador que puede detectar ladisminución del sustrato o la presencia deun producto metabólico especifico
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La medición de las diferentes característicasmetabólicas de un microorganismo permitenidentificar la especie
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Metabolismo fermentativo
• Mide la capacidad del microorganismopara utilizar los hidratos de carbono
• Microorganismo actúa sobre loscarbohidratos y acidifica el medio
• El indicador presente vira
Pruebas bioquímicas
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PRUEBAS DE IDENTIFICACIÓN BIOQUÍMICAS
Prueba TSI (triple azúcar hierro)
Contiene lactosa 10 g, sacarosa 10 g y glucosa 1 g.
Resultados:Superficie inclinada/fondo:
- ácida/ácida: Bacterias fermentadoras de lactosa: E. coli, Klebsiella,Citrobacter, Enterobacter, etc
- alcalina/ácida: Bacterias no fermentadoras de lactosa. Salmonella (H2S+),Shigella (H2S -), Yersinia.
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TSI
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TSI
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CITRATO DE SIMMONS
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• Mide la capacidad de un organismo parautilizar el citrato como única fuente decarbono
• Citrato compuesto orgánico constituye unode los metabolitos del ciclo de Klebs
• Las bacterias al utilizar citrato extraennitrógeno de la sal de amonio conproducción de amoniaco que hace vire elindicador
CITRATO DE SIMMONS
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• Para esta prueba se utiliza el agar de citrato deSimmons que contiene citrato de sodio y azul detimol como indicador.
• La única fuente de carbono en este medio es elcitrato.
• Si la reacción es positiva el indicador vira aazul.
• En la reacción negativa los microorganismos nocrecen y el medio conserva su color verde
CITRATO DE SIMMONS
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• El medio también contiene sales deamonio que la bacteria usa comofuentes de nitrógeno
• Fosfato de amonio amoniacoalcalinización del medio
CITRATO DE SIMMONS
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CITRATO DE SIMMONS
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CITRATO DE SIMMONS
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CITRATO DE SIMMONS
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Los medios contienen:
PeptonaExtracto de carneGlucosaAminoácidoPurpura de bromocresol
MEDIO DE LIA
Descarboxilasas de aminoácidos(arginina, lisina, ornitina
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• Los aminóacidos al perder el grupo carboxilose convierten en aminas lo que incrementa elpH del medio y el indicador (púrpura delbromocresol) vira a violeta
R – CH - NH2 - COOH R- CH2 - NH2 + CO2Aminoácido Amina Dióxido de carbono
pH alcalino
Descarboxilasas de aminoácidoslisina, ornitina
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Ejemplo:
Aminoácido amina + dióxido de carbono
Lisina lisina descarboxilasa cadaverina
L- Ornitina Ornitina descarboxilasa Putrescina + CO2
Descarboxilaciòn lisina (LIA y MIO)
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Descarboxilaciòn lisina (LIA)
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Descarboxilaciòn lisina (LIA)
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Prueba que se utiliza para investigar:
Motilidad (M)
Producción de Indol (I)
Descarboxilación Ornitina.
INDOL
MEDIO DE MIO
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INDOL
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Indol
• El indol es uno de los productos dedegradación metabólica del aminoácidotriptofano.
• Las bacterias que poseen la triptofanasa .• La prueba de indol está basada cuando el
indol reacciona con el grupo aldehído delp-dimetilaminobenzaldehído.
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Medio de MIO
(p-dimetilaminobenzaldehído)
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INDOL
Prueba positiva
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INDOL
Prueba negativa
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E. coli
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Escherichia coli.
• Mac Conkey.– Colonias Planas.– Colonias secas.– Colonias Rosadas.
(LF)
• INDOL (+)
k/A Ó A/AK/A
LIATSI
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Escherichia coliClasificación de las cepas productoras de
diarrea1. E. coli enterotoxigénica2. E. coli enteropatógena3. E. coli enterohemorrágica4. E. coli enteroinvasiva5. E. coli enteroagregante
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E. coli
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Klebsiellapneumoniae
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Klebsiella.
• Mac Conkey– LF.– Mucoides. (polisacáridos).
• Indicaciones de laboratorio:– Lysine +– Citrato +– Indol –– +/+ TSI (con gas)– No-motile– Ornithine –
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Klebsiella pneumoniaeCápsula
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Klebsiellapneumoniae
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Proteus
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Proteus.
• Género que contiene varias especies, delas cuales dos tienen importancia médica:– P. mirabais. INDOL (-)– P. vulgaris. INDOL (+)
• Mac Conkey.– NFL.– Swarning.– Olor a podrido.
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Enterobacter
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Enterobacter.
• Mac Conkey.– LF.– Pueden ser Mucoides.MIO:*MOVILIDAD (+)*INDOL: (+) E. agglomeras.*INDOL: (-)E. aerogenas (LIA +),E. cloacae (LIA-).
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Enterobacter
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Shigella
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ShigellaS. dysenteriaeS. flexneriS. sonneiS. boydii
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Shigella• Mac Conkey:
– NLF.• TSI: alcalina/ácida, H2S negativo.
• LIA: K/A o A/A.
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Crecimiento de Shigellaen medio MacConkey
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Salmonella
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SalmonellaClasificación
• S. enteritidis• S. typhimurium• S. typhi• S. paratyphi A• S. paratyphi B (Salmonella schottmuelleri)• S. typhi C (Salmonella hirschfeldii)
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Salmonella enteritidis
• Mac Conkey: NFL.• TSI: alcalina/ácida y H2S +
S. typhimurium.• INDOL (-)
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SALMONELLA SSA
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Salmonella XLD
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Bibliografía:
• MANUAL DE TÉCNICAS EN MICROBIOLOGÍACLÍNICA. M. V. Álvarez, E. Boquet, I. De Fez. AEFA.1990.
• DIAGNÓSTICO Y TRATAMIENTO CLÍNICOS POR ELLABORATORIO. John Bernard Henry, Todd-Sanford-Davidsohn. Tomo I y II. 8ª Edición. Salvat Editores.1988.
• DIAGNÓSTICO MICROBIOLÓGICO. TEXTO Y ATLASCOLOR. Koneman, Allen, Dowell, Sommers. EditorialMédica Panamericana. 2ª Reimpresión. 1990.