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Estado da arte em métodos alternativos para avaliação de

segurança e eficácia em cosméticos

Silvia Berlanga de Moraes Barros

• Inovação em cosméticos – eficácia e segurança

• Porque testes alternativos

• Conceito de métodos alternativos

• Eficácia – testes em humanos

• Segurança

Desafios na inovação em cosméticos Avaliação de Eficácia e Segurança

Inovação incremental – aperfeiçoam-se produtos, processos ou serviços. Lista positiva de ingredientes Avaliação de segurança e eficácia testes em humanos Pode se desenvolver em prazo curto Inovação radical: com base em descobertas ou bases inteiramente novas de conhecimentos, modificam um produto, serviço ou processo. Nem sempre ocorre a curto prazo.

Russell and Burch in 1959 - "The Principles of Humane Experimental Technique."

O principio dos 3 Rs Reduction Refinement Replacement

Marco na história dos

testes alternativos

Porque Testes Alternativos

EU Directive 86/609/EEC Proteção dos anmais usados para fins experimentais ou outros fins científicos

Artigo 7.2:

Um experimento não deve ser realizado se outro método científicamente satisfatório que permita obter resultados semelhantes, sem o uso de animais esteja disponível e possa ser realizado na prática.

Artigp 23:

A Comissão e os estados membros devem estimular a pesquisa para o desenvolvimento e validação de técnicas alternativas que forneçam o mesmo nivel de informação que os obtidos em experimentos com animais, que empreguem menos animais ou que provoquem menso dor.....


7a emenda

27 de fevereiro de 2003, Directiva 2003/15/EC

Testing ban - Proibiu a realização de testes em produtos cosméticos acabados e ingredientes para cosméticos em animais

Aplicação imediata em setembro de 2004

Market ban - proibiram a comercialização na Comunidade Européia, de produtos cosméticos acabadaos e ingredientes para cosméticos que forem avaliados em animais

Aplicação imediata em setembro de 2004 ou logo de métodos alternativos tenham sido validados pelo ECVAM e adotados pela legislação da EU. Prazo máximo 6 anos, 11 de março de 2009, independentemente da disponibilidade de testes alternativos ao uso de animais.

Para toxicidade com doses repetidas, toxicidade sobre a reprodução e toxicocinética - prazo 11 de março de 2013


LEI Nº 11.794, DE 8 DE OUTUBRO DE 2008 Brasil – Lei Arouca – Criação do CONCEA -Conselho Nacional de Controle de Experimentação Animal Artigo 5º - III - monitorar e avaliar a introdução de técnicas alternativas que substituam a utilização de animais em ensino e pesquisa; Decreto 6.899/09, que regulamenta a Lei 11.794/2008 Define Métodos Alternativos Procedimentos validados e internacionalmente aceitos que garantam resultados semelhantes e com reprodutibilidade para atingir, sempre que possível, a mesma meta dos procedimentos substituídos por metodologias que: • não utilizem animais • usem espécies de ordens inferiores • empreguem menor número de animais • utilizem sistemas orgânicos ex vivos ou • diminuam ou eliminem o desconforto


Métodos Válidos x Métodos Validados

• Métodos alternativos válidos: são técnicas que não necessariamente tenham passado pelo processo completo de validação, mas para as quais existe quantidade de dados suficientes provando sua relevância e confiabilidade

• Métodos alternativos validados: são os métodos para os quais a relevância e confiabilidade estão estabelecidas para um propósito particular de acordo com critérios determinados por órgãos oficiais

PAUWELS; ROGIERS, 2004

Validação de Testes Alternativos

International Cooperation on Alternative Test Methods (ICATM) USA ICCVAM - Interagency Coordinating Committee on the Validation of Alternative

Methods – 1997 – NIEHS – 15 Agencies including FDA, EPA and the ATSDR – Agency for Toxic Substances and Disease Registry.

NICEATM – National Inter-agencies Center for Evaluation of Alternative Methods – 1998 – NTP – operational support to ICCVAM

CANADA EUROPE ECVAM –European Center

for the validation of Alternative Methods - 1991 – European Directive 86/609/EEC

BRASIL – Brazilian Center for the validation of Alternative Methods – INCQS and ANVISA, 2012.

JAPAN – JACVAM Japanese Center for the Validation of Alternative Methods

KOREA - KoCVAM (Republic of Korea's Centre for the Validation of Alternative Methods)

Guias Validados e Harmonizados

International Conference on Harmonisation of Technical Requirements for Registration of Pharmaceuticals for Human Use

34 members countries

Section 1: Physical Chemical Properties Section 2: Effects on Biotic Systems Section 3: Degradation and Accumulation 4: Health Effects Section 5: Other Test Guidelines

Validated in vitro test OECD guidelines

• Test No. 456: H295R Steroidogenesis Assay

• Test No. 455: The Stably Transfected Human Estrogen Receptor-alpha Transcriptional Activation Assay for Detection of Estrogenic Agonist-Activity of Chemicals

Toxicidade Ocular

• Test No. 437: Bovine Corneal Opacity

and Permeability Test Method

• Test No. 438: Isolated Chicken Eye

Test Method


TESTES PARA AVALIAR GENOTOXICIDADE E MUTAGENICIDADE

•Test No. 471: Bacterial Reverse Mutation Test •Test No. 473: In vitro Mammalian Chromosome Aberration Test •Test No. 476: In vitro Mammalian Cell Gene Mutation Test •Test No. 479: Genetic Toxicology: In vitro Sister Chromatid Exchange Assay in Mammalian Cells •Test No. 480: Genetic Toxicology: Saccharomyces cerevisiae, Gene Mutation Assay •Test No. 481: Genetic Toxicology: Saccharomyces cerevisiae, Miotic Recombination Assay •Test No. 482: Genetic Toxicology: DNA Damage and Repair, Unscheduled DNA Synthesis in Mammalian Cells in vitro •Test No. 487: In Vitro Mammalian Cell Micronucleus Test


Testes para avaliação de segurança de produtos de uso tópico (cosméticos)

•Test No. 435: In Vitro Membrane Barrier Test Method for Skin Corrosion •Test No. 430: In Vitro Skin Corrosion: Transcutaneous Electrical Resistance Test (TER) •Test No. 431: In Vitro Skin Corrosion: Human Skin Model Test •Test No. 439: In Vitro Skin Irritation Reconstructed Human Epidermis Test Method


• Test No. 432: In Vitro 3T3 NRU Phototoxicity

• Test No. 428: Skin Absorption:

In Vitro Method

• Develop in vitro alternatives to animal tests currently used for the risk

assessment of potential skin or lung sensitizers

• 28 partners: 9 industries + 15 universities + 4 organizations

• Focus on allergens

- Worldwide health problem

- Skin and lung are the most important targets for allergens

• Major Sens-it-iv delivery is a 2-tier assay capable of identifying and ranking

sensitizer potency

BACKGROUND – Sens-it-iv project

NCTC2544 IL-18 assay Epidermal Equivalent potency assay

Corsini E. et al., 2009. Toxicol in Vitro 23(1):789-96 dos Santos GG. et al., 2009. Toxicol In Vitro 23(2):349-55 dos Santos GG. et al., 2011. Toxicol In Vitro 25(1):347-57

TIER approach for eye irritation evaluation

Combination of tests in a sequencial way

REGULAMENTAÇÃO BRASILEIRA

• Guia para Avaliação de Segurança de Produtos Cosméticos, ANVISA, 2012

• Caráter de orientação

Uma vez que o produto cosmético é de livre acesso ao consumidor, o mesmo deve ser seguro nas condições normais ou razoavelmente previsíveis de uso. A busca dessa segurança deve incorporar permanentemente o avanço do estado da arte da ciência cosmética.

• A avaliação da segurança está baseada na avaliação do risco e deve considerados parâmetros toxicológicos dos ingredientes com base em dados atualizados, observadas as condições de uso do produto cosmético e o perfil do consumidor alvo

Risco = toxicidade x exposição


• Risco de produtos cosméticos Toxicidade das substâncias isoladas Formulações Interações entre substâncias Modificações de liberação Nível de exposição • Embora os produtos cosméticos sejam aplicados

topicamente, um ou mais de seus ingredientes podem permear a barreira cutânea, enquanto que outros, devido à sua apresentação e modo de uso, podem ser ingeridos ou inalados, como por exemplo, os dentifrícios, enxaguatórios bucais e spray para cabelos.


• A avaliação de toxicidade de um ingrediente cosmético está intimamente relacionada à natureza físico-química do ingrediente e à metodologia de avaliação utilizada (via de administração, tempo e frequência de exposição, entre outros).

• Por esta razão, guardadas as respectivas particularidades de cada ingrediente, o Scientific Committee on Consumer Safety (SCCS) tem indicado a realização dos seguintes ensaios pré-clínicos:

• Toxicidade sistêmica aguda; • Corrosividade e irritação dérmica; • Sensibilização cutânea; • Absorção/penetração cutânea; • Doses repetidas; • Mutagenicidade/genotoxicidade; • Toxicidade subaguda e subcrônica; • Irritação ocular; • Irritação de mucosas; • Efeitos tóxicos induzidos pela radiação UV (fototoxicidade,

genotoxicidade, • fotoalergia); • Carcinogenicidade; • Toxicidade do desenvolvimento e reprodutiva

(teratogenicidade); • Toxicocinética e Toxicodinâmica.

Eficácia

• Depende finalidade do produto • Garantir que o produto atinja o alvo desejado Ex.

Fotoproteção – camada superficial da pele Estimulo a produção de colágeno – derme Métodos in vitro para eficácia podem não responder perguntas sobre liberação em camadas específicas da pele Métodos in vitro de permeação cutânea

Eficácia e Segurança

• Dois princípios básicos devem ser observados nos testes sem uso de animais para avaliação de segurança e eficácia.

1) Garantir que o produto atinge o alvo desejado Atividade antioxidante em testes in vitro não significa que atingirá as camadas da pele onde se espera a atividade. 2) Aproximação com a situação em humanos (linhagens celulares, tecidos biomiméticos) 3) O teste se aproxima da situação de uso humano

OBRIGADA PELA ATENÇÃO

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mailto:[email protected]

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