pharmacokinetics, distribution, metabolism and excretion of [3h]ucn-01 in rats and dogs after...

7
ORIGINAL ARTICLE Kenichi Yasoshima á Takashi Kuwabara á Eiichi Fuse Tomoko Kuramitu á Noriaki Kurata Hiroyoshi Nishiie á Takayoshi Oishi Hiroyuki Kobayashi á Satoshi Kobayashi Pharmacokinetics, distribution, metabolism and excretion of [ 3 H]UCN-01 in rats and dogs after intravenous administration Received: 4 February 2000 / Accepted: 31 August 2000 / Published online: 30 November 2000 Ó Springer-Verlag 2000 Abstract Purpose: To evaluate the metabolic fate of UCN-01, a signal transduction inhibitor, blood and plasma concentrations, distribution, metabolism and excretion were investigated in rats and dogs after intra- venous administration of [ 3 H]UCN-01. Methods: The radioactivity in plasma, blood and tissues was measured after intravenous administration of UCN-01. In addi- tion, the radioactivity excreted in bile, urine and feces was also determined. Results: The radioactivity in rat and dog plasma disappeared triphasically with terminal half-lives of 21.3 and 27.2 h, respectively. The ratios of the blood-to-plasma concentrations ranged from 0.82 to 1.13 in rats and 0.81 to 1.73 in dogs. From 0.5 to 4 h after giving [ 3 H]UCN-01 to rats, the radioactivity in all tissues except the brain and testes was higher than in plasma. The highest concentration was observed in the lungs followed by the liver and kidneys. The radioac- tivity was mainly excreted in feces, reaching 96.0% of the radioactivity dose in rats and 78.4% in dogs up to 168 h after injection. Since the biliary excreted radio- activity was 67.2% over 48 h in bile duct-cannulated rats, most of the radioactivity excreted in feces was from biliary radioactivity. There were several metabolites in bile samples, but little UCN-01. Conclusions: UCN-01 is mainly eliminated by the liver, and there are high con- centrations of radioactivity derived from [ 3 H]UCN-01 in all tissues except the brain and testes. Key words 7-Hydroxystaurosporine UCN-01) á Protein kinase inhibitor á Metabolism á Excretion á Pharmacokinetics Introduction UCN-01 7-hydroxystaurosporine; Fig. 1) was originally reported as a selective protein kinase C inhibitor. It exhibits potent antitumor activity in both in vitro and in vivo models [1, 2, 5]. Recent studies have revealed that UCN-01 induces G1 phase accumulation in several human tumor cells [4, 10, 15] and this eect is associated with dephosphorylation of the retinoblastoma protein and its regulatory factors including cyclin-dependent kinase 2 CDK2) and CDK inhibitors p21 Cip1/WAF1 and p27 Kip1 [4]. UCN-01 also induces apoptosis in leukemia and colon carcinoma cell lines [9, 17, 20]. Furthermore, UCN-01 synergistically enhances the antitumor activity of cytotoxic chemotherapeutic agents such as mitomycin C, cisplatin and 5-¯uorouracil with G2 abrogation [3, 12, 16]. Currently, UCN-01 is being evaluated as a new type of anticancer drug in patients with refractory neoplasms in the United States and Japan [6, 13]. We have previously reported the plasma concentra- tion-time pro®les of UCN-01 measured by HPLC in experimental animals and patients [6, 11, 13]. UCN-01 in plasma after intravenous administration disappears biphasically in mice and rats, and triphasically in dogs with elimination half-lives of about 4 h in mice and rats and 12 h in dogs. The systemic clearance CL tot ) values in mice, rats and dogs are relatively high 1.93±2.64, 2.82±3.86 and 0.616 l/h per kg, respectively). The dis- tribution volumes at steady-state Vd ss ) in mice, rats and dogs are also high 7.89±8.42, 13.0±16.9 and 6.09 l/kg, respectively). No saturation in pharmacokinetics was observed in these animals [11]. On the other hand, the elimination half-lives of UCN-01 in patients is extremely long 253±1660 h) and the Vd ss and CL tot are very low 0.0796±0.158 l/kg and 0.0407±0.252 ml/h per kg, respectively) [6]. Protein binding studies have revealed that this marked species dierence in pharmacokinetics is due, at least in part, to speci®cally high binding of UCN-01 to human a 1 -acid glycoprotein [6, 7]. The binding anity of Cancer Chemother Pharmacol 2001) 47: 106±112 DOI 10.1007/s002800000213 K. Yasoshima á T. Kuwabara &) á E. Fuse á T. Kuramitu N. Kurata á H. Nishiie á T. Oishi á H. Kobayashi á S. Kobayashi Drug Development Research Laboratories, Pharmaceutical Research Institute, Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd., 1188, Shimotogari, Nagaizumi-Cho, Sunto-Gun, Shizuoka 411-8731, Japan e-mail: [email protected] Tel.: +81-559-892021; Fax: +81-559-892073

Upload: kenichi-yasoshima

Post on 14-Jul-2016

219 views

Category:

Documents


3 download

TRANSCRIPT

Page 1: Pharmacokinetics, distribution, metabolism and excretion of [3H]UCN-01 in rats and dogs after intravenous administration

�������� �����

������� ������ � �� ��� �������� � ������ ����� �������� � ���� � ������������ ������ � �� ���� ��������� � ������� � ����� �������

������������ � � ������� ������� � �� ��������� ���������� ��� �� ��� ����� ��� ��� ��� �����

���� ���� � �������� ���� ���������� �� ���� � ���� � !��" #�� $%" %�� �� �$��&��� ����� '�� %���()��"�� ����

������� �������� �$ ���"���� �#� &����$" � *��� $*+�(��, � �%�" ���% ���� $% %# � �$�, �"$$� �%��"� &� �$%��%���� $% , � �� ��� $%, &����$" & �%��-���� $% .��� %�� � ����� % ��� �%� �$� �*��� %���(��%$� ��& % ���� $% $* /�01+�(��2 ������ �#���� $��� � �� % �"� &�, �"$$� �%� � �� .� &�� �����*��� %�����%$� ��& % ���� $% $* +�(��2 �% ��� (� $%, �#� ��� $��� � �� �-������ % � "�, �� %� �%� *��� .� �" $ �����& %��2 ���� �� �#� ��� $��� � �� % ����%� �$� �"� &� � �������� �� �#� ��""� . �# ���& %�"#�"*(" �� $* ��2� �%� �32� #, �� ���� ��"�2 �#� ��� $ $*�#� �"$$�(�$(�"� &� �$%��%���� $% ��%��� *�$& �24� �$�2�� % ��� �%� �24� �$ �23� % �$� 2 ��$& �25 �$ � #�*��� � � %� /�01+�(�� �$ ��� , �#� ��� $��� � �� % �""� �� �-���� �#� ��� % �%� �� �� .� # �#�� �#�% %�"� &�2 �#� # �#� � �$%��%���� $% .� $� ����� % �#�"�%� *$""$.�� �� �#� " ��� �%� 6 �%�� 2 �#� ��� $��(� � �� .� &� %"� �-������ % *��� , ����# %� 782�9 $*�#� ��� $��� � �� �$ � % ��� �%� 342�9 % �$� �� �$�84 # �*��� %:��� $%2 ' %�� �#� � " ��� �-������ ��� $(��� � �� .� 832�9 $��� �4 # % � "� ����(��%%�"������� , &$ � $* �#� ��� $��� � �� �-������ % *��� .� *�$&� " ��� ��� $��� � ��2 �#��� .��� �����" &����$" �� %� "� �&�"� , ��� " ��"� +�(��2 ���� ������� +�(�� &� %"� �" & %���� �� �#� " ���, �%� �#��� ��� # �# �$%(��%���� $% $* ��� $��� � �� ��� ��� *�$& /�01+�(�� %�"" � �� �-���� �#� ��� % �%� �� �� 2

��� ��� 3(0���$-� ����$ �$� %� ;+�(��< �!�$�� % 6 %� � %# � �$� � =����$" & � -���� $% �!#��&��$6 %�� �

!��������

+�(�� ;3(#���$-� ����$ �$� %�> � �2 �< .� $� � %�""����$���� � � �"��� �� ��$�� % 6 %� � %# � �$�2 ���-# � � �$��%� �%� ��&$� ��� � �� % �$�# % � ��$ �%� %� �$ &$��" /�, �, 512 ����%� ��� � #��� �����"�� �#��+�(�� %���� �� �#� � ����&�"�� $% % �����"#�&�% ��&$� ��"" /�, ��, �51 �%� �# �?��� � $� ����. �# ���#$ �#$��"�� $% $* �#� ��� %$�"� �$&� ��$�� %�%� � ����"��$�� *���$� %�"�� %� ���" %(����%��%�

6 %� � � ;@A�< �%� @A %# � �$� ��� ���B��� �%���3A �� /�12 +�(�� �" $ %���� ��$��$ % "��6�& ��%� �$"$% ���� %$&� ��"" " %� /7, �3, ��12 ����#��&$��,+�(�� �%��� � ��""� �%#�%�� �#� �%� ��&$� ��� � ��$* ���$�$- � �#�&$�#������� � ���%� ��# � & �$&�� %, � �"�� % �%� 5(C�$�$���� " . �# �� ���$��� $%/�, ��, �812 ����%�"�, +�(�� �� %� ���"����� � �%�. ���� $* �%� ��%��� ���� % ��� �%� . �# ��*����$��%�$�"� & % �#� +% ��� '���� �%� D���% /8, ��12

B� #��� ���� $� "� ���$���� �#� �"� &� �$%��%���(� $%(� &� ��$E"� $* +�(�� &�� ���� �� 0!� %�-��� &�%��" �% &�" �%� ��� �%� /8, ��, ��12 +�(�� % �"� &� �*��� %�����%$� ��& % ���� $% � ������ � �#� ��""� % & �� �%� ��� , �%� �� �#� ��""� % �$� . �# �" & %�� $% #�"*(" �� $* ��$�� � # % & �� �%� ��� �%� �� # % �$� 2 �#� � ��& � �"����%�� ;��$�< ��"�� % & ��, ��� �%� �$� ��� ��"�� ��"� # �# ;�27�F�28�,�24�F�248 �%� �28�8 "�# ��� 6�, �� ���� ��"�<2 �#� � (�� ��� $% �$"�&� �� �����( ���� ;)� < % & ��, ��� �%��$� ��� �" $ # �# ;3247F42��, ��2�F�827 �%� 82�7 "�6�,�� ���� ��"�<2 �$ ������ $% % �#��&��$6 %�� � .� $� ����� % �#� � �% &�" /��12 �% �#� $�#�� #�%�, �#��" & %�� $% #�"*(" �� $* +�(�� % ��� �%� �-���&�"�"$%� ;�5�F�88� #< �%� �#� )� �%� ��$� ��� ����"$. ;�2�378F�2�54 "�6� �%� �2���3F�2�5� &"�# ��� 6�,�� ���� ��"�< /812

!�$�� % � %� %� ��� � #��� �����"�� �#�� �# &��6�� ��� � � ?���%�� % �#��&��$6 %�� � ���, ��"�� � % ����, �$ ��� E��""� # �# � %� %� $* +�(�� �$#�&�% ��(�� � �"��$��$�� % /8, 312 �#� � %� %� �G% �� $*

�%��� #�&$�#�� !#��&��$" ;����< �3� ��8F���@�� ��2���3� ���4��������

A2 H� $ # &� � �2 A�.����� ;�< � 2 �� � � �2 A���& ���2 A����� � 02 � # � � �2 � # � 02 A$���� # � '2 A$���� # @��� @���"$�&�%� �� ����# ���$���$� � ,!#��&����� ��" �� ����# �% � ����,A�$.� 0�66$ A$��$ $2, ���2, ��44,'# &$�$��� , ���� I�& (#$,'�%�$(��%, '# I�$6� ���(43��, D���%�(&� "� ��6� # 26�.�����J6�$.�2�$2:���"2� K4�(557(47����> ��-� K4�(557(47��3�

Page 2: Pharmacokinetics, distribution, metabolism and excretion of [3H]UCN-01 in rats and dogs after intravenous administration

+�(�� �$ ��� �%� �$� ��(�� � �"��$��$�� % &��#.��6�� �#�% �$ #�&�% ��(�� � �"��$��$�� % /8, 3120$.����, � .$�"� � "" �� ���� � �*�" �$ %�� � ���� �#�� �$ � $% $* /�01+�(�� % �-��� &�%��" �% &�" %$���� �$ ���"���� �#� &����$" � *��� $* +�(�� % �#��$��2 L���� � $* .��6 ��$�� % � %� %�, �#� � �$ � $%$* +�(�� % ��� �%� �$� &�� ��C��� �#� � �$ � $%$* MM*��� +�(��NN % #�&�% 2 �#���*$��, .� �$%������ ��� � $% �#� �"$$� �%� �"� &� �$%��%���� $% , � �� (��� $%, &����$" & �%� �-���� $% $* /�01+�(�� % ��� �%� �$� 2

"������ �� ������

#�& ��"

+�(�� ;3(#���$-� ����$ �$� %�< .� ��$����� �� *��&�%��� $% % $�� % � ���� � �� �� ��� ���� $� "� /�412 /�01+�(�� ;� �2 �<.� �%�#� I�� �� �&�� #�& �%���%�� $%�" ;� ��"� #�"*$%�, +A<. �# � ��� E� ��� � �� $* 5�4 �LO�&&$" ;��P 85�7< $� ��3 �LO�&&$" ;��P3�5�<2 /�01+�(�� .� ��� E�� �� 0!� �$ ���� $�#�& ��" ��� �� $* &$�� �#�% 789 :� � ��*$�� � �2 ����$% �(� "� ;0!� �����< .� ����#� �� *�$& A�%�$ #�& ��" ;�$6�$,D���%<2 ��#�� �����%� � �� .��� $* �%�"�� ��" ����� $��� %���$&&��� �""�2

!������� $% $* �$ %� $"�� $%

!�� E�� /�01+�(�� .� �� �� �%��� % ��$��% �%� � $"����$���#�� . �# �%"���"�� +�(�� % �2� &��&" � �� � �� � #������. �# � $� �& #���$��%�#$ �#��� �$����#������ ;528 &��&"<�%� $� �& �#"$� �� ;82� &��&"<2 '$"�� $% $* /�01+�(�� ���$%��%���� $% $* �235 &��&" ;�2�5F5275 =LO�&"< .��� ���(����� *$� ��� , �%� �2� &��&" ;�274 =LO�&"< *$� �$� 2 �#� $"�(� $% .��� ��& % ����� �� �$ � $* � &"�6� ;��� < �%� �25 &"�6�;�$� <2

�% &�"

=�"� '������ @�."�� ��� .��� $��� %�� �� 8 .��6 $* ��� *�$&� #$% '� ;'# I�$6�, D���%<, �%� � �� �� 3 .��6 $* ��� .#�%�#�� .� �#�� ���F�3� �2 =�"� ����"� �$� .��� $��� %�� *�$&0�! ;A�"�&�I$$, = �#2<, �%� � �� �� � ���� $* ��� .#�% �#��.� �#�� �� �$ �� 6�2 �"" �% &�" .��� ���� �$&�� �$ � ��(# " �#�����6 ���"� �%��� �$%��$""�� ��&�������� �%� #�& � �� �$%� � $% ,. �# *��� ���� �$ ��%���� "��$���$�� �#$. �%� .���� ��*$�� �#� ���� $* �#� �-��� &�%� 2 �$$� �%� .���� .��� � ��% �� " � ��& ���� %� 8 # �*��� �$ %�2 �% �#� � "� �-���� $% ����, �" %�

%�"�� %� 59 ���$ � .� � ��% % ���� $* .����2 �"" �-��� &�%� .��� ����$��� �� �#� B�"*��� $&& ���� *$� -��� &�%��"�% &�" $* $�� % � ����2

L"$$� �%� �"� &� �$%��%���� $% �%� �-���� $% % ���

�$� �#� 6 %�� � ��� � , /�01+�(�� �� �25 &��6� .� ��& % ������$ *$�� &�"� ��� � � �#� *�&$��" �� %2 L"$$� �&�"� ;�2�F�2� &"<.��� �� �""� �$""����� *�$& �#� �� " �� % �� �2�5, �2�, �2�5, �25, �, �,�, 4, ��, ��, �4 �%� 3� # �*��� �$ %� %�$ #���� % I�� ��� ""������� ;@��&&$%� '� �%� E�, L�$$&�"", !�2<2 � �$�� $% $* ���#�"$$� �&�"� .� � �� *$� �#� &�� ���&�%� $* ��� $��� � ��� ����"�, �%� �"� &� �&�"� .��� $��� %�� �� ��%�� *���� $% $* �#���&� %��� ;��,��� �, �� & %, � �<2 �$� �#� �-���� $% ��� � , �*��� %�����%$� ��& % ���� $% $* /�01+�(�� �$ �%$�#�� E�� &�"���� , �#� ��� .��� ���� %�� % &����$" � ���� 2 +� %� �%� *��� �&�"� .��� �$""����� ��� %� �#� *$""$. %� ��� $� �� �$ �84 #�*��� �$ %�� �F�, �F4, 4F��, ��F�� �%� ����� �� # *$� �� %�, �%��F��, ��F�� �%� ����� �� # *$� *��� 2 �#� *��� �&�"� .���#$&$��% I�� . �# .����2 �*��� �&�" %�, �#� ��� .��� 6 ""�� . �#� ��#�"��#��2 �#� ����� � .��� �"���� % 35� &" $* �25 � $� �&#���$- �� $"�� $% �� 5� � *$� � *�. ��� �%� �#�% #$&$��% I��2�#� %��� $� $* �#� ���� .��� .� #�� . �# 5�9 &��#�%$" �%� �#���� $��� � �� % �#� .� # %� .� �" $ �����& %��2

L"$$� �%� �"� &� �$%��%���� $% �%� �-���� $% % �$�

/�01+�(�� .� ��& % ����� �� � �$ � $* �25 &��6� �$ �.$ &�"��$� � � �#� *$��"�� �� %2 L"$$� �&�"� ;5 &"< .��� �$""����� *�$&�#� �$%���"�����" *$��"�� �� % � %� � #���� % I�� �� %�� �� �2�4�,�2�5, �25, �, �, �, 8, 4, ��, ��, �4, 3�, 78, ���, ��� �%� �84 # �*����$ %�2 � �$�� $% $* ���# �"$$� �&�"� .� � �� *$� �#� &��( ���&�%� $* �#� ��� $��� � �� � ����"�2 �" $, �% �" O�$� $* �"$$�.� � �� �$ &�� ��� �#� #�&��$�� �2 !"� &� �&�"� .��� $��� %���� ��%�� *���� $% $* �#� ��&� %��� ;���� �, �� & %, �$$& ��&���(�����<2 �#� �$� .��� #$� �� % &����$" � ���� �%� �#� �$%��(%�$� "� �-������ �� %� �%� *��� .��� �$""����� �� �$ �84 # ��� %��#� *$""$. %� ��� $� � �F8, 8F��, ��F�� �%� ����� �� # *$� �� %�,�%� ����� �� # *$� *��� 2 �� 8 �%� �� #, �� %� % �#� �"����� .� �" $ �$""����� � %� � ���#����2 �#� ���� .��� .� #�� . �# 5�9&��#�%$" �%� �#� .� # %� �$""����� �*��� �#� �-��� &�%�2 �#�*��� �&�"� .��� #$&$��% I�� . �# .����2

L " ��� �-���� $% % ���

+%��� " �#� �%� �#� � . �# � ��#�"��#��, �#� � "� ���� $* &�"� ��� .��� ��%%�"���� . �# � !(�� �$"���#�"�%� ���� ;L���$% @ �6 %( $%, !�� ���%�, �2D2<2 �*��� ���$���� *�$& �#� �%� �#� �,/�01+�(�� �� � �$ � $* �25 &��6� .� ��& % ����� �$ *$�� &�"���� � � �#� *�&$��" �� %2 �#� ��� .��� 6��� % �� ��� % %� ���� �%� � "�, �� %� �%� *��� .��� �$""����� ��� %� �#� *$""$. %� ��� ($� � �F�, �F�, �F8, 8F4, 4F��, ��F�� �%� ��F�4 # *$� � "�, �F��,��F�� �%� ��F�4 # *$� �� %�, �%� �F�� �%� ��F�4 # *$� *��� 2 �*��� �&�" %�, �#� ��� .��� 6 ""�� . �# � ��#�"��#�� �%� �#� ����� � .��� ������� � �� �� ��� ��$��2 �#� *��� �&�"� .��� #$&$��(% I�� . �# .����2

=����$" �� % ��� �"� &�, � "� �%� �� %�

�% $���� �$ %�� � ���� �#� &����$" & $* /�01+�(��, ��� �"� &�,� "� �%� �� %� �&�"� .��� ��:����� �$ 0!� �%�"� 2 !"� &� �&�"� .��� ����$�� % I�� . �# �% �O��" �$"�&� $* ��(�$"�����$% �� "� �%�, �*��� ��%�� *���� $%, �#� ����%���%� .��� ��(:����� �$ 0!�2 �#� � "� �&�"� .��� � "���� . �# &$� "� �#� �;�<, �� �� ��� ��"$., ��*$�� 0!�2 �#� 0!� � ��& �$% ���$* � $"��%� &$��"� ��8 ��&� �%� � �3� ��� $ $�$�� ������$�;L��6&�%, ��""���$%, �" *2< �O� ���� . �# �% �=(��� �@' �$"(�&% ;�5� � 82� && 2�2> H=, A�$�$, D���%<2 �#� &$� "� �#� � .��� �2�5 � �#$ �#��� ��?�� �$%�� % %� �9 �� ��#�"�& %� ;�0

���� � #�& ��" �������� $* /�01+�(��2 �#� ������� ����� �%� �#� �� � �& "���" %� �$ � $%

��3

Page 3: Pharmacokinetics, distribution, metabolism and excretion of [3H]UCN-01 in rats and dogs after intravenous administration

32�< �%� ����$% �� "� �� � ��� $ $* 7�� ;�< $� ��8 ;L<2 �#� *���� $% $*&$� "� �#� � ;L< .� %���� �� " %���"� *�$& � �$ ���9 $��� �� & %�%� #�"� �#��� *$� �#� *$""$. %� �� & %2 �#� �$��" C$. ���� .� ���� � &"�& %2 �#� ��� $��� � �� % �#� �"���� .� &�� ���� . �# ���� $ $�$�� ������$� �*��� & - %� . �# '� %� $" Q(0 ;B�6$ !���#�& ��", � �6�, D���%< �� � C$. ���� $* � &"�& %2

� �� � �� ��� $% % ���

�$ �����& %� �#� � �� ��� $��� � ��, ��� .��� 6 ""�� �� �"��� %�*�$& �#� *�&$��" ������ �25, �, �, 4 �%� �� # �*��� ��& % ���� $% $*/�01+�(�� � � �#� �$%���"�����" *�&$��" �� % �� � �$ � $* �25 &��6�2 �#��� ��� .��� � �� *$� ���# � &�(�$ %�2 L"$$� .� �$""����� %�$ #���� % I�� ���� �%� �#� �"� &� .� $��� %�� � �� �� �����$��2 �% �" O�$� $* �"$$� .� �" $ � �� �$ &�� ��� �#� #�&��($�� �2 �#� � �� %� ����� % �#� ���"� � .��� ��&$��� �%� �#� .��.� �#� .� &�� ����2 �#� ��� %, 6 �%�� , �"��%, ��%���� , �� �� , �$&��#, &�"" %�� � %� �%� "���� %�� � %� .��� #$&$��% I�� . �#�% ����$�� ��� �$"�&� $* �" %�2 �#� ��� $��� � �� % �#� � � �� �%� � �� #$&$��%��� .� �����& %��2

@����& %�� $% $* ��� $��� � �� % �#� �&�"�

�$��" �%� %$%�$"�� "� ��� $��� � �� .��� &�� ���� % �#� �"$$�,�"� &�, �� %�, � "�, *��� #$&$��%���, ����� #$&$��%��� �%����� .� # %� 2 �#� �$"�� "� ��� $��� � �� .� �" $ ��"��"���� �� ������� %� %$%�$"�� "� ��� $��� � �� *�$& �$��" ��� $��� � ��2 �#��$��" ��� $��� � �� % �#� �"� &�, �� %�, � "� �%� ���� .� # %� .� �����& %�� �*��� �&�" *� %� . �# " O� � � %� ""��$� ;'� %� $"Q(0 $� +"� &� �$"�> !��6���, =�� ��%, �2<2 �#� �"$$�, *��� #$&$��%��� �%� ����� #$&$��%��� .��� � $"��� % � ��� $"��� ;'$"���"�> @� �# !��� #�& ��" , �$6�$, D���%<,������� $���% �#� . �# #���$��% ���$- ��, �%� �#�% & -�� . �#" O� � � %� ""��$� ;0 $% � �"�$�, !��6���<2 �$� �#� �����& %�� $%$* %$%�$"�� "� ��� $��� � ��, �#� �&�"� .��� �� �� % � *���I�(����� �$ ��&$�� �#� �$"�� "� ��� $��� � ��, �%� �#�% ������� � ��( �� ��� ��$��2 �#� � �� �%� � �� #$&$��%��� .��� �� �� % �*���I�(�����, � $"��� % '$"���"� �� 5� � *$� � #, �%� �#�% & -��. �# 0 $% � �"�$�2 �$� �"" �&�"� , ��� $��� � �� .� &�� ����� %� � " O� � � %� ""�� $% �$�%��� ;�'�5�� $� �� (��� ��� $�����, !��6���, �'85��> L��6&�%<2

�#� �$�%� %� �G� �%�� .� ���$&�� ��""� �$������� � %� �%�-���%�" ��%����2 '�&�"� *�$& �$%��$" �% &�" ������� �� �#� �&� &��#$� .��� � �� �$ $��� % �#� ���6��$�%� �$�%� 2 �#���� $��� � �� ������ $% " & � .� ��E%�� � �. �� �#� ��"�� $*�#� �$��� �$%� %� ���6��$�%� �$�%�2 �#� ��� $��� �� �$%��%���(� $% % �"$$�, �"� &� �%� � �� �&�"� .� ��"��"���� � �#��O� ��"�%� �$%��%���� $% $* /�01+�(�� *�$& �#� ��� E� ��� $(��� � �� $* ���# �$ %� $"�� $%2 �#� �-������ ��� $��� � �� % � "�,�� %� �%� *��� .� �-��� �� � � �����%���� $* �#� �$ �� ��� $(��� � ��2 �#� ��� $ $* �#� ��� $��� � �� % ����#�$���� �$ �#�� %�"$$� ;�L< .� ��"��"���� *�$& �#� *$""$. %� �O��� $%�

�L�9� � �� � ��� 0������ � ���

.#��� 0� �#� #�&��$�� � �%� �� �#� ��� $ $* �#� �"$$� �$ �#��"� &� �$%��%���� $%2

�% �# ���$��, %�� �#� �$"�� "� ��� $��� � �� ��% �� �$% ������$ $� � %��� *�$& �� � ���� .����, �$ ��$ � �$%*� $%, M��� $��� � ��N %� ���� M%$%�$"�� "� ��� $��� � ��N, �%"� $�#��. � ��� E��2

!#��&��$6 %�� � �%�"�

�%� � ���" �#��&��$6 %�� � ����&���� .��� �%�"�I�� � %� &$�(�"( %����%��%� &��#$� /4, ��12 �#� �$%��%���� $% $* ��� $��� � �� % �"� &� �%� �"$$� .��� �$%������ �$ "$��� �#& �%� �"$������� % � � &�2 �#� "$�� $* �#� ���& %�" �#� � ;�" & %�� $% �����$% ��%� $* �#� � �#� �< .� �����& %�� �� "$�(" %��� ����� $%�%�"� , �%� �#$ � $* �#� ��$%� �%� E� � �#� � ;�" & %�� $% �����$% ��%� $* �#� � �%� � �#� �< .��� �����& %�� �� �#� &��#$� $*

�� ���" 2 �% �# ����, �#� � &�(�$ %� $* �#� � �#� � .��� �� �(%���� �� �%� �*��� �� # �%� �#$ � $* �#� � �#� � �� �%� �*��� � #2�#� �" & %�� $% #�"*(" �� ;�����, ����� �%� �����< .��� ��"��"���� ��� � � %� �287� �� �#� �" & %�� $% ���� �$% ��%� $* �#� �� ���� ���#� �2 �#� ���� �%��� �#� �$%��%���� $%(� &� ����� ;�+�F�< .� ��"��"���� �� �#� �����I$ ��" ��"�, �%� �-����$"���� �$ %E% ��2 �#� � ��& � �"����%�� ;��$�< .� ��"��"���� � �$ ���+�F�2

#� ���

L"$$� �%� �"� &� ��� $��� � �� �$%��%���� $%(� &���$E"�

� ���� � #$. �#� ��� $��� �� �$%��%���� $%(� &���$E"� % �"� &� �%� �"$$� �*��� %�����%$� ��& % (���� $% $* +�(��2 �*��� %�����%$� ��& % ���� $% $*/�01+�(�� �� �25 &��6� �$ ��� , �#� �"$$� �$%��%���(� $% $* ��� $��� � �� .� �2735R�2��� �� �O� ��"�%� �&";&��%R'@ $* *$�� ��� < �� �2�5 #, �%� �#�% � ��������� �#� ��""� �$ ��"$. �#� ������ $% " & � �*��� �4 #2 �$

���� � � L"$$� ;�< �%� �"� &� ;�< ��� $��� �� �$%��%���� $%� &�(��$E"� �*��� %�����%$� ��& % ���� $% $* /�01+�(�� �� ��$ � $* �25 &��6� �$ ��� 2 ��# �$ %� ����� �%� �#� &��%R'@*�$& *$�� ��� 2 �%� � ���" �"$$� ;�, �< �%� �"� &� ;�, �<��� $��� �� �$%��%���� $% � &�(��$E"� �*��� %�����%$� ��& % (���� $% $* /�01+�(�� �� � �$ � $* �25 &��6� �$ �.$ �$�

��4

Page 4: Pharmacokinetics, distribution, metabolism and excretion of [3H]UCN-01 in rats and dogs after intravenous administration

���& %�" �" & %�� $% �#� � ;� �#� �< .� $� ����� %�$%��� � �$ �"� &� ;� �2 ��<2 �#� �"� &� ��� $��� � ���� �2�5 # ;�2��R�2�� �� �O� ��"�%� �&"< .� ���� & "���$ �#� "���" % �"$$� ;� �2 ��<, �%� � �������� �� �#�( ��""� �$ �2���R�2��� �� �O� ��"�%� �&" �� 3� # . �# ����& %�" #�"*(" *� $* ��2�R�2� # ;���"� �<2 �#� �+��"�� *$� �"$$� �%� �"� &� .��� 52�� �%� 325� ���O� ��"�%� � #�&", �� ���� ��"�2 �#� �"$$� �$ �"� &��$%��%���� $% ��� $ ;��< .��� �"&$ � �$% ��%�, ��%� %�*�$& �24� �$ �2��, �%� .��� %����%��%� $* �#� � &� �*��� %:��� $%2 �"��"���� �L ��"�� .��� ��289 �$ 5�2792

�*��� %�����%$� ��& % ���� $% $* /�01+�(�� ���25 &��6� �$ �$� , �#� �"$$� ��� $��� � �� .� �2��3 ���O� ��"�%� �&" ;&��% $* �.$ �$� < �� �2�4� # �%� � (�������� � �#� ��""�2 �� �� # �*��� �$ %�, �#� ��� $(��� � �� % $%� �$� .� �2��� �� �O� ��"�%� �&" �%� �#�� % �#� $�#�� .� ��"$. �#� ������ $% " & � ;� �2 �L<2 �$���& %�" �" & %�� $% �#� � ; � �#� �< .� $� ����� %� �#�� �$�2 �#� �"� &� ��� $��� � �� % $%� �$� .� �2��5 �� �O� ��"�%� �&" �� �2�4� # �%� � �������� �� (�#� ��""� �$ �2���� �� �O� ��"�%� �&" �� 3� # . �# ����& %�" #�"*(" *� $* �32� #, .# �# .� �$&�����"� . �#�#�� % ��� ;���"� �<2 �% �#� $�#�� �$�, �#� �"� &���� $��� � �� .� �2��� �� �O� ��"�%� �&" �� �2�4� #, �%��#�% � �������� � �#� ��""� �$ ��"$. �#� ������ $%" & � �*��� �� #2 �#� � �� ��� $% $* ��� $��� � �� %�$����#�$���� ;�L< % �$� .� # �#�� �#�% % ��� 2 �#�� , �� ��"�� �� �$ � # �*��� �$ %� .��� �25�F�23�, �%��#�% ������ �� �$ �24�F�273 �� "���� � &�(�$ %� 2 �L��"�� .��� ��$�� 859 �� �$ � #2 �% �$�# ��� �%� �$� , �% E��%� "���" $* �$"�� "� ��� $��� � �� .��� *$�%� %�"$$� �%� �"� &� �&�"� �� � &�(�$ %� % �#� �" & (%�� $% �#� � ;���� %$� #$.%<2

+� %��� �%� *���" �-���� $% $* ��� $��� � ��

�#� �� %��� �%� *���" �-���� $% $* ��� $��� � �� % ��� �%� �$� �*��� %�����%$� ��& % ���� $% $* /�01+�(�� ��� #$.% % ���"� �2 �% ��� , �#� ��� $��� � ��.� &� %"� �-������ % *��� , �#�� 532�R��289;&��%R'@, ��5< $* �#� %:����� ��� $��� � �� .� �-(������ $��� �#� % � �" �� #, �%� 782�R�2�9 $��� �84 #2�#� �� %��� �-���� $% .� ���� "$., $%"� �2�9 �� �$�84 #2 �#� ��� $��� � �� ��&� % %� % �#� ����� .� �2�92 �$��" ���$���� $* �$"�� "� �%� %$%�$"�� "� ��� $(

��� � �� .� ���2�9, �$&�� %� �2�9 �-������ % �#��� %�, 7�249 �-������ % �#� *��� �%� �2�9 ��&� % %� % �#� ����� 2 �#� �$"�� "� ��� $��� � �� ���$�%��� *$�����$- &���"� #�"* �#� �$��" ��� $��� � �� % �#� �� %��%� ����� , ��� �#��� .� " ��"� % �#� *��� 2

�% �$� , �#� �-������ ��� $��� � �� % �#� �� %� �%�*��� .� �289 �%� 5�279 ;&��% $* �.$ �$� < $��� �#�E� � �� # �*��� %:��� $% �%� �279 �%� 342�9 $��� �84 #,�� ���� ��"�2 ����" �-���� $% .� �" $ �#� &� % �$���,� % ��� 2 �#� �-���� $% $* �$��" ��� $��� � �� ;�$"�� "��%� %$%�$"�� "�< % �#� �� %� �%� *��� .� �2�9 �%�332�9, �� ���� ��"�2 �#� �$"�� "� ��� $��� � �� .� ��$���2�9 % �#� �� %� �%� �#��� .� " ��"� % �#� *��� 2

L " ��� �-���� $% % ���

���"� � #$. �#� ��&�"�� �� � " ��� �-���� $% $*��� $��� � �� �*��� %�����%$� ��& % ���� $% $*/�01+�(�� �$ ��� 2 �#� � " ��� �-���� $% $* ��� $��(� � �� .� �723R52�9 ;&��%R'@, �S�< $��� �#� E� ��� # �%� 832�R�279 $��� �4 #2 +� %��� �%� *���" �-(���� $% $* ��� $��� � �� .� �2�R�2�9 �%� 72�R52�9,�� ���� ��"�2 �$��" ���$���� $* �$"�� "� �%� %$%�$"�� "���� $��� � �� .� ���2�9, �$&�� %� 3�259 % �#� � "�,5279 �-������ % �#� �� %�, 72�9 �-������ % �#� *���

���!� � !#��&��$6 %�� �����&���� $* /�01+�(�� % �"$$� �%� �"� &� �*��� %�����%$� ��& % ���� $% $*/�01+�(�� �� �$ � $*�25 &��6� �$ ��� �%� �25 &��6��$ �$� 2 �$� ��� ���# ��"�� �#� &��%R'@ ;�S�<> *$� �$� ���# �"$$� ��"�� � &��%;�S�<, �%� ���# �"� &� ��"�� �% %� � ���" ��"��

����� ;#< ����� ;#< ����� ;#< �+�F�;�� �O� ��"�%� � #�&"<

��$� ;"�#�6�<

���L"$$� �2�3R�2�� 32�3R�2�3 F� 52��R�2�5 �285�R�2�58!"� &� �2��R�2�� �2�4R�284 ��2�R�2� 325�R�284 �2�84R�2���

@$�L"$$� �2�� �2�7 F� �24�� �28�5!"� &��$2 � �2�� �2�4 �32� �2�� �2����$2 � �2�� 32�� F� �23� �23��

� $�"� %$� �� ��"��"����

���!� � �&�"�� �� �-���� $% $* %$%�$"�� "� ��� $��� � �� % �� %��%� *��� �*��� �% %�����%$� ��& % ���� $% $* /�01+�(�� �$��� ;�25 &��6�< �%� �$ �$� ;�25 &��6�<2 )�"�� ��� �����%� $*�$ �2 �$� ��� ���# ��"�� �#� &��%R'@ ;�S5<, �%� *$� �$� ���# ��"�� �#� &��% ;�S�<

� &� ��� $�;#<

��� @$�

+� %� ���� +� %� ����

�F� �25R�2� F� F� F�

�F4 �2�R�2� F� �2�� F�

�F�� �25R�2� �24R�2� �25 F�

�F�� �24R�2� 532�R��28 �28 5�27�F�4 �27R�2� 7�28R�24 �24 832��F3� �2�R�2� 7�27R�2� �24 3�2��F78 �2�R�2� 7525R�2� �27 3828�F��� �2�R�2� 7524R�2� �27 3325�F��� �2�R�2� 7527R�2� �27 342��F�84 �2�R�2� 782�R�2� �27 342�

� �$� �$""������ �F8 #

��7

Page 5: Pharmacokinetics, distribution, metabolism and excretion of [3H]UCN-01 in rats and dogs after intravenous administration

�%� �4279 ��&� % %� % �#� ����� 2 �#� �$"�� "���� $��� � �� % �#� � "� .� $%"� �2�92

=����$" �� % ��� �"� &�, � "� �%� �� %�

�#� ��� �"� &�, � "� �%� �� %� �&�"� $��� %�� *�$& �#���$�� ��� � .��� �%�"�I�� �� 0!� �$ �"�� ���� �#�&����$" & $* +�(��2 � ���� � #$. ��� ��" �#�$(&��$���& $* � �"� &� �&�"� �� �5 & % �*��� �$ %�;�<, � � "� �&�"� $��� �#� E� � 8 # ;L< �%� � �� %� �&�"�$��� �#� E� � �� # ;<2 �% �#� �"� &�, �#��� .��� �#���& %$� �% ��%� E�� ���6 �� �� +�(��2 �#� ��� $ $*+�(�� ��� $��� � �� �$ �$��" ��� $��� � �� % �#� �&�"�.� 542�9 �� �5 & % ������ %� �$ �3239 �� � # ;����%$� #$.%<2 �% � "�, �#��� .� %$ ��� $��� � �� �� �#�+�(�� �$ � $% �%� �����" �$"�� &����$" �� .���$� �����2 �% �� %�, �#��� .��� �.$ ���6 � � & %$� ���6��� �$ +�(�� �%� � &�:$� ���6 �#��� $* �2

� �� � �� ��� $% % ���

�#� �$%��%���� $% $* ��� $��� � �� % � �� �*��� %�����%$� ��& % ���� $% $* /�01+�(�� �$ ��� #$.% % ���"� �2 �"" �#� � �� �-���� ��� % �%� �� � #$.�� � # �#�� �$%��%���� $% $* ��� $��� � �� �#�%�"� &� �� �25 �$ � # �*��� �$ %�2 =$ � � �� #$.���#� � # �#� � �$%��%���� $% �� �25 $� � #, %� ��� %� ��� �� �� � �� ��� $% $* +�(��2 �� �25 # �*��� ��& % (���� $%, % �$&��� $% . �# �#� �"� &� �$%��%���� $%;�2�84 �� �O� ��"�%� �&"<, �#� � �� ��� $% �$ �%�$�� %�"�%� ��� ��"$�%�$�#�" �" � �� .� ��"�� ��"� # �#2 �#�# �#� � �$%��%���� $% $* ��� $��� � �� .� $� ����� %�#� "�%� ;�328 �� �O� ��"�%� ��<, *$""$.�� �� �#� " ���;�82� �� �O� ��"�%� ��<, 6 �%�� ;��25 �� �O� ��"�%� ��<,�#��$ � �"�%� ;��2� �� �O� ��"�%� ��<, � �� ���� �"�%�;��23 �� �O� ��"�%� ��<, ����%�" �"�%� ;��25 �� �O� ��("�%� ��< �%� ��%���� ;��28 �� �O� ��"�%� ��<2 �� � #�*��� ��& % ���� $%, �#� � �� �$%��%���� $% $* ��� $(��� � �� .��� �$&�����"� . �# �#$ � �� �25 # . �# � & "�� � �� ��� $% ������%2 �� � # �%� �#����*���, %����""�" . �# �#� ������ � % �"� &� ��� $��� � ��, �#���� $��� � �� % &$ � � �� �" $ ������ ��2 �� �� # �*���

��& % ���� $%, �#� �"� &� �$%��%���� $% #�� *�""�% �$�2�5 � &� �#�� �� �25 #2 �#� ��� $ $* � �� �$%��%���(� $% �� �� # �$ �#$ � �� �25 # .��� �2�5 % �#� "�%� , �2�4 % �#� " ���, �2�3 % �#� 6 �%�� �%� �2�� % �#� �#��$ ����%�2 �" $, �#� �$%��%���� $% % �$%� &���$., %.# �# +�(�� �-# � � �$ �(" & � %� �$- � �� % ��� /��1, ������ �� *�$& 528� �� �O� ��"�%� �� �� �25 # �$�257� �� �O� ��"�%� �� �� �� #2 0$.����, �#� ������ � %�$%��%���� $% % �����" � �� ��# � 0����� �% �"�%�,�� �� , 6 % �%� %�� � %�" ����� .��� ��"�� ��"� "$.2 �#� "$. ������ � % �#� %�� � %�" ����� &�� ���� �""� #������% ��� �$ � " ��� �-���� $% $* /�01+�(��2

$ �� �

B� %�� � ����� �#� &����$" � *��� $* +�(�� �*��� %(�����%$� ��& % ���� $% % ��� �%� �$� � %� ��� $("���"�� ����2 /�01+�(�� � �������� �� �-�$%�%� �""�

���!� " �&�"�� �� �-���� $% $* %$%�$"�� "� ��� $��� � �� $*/�01+�(�� % � "�, �� %� �%� *��� �*��� %�����%$� ��& % ���(� $% $* /�01+�(�� �� � �$ � $* �25 &��6� �$ ��� *$""$. %���%%�"�� $% $* �#� � "� ����2 )�"�� ��� �����%� $* �$ �2 ��# ��"�� �#� &��%R'@ ;�S�<

� &� ��� $� ;#< L "� +� %� ����

�F� �52�R�24 F� F�

�F� �424R�28 F� F�

�F8 �824R52� F� F�

�F4 ��25R52� F� F�

�F�� �723R52� �2�R�28 F�

�F�� 8�25R528 �23R�23 �25R�23�F�4 832�R�27 �2�R�2� 72�R52�

� �$� �$""�����

���� "�#$ ��� ��" 0!� ��� $�#�$&��$���& $* �"� &� ���5 & % ;�<, � "� $��� �#� E� � 8 # ; < �%� �� %� $��� �#� E� � �� #;$<2 �#� � �&�"� .��� $��� %�� *�$& ��� � ��% �25 &��6�/�01+�(��

���

Page 6: Pharmacokinetics, distribution, metabolism and excretion of [3H]UCN-01 in rats and dogs after intravenous administration

*�$& �"� &�, .� # �#"� � �� ����� �$ � �� , �-��%( ��"� &����$" I�� % �#� " ��� �%� E%�""� �-������ %�$�#� *��� � � �#� � "�2 ' %�� /�01+�(�� .� � �� % �#���� �%� ����, �#� %$%�$"�� "� ��� $��� � �� .� &� %"�� � &���� �$ ��$ � �#� �?��� $* �#� �0�� .# �# �� "���$�����2 �#� ��� $ $* �$"�� "� �$ �$��" ��� $��� � ��.��� "$. % �"� &� �%� *��� 2 �"�#$��# �# ��� $.� 5�9 % �� %�, �#� �� %��� �-���� $% .� "$.2 �#��$%�� ��� $% $* �0�� �$ �#� �$��" &����$" � *��� .� �#$��#� �$ �� & % &�"2

�#� �" & %�� $% #�"*(" *� $* �"� &� ��� $��� � �� %��� �%� �$� .� ��2� # �%� �32� #, �� ���� ��"�, &��#"$%��� �#�% ���� $� "� ���$���� ��"�� ;�2�8 # *$� ��� �%� ��28 # *$� �$� < /��12 �" $, �#� �+ $* �#� ��� $(��� � �� % ��� .� ���% � &� # �#�� �#�% �#�� $* +�(��2 ' %�� �#� �$%��%���� $% $* ��� $��� � �� ��� %� �#��" & %�� $% �#� � % ��� .��� &$�� �#�% ��% � &� # �#�� �#�% �#� �$%��%���� $% $* +�(�� �����& %���� 0!� ;��$�� �2��� ���&" �� �� # �*��� �$ %� /��1<,�#� � ?���%�� % �#� #�"*(" �� �$�"� �� ���$�%��� *$��� �#� ��� �%�� $* &����$" �� % �#� �"� &�2 �%����, �����" &����$" �� .��� *$�%� % �#� �"� &� �&�"� ;� �2 ��<2

�% �$�# ��� �%� �$� �#� &� % �$��� $* �-���� $% .� *���"2 �#� �� %��� �-���� $% $* +�(�� .� & % &�";� �2 �<2 �# ���$�� � ���� $� E%� %� �#�� �#� #�(��� � �"����%�� $* +�(�� &�6� � &�:$� �$%�� ��� $%�$ � � ��& � �"����%�� /��12 '��� � . �# � "� ����(

��%%�"���� ��� #��� #$.% �#�� &$ � $* �#� �-������/�01+�(�� % �#� *��� � � �#� � "�, �"�#$��# � &�""�� *���� $% ������%�"� �-������ �� � ���� ����(� $% %�$ �#� �� ��$ %�� � %�" �����2 �# .� ���$������ E%� %� � �% E��%� "���" $* ��� $��� � �� % �#� �$&��# ; 2�2 323� �� �O� ��"�%� �� �� �25 #, ���"� �< �%� % �#� �$&��# �$%��%� ;���� %$� #$.%<2 �#� ��� $(��� � �� % �#� �$&��# �%� � �$%��%� .� ��"��"���� �$�� ����$- &���"� �9 $* �#� %:����� �$ �2 =$ � $* �#���� $��� � �� % �#� � "� .� ��� �$ �#� &����$" �� ;� �2 �L<2 �#���*$��, �#� �" & %�� $% $* +�(�� % ��� .� �-������ �$ �� &� %"� ��� �$ &����$" & % �#�" ���2 �� ���� &�$���%� �$ �����& %� �#� �������� $*�#� � &����$" �� �%� �#� &����$" � �%I�&�; < %�$"��� % $���� �$ ���� �� ����(���� %������ $% % �" % ��" ���� $% 2 �"�#$��# �#� �������� $* �#� � &����$" �� #��� %$� ���% �"�� �����, :��� %� *�$& �#� � #���$�# (" � �� % �$&��� $% . �# +�(��, �#� &����$" &�$�"� �� ����"�I�� �� ���$�#�$&� !�5�2 ����#�� ��� � ��� $%�$ %�2

�� #� ���% #$.% �#�� �#� ��$%� ��$�� % � %� %� $*+�(�� ��� E� �$ #�&�% ��(�� � �"��$��$�� % ���%$� �$ ��� $� �$� ��(�� � �"��$��$�� % /8, 312 $% ��� %��# ��� � � ?���%��, �#� �� �"� $* �# ���� ��%%$� ��� ����"� �-����$"���� �$ ���� �� �#� &����$" � *��� $*+�(�� % #�&�% 2 ����%� +�(�� �#� � � ��� � #��� �����"�� �#�� �#� ���6 �"� &� �$%��%���� $% $*+�(�� ;&�-< �*��� %*� $% ��%� �$ �� �������� ��

���!� % � �� � �� ��� $% $* ��� $��� � �� �*��� %�����%$� ��& % ���� $% $* /�01+�(�� �� � �$ � $* �25 &��6� �$ ��� 2 )�"�� ����$%��%���� $% ;�� �O� ��"�%� ��� &" $� � � ��< $* +�(�� ;&��% R'@, �S�<

� �� �25 # � # � # 4 # �� #

!"� &� �2�84R�2�88 �2�8�R�2��8 �2�55R�2��� �2��5R�2��� �2�84�R�2�55�L"$$� �2533R�2��7 �25��R�2��� �2�5�R�2��3 �2�75R�2��� �2�8��R�2��85L�� % �2��5R�2�54 �2���R�2�84 �2�5�R�2��5 �2��3R�2��� �2�374R�2��34! �� ���� �"�%� ��23R�2� ��2�R�2� 32��R�28� 52�4R�2�� �245R�2�3�� ��"" �248�R�2�8� �244�R�2�74 �25��R�2��� �2�73R�2�8� �2��7R�2�880����� �% �"�%� �25�R�2�5 �2��R�2�3 5245R�28� 525�R�25� �238R�2��'��&�- ""��� �"�%� 428�R�245 4288R�28� 828�R�2�� �24�R�287 �288�R�2538'��&�- ""�� � "�&�# %$�� �2�4R�2�4 �23�R�2�8 �2�3R�25� �255R�28� �2884R�2�37�#��$ � �"�%� ��2�R�25 32��R�234 �2�7R�2�� �2�3R�23� �25�8R�2�58�#�&� �2��R�2�5 �237R�2�� �24�R�2�� �27�R�258 �284�R�2�470���� 52�5R�2�� �27�R�2�7 �2��R�2�� �2�7R�2�3 �2�34R�2�����%� �328R�2� �52�R82� �72�R�2� ��2�R�2� �2�5R�238� ��� �82�R�23 �82�R�2� ��23R�2� 52��R�234 �2��R�238A �%�� ��25R�2� ��2�R�2� 32��R�247 �253R�23� �277�R�254�����%�" �"�%� ��25R�2� 42�5R�2�5 5255R�23� �2�5R�28� �24�5R�2558'�"��% 327�R�2�� 824�R�2�� 82�8R�2�3 �234R�248 �2��R�24�!�%���� ��28R�2� 4258R�257 32��R�2�8 �275R�2�8 �24�5R�285�!�� ��%�" *�� �2��R�2�4 �2��R�2�7 �2338R�2��� �2�84R�2�84 �2��3R�2�75L�$.% *�� 52�3R�2�� �2��R�2�8 �2�7R�2�� �285R�2�� �28�7R�255�=� �%��� � "�&�# %$�� �27�R�2�� �247R�2�4 �2�5R�245 �2�8R�285 �23��R�2�33=� �"� �2�3R�2�� �287R�2�� �237R�2�7 �27�5R�2�3� �2�48R�2��5'6 % �28�R�2�4 �23�R�2�3 �2�8R�2�� �23�R�2�5 �2���R�2�57L$%� &���$. 528�R�2�� 527�R�2�3 �24�R�2�� �255R�23� �257�R�2����� �� �2��8R�2�57 �2�5�R�2��� �2���R�2�83 �2�7�R�2�87 �2��5R�2��8'�& %�" �� �"� �2��R�2�� �2��R�2�7 �23�R�2�� �2��R�2�7 �2�45R�2��7!�$ ���� �2��R�2�8 �23�R�2�� �235R�2�7 �2�7R�2�4 �2�4�R�2�4�+� %��� �"����� �27�R�2�8 �23�R�2�� �2��R�2�4 �2875R�2��8 �2���R�2���'�$&��# 323�R�2�4 32��R�2�7 �2��R�2�� �233R�2�4 �27�3R�2��7'&�"" %�� � %� 82�7R�24� 32�3R�28� 723�R�254 52��R�2�8 �2��R�2������� %�� � %� �2�4R�2�� �2�3R�2�� �2�3R�2�8 �277R�2�7 �238R�238

���

Page 7: Pharmacokinetics, distribution, metabolism and excretion of [3H]UCN-01 in rats and dogs after intravenous administration

# �#�� �$ � "���" 2 �# %$%" %��� �#��&��$6 %�� � & �#� �� ��� �$ ������ $% $* �#� ��$%� � %� %� $*+�(�� �$ #�&�% ��(�� � �"��$��$�� %2 �� �#� � �$ �"���" , �% E��%� "���" $* MM*��� +�(��NN ��� $� �����/��, �712 �* � � �&�� �#�� �#��� ��� %$ ��� � � *(*���%�� % � �� ���% *�� $* MM*��� ����NN, MM*��� +�(��NN.$�"� ��#��� � � � � % ��� 2 �#���*$��, � �-�������#�� MM*��� +�(��NN *�$& ��(�� � �"��$��$�� % %#�&�% &�� �� E%�""� &����$" I�� % �#� " ��� �%��-������ %�$ �#� � "� % #�&�% 2 )��� " ��"� �-���� $%$* +�(�� %�$ ��� �%� N �� %� /�71 &�� ���$�� �# ����"�� $%2

�� ��!�������� B� . # �$ �#�%6 = 2 H$6$ 0� ���.�(H$���%� ��& 6$ � : (��&� *$� �#� � �-��""�%� ���#% ��" � ��%��2

#�������

�2 �6 %��� ', �$& A, =$� &$�$ =, ��&�$6 �, �6��� =;�77�< �%� ��&$� ��� � �� $* +�(��, � �"��� �� %# � �$� $*��$�� % 6 %� � , % &�� %� �%� #�&�% ��&$� &$��" 2 �%����� 5�� �444

�2 �6 %��� ', �$&��� A, �$& A, �6��� = ;�77�< %#�%��(&�%� $* �%� ��&$� ��� � �� $* & �$&�� % % � ��$ �%� % � �$�� +�(��, � �"��� �� %# � �$� $* ��$�� % 6 %� � 2 �%���#�&$�#�� !#��&��$" ��� �4�

�2 �6 %��� ', �$&��� A, �$& A, �6��� = ;�77�< '�%��� � ��%� ��&$� �?��� $* +�(��, � ��$�� % 6 %� � ;< %# � �$�,�$&� %�� . �# ��� $� �%� (��%��� ���%� 2 !�$� �& � $��%��� �� ��� ��3�

�2 �6 ��&� �, H$ # �� �, � �: �� �, '# & I� =, = I�6�& �,�6��� =, �6 %��� ' ;�773< �� �#� � ����&�"�� $% %����� ��+�(�� � $� ���� . �# ���#$ �#$��"�� $% $* �� �%�@A� ��$�� % � .�"" � %���� $% $* @A %# � �$� ���� ���B����'� � % �5�(&������ #�&�% �� ���&$ � ���� %$(&� ���� ��"" 2 �%��� �� 53� ��75

52 L�%�# ��, � �&�% � ;�778< %#�%��&�%� $* � �"�� %( %(����� ���$�$- � �� �� 3(#���$-� ����$ �$� %� ;+�(��<, �%�. ��(�#��6�$ %� %# � �$�2 " % �%��� �� �� 37�

82 �� � , ��% 0, A����� �, A$���� # 0, '# &��� H, ��&����, '� �6 H, ��% ��.��� H, �� # �@, 0���"�� @, � �� B@,�����6 '�, '�%���$. �I �=, '�� � ""� �, �6 %��� ',A�.����� �, A$���� # ' ;�774< +%���� ���� �" % ��" �#��(&��$"$�� $* +�(�� ��� �� �� ��� E� � %� %� �$ #�&�%��(�� � �"��$��$�� %2 �%��� �� 54� ���4

32 �� � , ��% 0, ��6� A, � �%$&� A, A����� �, A$���� # 0, A�.����� �, A$���� # ', '�� ��&� H ;�777< �"������#��&��$6 %�� � $* � %$��" �%� ��%��� ����, +�(��, ��� ���� ��� E� # �# �G% �� � %� %� �$ ��(�� � �"��$��$�� % %#�&�% 2 �%��� �� 57� ��5�

42 � ��"� =, !��� �� @ ;�74�< �$%�$&����&�%��" �%�"� �� ��$% ��� � ��" &$&�%� �#�$��2 �%� � ��"� =, !��� �� @ ;�� <!#��&��$6 %�� � 2 =����" @�66��, ��. H$�6, � ��7

72 0��6 % '�, $#�% �=, �� �#�� � ;�774< =$��"�� $% $*��$��$ % ��� �#�&$���� �� �%�"$� $* ����$ �$� %�� "��6$* � ���� � $� �� $% . �# %# � � $% $* ��$�� % 6 %� � 2 =$"!#��&��$" 5�� 88�

��2 A�.�6�& A, ����& 0, ��6�#��� D, H�&����# A ;�778<+�(��, 3(#���$-�"( ����$ �$� %�, %# � � 6 %� � ��� � �� $*���" %(����%��%� 6 %� � �%� ������ �#� �#$ �#$��"�� $%$* �#� ��� %$�"� �$&� � ���� � " �� ��%� ��$���� % �5�7#�&�% "�%� ��%��� ��"" " %�2 L $�#�& L $�#� �� $&&�%��7� 334

��2 A����� �, A�.����� �, ��% 0, �� � , �6 ��&� �, �6 %���', A$���� # 0, H�&����# A, A$���� # ' ;�777< !#��&�(�$6 %�� � �%� �#��&��$��%�& � $* � %$��" ��$�� % 6 %� � %# � �$�, +�(��2 �%��� #�&$�#�� !#��&��$" ��� ��

��2 !$""��6 ��, A�.��6 ', ��I$ D' ;�778< L"$�6 %� $* �" $&���$" *���� $% % % � ��$ �%� % � �$ �%� �$��%� �� %� �#� �?��� $* L�+ �%� � �"�� %� +�(��, � �"��� �� ��$�� % 6 %� � %# � �$�2 D ����$ ��� 4�� ����

��2 '�� � ""� �, �� # �@, 0���"�� @, '& �# �, � �� B@,�����6 '�, '�%���$. �I �=, �� � , ��% 0, A�.����� �,A$���� # ' ;�774< " % ��" �#��&��$"$�� $* +�(��� % � �"$� ����� $% �%� �$&��� $% �$ ����" % ��" &$��" 2 �%���#�&$�#�� !#��&��$" ��� '5�

��2 '�%���$. �I �=, 0���"�� @, �� # �, �����6 ', L���� A,� �� B@, =���$ �, �%$�� A, A$���� # ', A�.����� �,'�� � ""� � ;�777< !#� � � �� �" $* %*� $%�" +�(��, � %$��"��$�� % 6 %� � %# � �$�, % ��� �%� . �# ��*����$�� %�$�"� & 2!�$� �& '$� " % �%�$" �4� �57�

�52 '��%���� =, '���"��('����% $% =, '���� ', A��� �, '�� (� ""� �, B$�"�%� !D ;�77�< �"" ���"� ���� � �%� ��$.�# %(# � � $% �� �#� ��$�� % 6 %� � �%���$% � +�(�� % #�&�%���� � ���� %$&� ��"" 2 �%��� �� 5�� ��4�

�82 '#�$ ��, �$ Q, '# & I� �, �N$%%$� !=, A$#% AB,!$&& �� H ;�773< ���$��� $% $* �% '(�#� � �#��6�$ %� �%��$��%� �� $% $* ��&��$�#�� % ���$�$- � �� �� 3(#���$-� ���(�$ �$� %� ;+�(��< % #�&�% ��%��� ��"" " %� , �$ �"� %C��%��� �� �5� *�%�� $%2 �%��� �� 53� ���7

�32 '#�$ ��, '# & I� �, !$&& �� H ;�773< 3(0���$-� ����$( �$� %� ;+�(��< %���� ��$��$ % #�&�% �$"$% ���� %$&��%� "��6�& � ��"" %����%��%�"� $* �5�2 -� �"" �� ���� �44

�42 ��6�#� # �, A$���� # , � �%$ A, H$ # �� =, ��6�%$ 0;�743< +�(��, � �"��� �� %# � �$� $* ��$�� % 6 %� � *�$&����������2 D �%� � $� ��� �34�

�72 ��&��� �, '� � 6 H, = %�& 0, ��: A, ��$ A, ����� # �,A�& �� H, A����� �, �#� � �, �%$I�.� H, H�&�&$�$ �,H�&�%$�$ H, B���%��� H, ��% ��.��� H, �� � , A�.������, A$���� # ', '# &��� H ;�777< !#� � � ���� $* +�(�� ���(#$�� %*� $%2 !�$� �& '$� " % �%�$" �4� �57�

��2 B�%� P, B$�"�%� !D, "��6 D�, ��" $% L�, '�� � ""� �;�775< ��$��$ % 3(#���$-� ����$ �$� %�(������� � "�&(�#$�"� � �$���"��� . �# ��� ��� $% $* ���" %(����%��%� 6 %� � � �%� �2 �"" ��$.�# @ ?�� 8� 7�3

��2 B���� �, L�%�� �T ;�747< @����& %�� $% $* &��% %���� &�, &��% �� ��%�� � &�, �%� �����( ���� �$"�&� $* � �� (��� $% . �# &�"� �"� ���� %��� 2 D !#��&��$6 %�� L $�#��&�3� 57�

���