practica tgp enzimas

8/16/2019 Practica Tgp Enzimas

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Lis de Veracruz: Arte, Ciencia, Luz

U N I V E R S I D A D V E R A C R U Z A N A

FACULTAD DE MEDICINA, CAMPUS XALAPA

BIOQUIMICA BÁSICA M. en C.F. Marco Antonio Guadarrama Vázquez

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PRACTICA- DETERMINACIÓN TGP / ALT

(Transaminasa Glutámico Pirúvica / Alanino Amino-transferasa)

ALUMNO: ___________________________________________________ GRUPO: ________

OBJETIVO

El alumno realizará una determinación de TGP o ALT, mediante espectrofotometría. Aprenderá a

correlacionar clínicamente los resultados obtenidos con procesos fisiológicos, metabólicos y patologías

asociadas a este metabolito.

FUNDAMENTO:

La enzima Alanina amino-tranferasa se reporta ampliamente en una variedad de tejidos. La mayor fuente de

ALT (o también conocida como TGP transaminasa glutámico pirúvica) es de origen hepático y la aplicación de

las determinación de ALT ha dirigido al estudio de las enfermedades hepáticas. Los niveles elevados en

suero de ALT son encontrados en hepatitis, cirrosis e ictericia obstructiva. Los niveles de ALT están solo

ligeramente elevados en pacientes después de un infarto al miocardio.

El método utilizado es una modificación a la reacción clásica colorimétrica y de punto final de Reitman-

Frankel. En este procedimientola ALT cataliza la L-alanina y Ketoglutarato para formar piruvato y glutamato. El

piruvato reacciona entonces con la 2,4-dinitrofenilhidrazina (2,4 DNPH-ina) para formar 2,4-DNPH uno, la

adición de sodio hidróxido disuelve este complejo, permite que el 2,4 DNPH-uno sea medido a 505 nm.

MATERIAL Y EQUIPO:

MATERIAL BIOLÓGICO MATERIAL DE LABORATORIO Y REACTIVOS EQUIPO

Suero basal (ayuno) Tubos de Ensayo 13x100 y 12x75

Gradilla

Pipetas Pasteur con bulbo

Puntillas para pipetas automáticas

Agujas para sistema al vacío

Tubos al vacío sin aditivos

Reactivos de ALT/ TGP

Estándar de ALT/ TGP

Agua destilada

Espectrofotómetro

Celdillas para espectrofotómetro

Centrífuga

Baño María

Pipetas automáticas de 1.0 ml

Pipetas automáticas de 10 µl


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TÉCNICA:

1. Realizar una extracción de sangre venosa a un paciente en ayuno (en el tubo correspondiente para

la obtención de suero).2. Una vez coagulada la sangre, centrifugar la muestra a 3000 r.p.m. durante 5 minutos. Retirar el tubo

de la centrifuga y separar el suero del paquete globular.

3. Atemperar a temperatura ambiente el reactivo.

4. Pipetear en tres tubos ensayo rotulados como: “BLANCO”, “ESTANDAR” y “MUESTRA”, las

siguientes cantidades de reactivos, muestra y estándar.

Blanco Estándar Muestra

Reactivo 1

Sustrato de ALT0.5 ml 0.5 ml 0.5 ml

Incubar a 37°C por 3-5 minutos y añadir:

Estándar --- 100 µl ---

Muestra --- --- 100 µl

Mezclar e inmediatamente regresar al baño maría a 37°C por exactamente 30 minutos

Reactivo 2

Reactivo de Color de TGP

0.5 ml 0.5 ml 0.5 ml


Reactivo 2

Reactivo Desarrollador de Color de TGP2 ml 2 ml 2 ml


5. Leer la absorbancia de Estándar y de Muestra contra el Blanco de Reactivo, trasvasando elcontenido de un tubo a una celdilla para espectrofotómetro. La lectura se realiza a 505 nm.

6. El color final producido debe ser medido dentro de 60 minutos.

7. Si la muestra es ictérica o lipémica, debe ser corrido blanco de suero.


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CÁLCULOS.

Los valores derivan de la siguiente ecuación:

ALT (IU/L) = ()

()

Dónde: AM: valor de la absorbancia

AE: absorbancia del estándar

CE: Concentración del estándar = 70 (IU/L).

VALORES DE REFERENCIA

VALORES DE REFERENCIA

ALT/TGP 5 - 35 IU/L


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REPORTE DE RESULTADOS

ALUMNO: ___________________________________________________ GRUPO: ________

LECTURA:

ABSORBANCIA

Estándar

Muestra

CÁLCULOS:

ALT (IU/L) = =

RESULTADOS:

RESULTADO DE ALT/TGP VALORES DE REFERENCIA

IU/L 5 - 35 IU/L

CONCLUSIONES:

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