Control de Calidad en la Técnica de ELISA

Lic. Valentina Bastidas D.

Control de Calidad en Pruebas de ELISA Lic. Valentina Bastidas D.

TÉCNICA DE ELISA

DEFINICIÓN

Ensayo Inmunoabsorbente Ligado a Enzimas Enzime-Linked ImmunoSorbent Assay

E L I S A

TIPOS DE ELISA:

ELISA SANDWICH

ELISA DIRECTO

ELISA INDIRECTO

ELISA COMPETITIVO

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ELISA SANDWICH

Pozo sensibilizado

Antígenos

Anticuerpo secundario - Enzima

Sustrato

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ELISA DIRECTO

Pozo sensibilizado

Antígenos

Anticuerpo - Enzima

Sustrato

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ELISA INDIRECTO

Pozo sensibilizado

Anticuerpos primarios

Anticuerpo secundario - Enzima

Sustrato

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ELISA COMPETITIVO

Prueba Positiva

Prueba Negativa

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ELEMENTOS DEL ELISA

FASE SÓLIDA ENZIMA SUSTRATO SOL DE PARADA

Poliestireno Polivinilo Estructura íntegra Fracción purificada

Peroxidasa Fosfatasa alcalina β-Galactosidasa Ureasa PG

TMB NAPFB ONPG BP IS

Citrato sódico Cloruro de magnesio Fosfato sódico Hidróxido de sodio Gelatina

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VENTAJAS DEL ELISA

Alta sensibilidad

Alta especificidad

Baja toxicidad

Procedimientos sencillos

Diversidad de pruebas

Bajos costos

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REQUERIMIENTOS DEL ELISA

Aire acondicionado, centrífuga…

Nevera ………………………………… Congelador a -20 °C

Estufa calibrada

Espectofotómetro, Medidor de Ph

Pipetas semi - automatizadas o automatizadas con rango de medición entre 0,1 µL hasta 1 mL

Puntas nuevas para medición

Agua destilada o desionizada

Alcohol isopropílico 75 %

Profesional capacitado

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CONTROL DE CALIDAD EN LA TÉCNICA DE ELISA

CALIDAD SINONIMO DE EXCELENCIA

CONTROL DE CALIDAD ES SUPERVISAR EL CUMPLIMIENTO DE LOS PATRONES DE

EXCELENCIA Y LOGRAR QUE ESTOS SE MANTENGA EN EL TIEMPO

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CONTROL DE CALIDAD EN LA TÉCNICA DE ELISA

CONTROL DE CALIDAD INTERLABORATORIO

CONTROL DE CALIDAD EXTERNO

CONTROL DE CALIDAD INTRALABORATORIO

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CONTROL DE CALIDAD INTRALABORATORIO

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS

MANUAL DE CONTROL DE CALIDAD

COVENIN- ISO 9001:2000

ISO/IEC 17025:1999

ISO 15189:2003

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CONTROL DE CALIDAD INTRALABORATORIO

LO QUE NO ESTA ESCRITO NO EXISTE !!!

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CONTROL DE CALIDAD INTRALABORATORIO

ACTUAR PLANIFICAR

HACER SUPERVISAR

Evaluación Nuevas ideas

Poner en práctica

Concretadas

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RECOMENDACIONES PARA EL PROCESAMIENTO DE ELISA

Control de Temperatura:

Nevera Estufa Ambiente

Mesón de trabajo desinfectado

Leer cuidadosamente instrucciones y recomendaciones del kit.

Atención a las actualizaciones de la técnica y su interpretación.

Pipetas y tubos de ensayo completamente limpios

Puntas para pipetas destinadas a los reactivos deben ser nuevas

RACKS

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Dejar atemperar los reactivos:

Placa de reacción

Diluentes, Buffer

Sustrato, Solución Stop

Enzimas o Conjugados

30’ antes

Descartar presencia de turbidez o contaminación en los reactivos

10’ antes

LUZ

Preparación de la cámara húmeda 15’ anticipados

RECOMENDACIONES PARA EL PROCESAMIENTO DE ELISA

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CONCENTRACIÓN TOTAL

Uso de guantes. Limpieza constante de guantes y pipetas.

Uso de propipetas.

Control del pH del agua destilada.

Limpia obtención de la muestra.

Paciente en ayuno

Homogenización de muestras y reactivos antes de su uso.

Conservación de muestras a – 20 °C

Actualizar diariamente la hoja de reporte de calibración, controles y ensayos de pacientes

RECOMENDACIONES PARA EL PROCESAMIENTO DE ELISA

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FALLO EN EL CONTROL DE CALIDAD DE LA TECNICA DE ELISA

Pozos de reacción

Solución de lavado

Posible contaminación de reactivos

Posible contaminación de las puntas

Fallo en el pipeteo

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RECOMENDACIONES FINALES

LO QUE NO ESTA ESCRITO NO EXISTE !!! CONFIANZA CONCENTRACION SED DE CONOCIMIENTOS BUEN EQUIPO DE TRABAJO

GRACIAS !!!