Miguel Ascoy Saucedo

Ricardo Pando Untiveros

INTRODUCCION

En biología, y específicamente en microbiología, un cultivo es un método para la multiplicación de microorganismos, tales como bacterias, hongos y parásitos, en el que se prepara un medio óptimo para favorecer el proceso deseado. Un cultivo es empleado como un método fundamental para el estudio de las bacterias y otros microorganismos que causan enfermedades en medicina humana y veterinaria

CARACTERISTICAS

Un microorganismo se puede sembrar en un medio líquido o en la superficie de

un medio sólido de agar. Los medios de cultivo contienen

distintos nutrientes que van, desde azúcares simples hasta sustancias

complejas como la sangre o el extracto de caldo de carne. Para aislar o

purificar una especie bacteriana a partir de una muestra formada por muchos

tipos de bacterias, se siembra en un medio de cultivo sólido donde las células

que se multiplican no cambian de localización; tras muchos ciclos

reproductivos, cada bacteria individual genera por escisión binaria una colonia

macroscópica compuesta por decenas de millones de células similares a la

original. Si esta colonia individual se siembra a su vez en un nuevo medio

crecerá como cultivo puro de un solo tipo de bacteria.

La principal diferencia entre un medio de cultivo sólido y uno líquido es que el

medio de cultivo sólido contiene un 1,5–2% de agar-agar, mientras que el

medio líquido no contiene agar-agar.

INDICACIONES

Muchas especies bacterianas son tan parecidas morfológicamente que es

imposible diferenciarlas sólo con el uso del microscopio. En este caso, para

identificar cada tipo de bacteria, se estudian sus

características bioquímicas sembrándolas en medios de cultivo especiales. Así,

algunos medios contienen un producto que inhibe el crecimiento de la mayoría

de las especies bacterianas, pero no la del tipo que se desea averiguar si está

presente. Otras veces, el medio de cultivo contiene determinados azúcares

especiales que sólo pueden utilizar algunas bacterias. En algunos medios se

añaden indicadores de pH que cambian de color cuando uno de los nutrientes

del medio es fermentado y se generan catabolismos ácidos. Si las bacterias

son capaces de producir fermentación, generan gases que pueden ser

detectados cuando el cultivo se realiza en un tubo cerrado.

Con otros medios de cultivo se puede identificar si las bacterias producen

determinadas enzimas que digieren los nutrientes. Así, algunas bacterias con

enzimas hemolíticas (capaces de romper los glóbulos rojos)

producen hidrólisis y cambios apreciables prosaicamente en las placas de

agar-sangre.

Los diferentes medios y técnicas de cultivo son Esenciales en un laboratorio

de microbiología de un hospital, pues sirven para identificar las bacterias

causantes de las enfermedades infecciosas y los antibióticos a los que son

sensibles esas bacterias. Los cultivos suelen usarse en medicina para

determinar la presencia de agentes patógenos en fluidos corporales (como por

ejemplo la sangre o la orina)

REQUERIMIENTOS

Los medios de cultivo, para poder ser utilizados y garantizar que los resultados

obtenidos a partir de ellos sean confiables, deben cumplir con los siguientes

requisitos:

Disponibilidad de nutrientes.

Consistencia adecuada del medio.

Presencia o ausencia de oxígeno y otros gases.

Condiciones adecuadas de humedad (mantener en frigorífico).

Luz ambiental.

pH adecuado.

Temperatura.

Esterilidad.

ANEXOS

UTILIDAD DE EXAMENES PARASITOLÓGICOS Y SEROLÓGICOS COMO METODOD DE DIAGNÓSTICO DE ESTRONGILOIDIOSIS HUMANA EJERCICIO DE

METAANÁLISIS

PEDRO HUAPAYA 1 , ROXANA SUÁREZ   †2 , YRMA ESPINOZA1

RESUMEN

OBJETIVO: Realizar un metanálisis revisando bibliografía publicada en los últimos 20 años, que comparaba directa o indirectamente los métodos de diagnóstico serológico y parasitológico de infección por Strongyloides stercoralis. MATERIAL Y METODOS: Se trató de construir una tabla tetracórica con la cual calcular los valores de sensibilidad y especificidad de la serología, teniendo a los métodos parasitológicos como prueba de oro. Finalmente se seleccionó aquellas referencias que comparaban la técnica de ELISA con los métodos parasitológicos, buscando información que permitiera calcular los valores predictivos positivo y negativo. RESUTADOS: Aplicando criterios de selección, fueron elegidas 25 referencias. Los valores predictivos positivo y negativo resultaron 85,33% y 97,83%, respectivamente. CONCLUSION: Estos resultados muestran la utilidad potencial del método de ELISA para el diagnóstico de tamizaje de estrongiloidiosis, para facilitar estudios en poblaciones que se encuentren expuestas a esta parasitosis potencialmente letal. 

Palabras clave: Strongyloides stercoralis; estrongiloidiasis; ELISA; diagnóstico; serología.

USEFULNESS OF PARASITOLOGIC AND SEROLOGIC STUDIES IN THE DIAGNOSIS OF HUMAN STRONGYLOIDIASIS. METAANALYSIS EXERCISEABSTRACT

OBJECTIVE: To conduct metaanalysis by reviewing bibliographic references published during the last 20 years that directly or indirectly compared serologic and parasitologic diagnostic methods for Strongyloides stercoralis infection. Material and Methods: We tried to build a tetracoric table to obtain values of serology sensitivity and specificity, choosing parasitologic methods as gold standard. Finally, those references that compared ELISA with parasitologic methods were selected and information was obtained to calculate positive and negative predictive values. Results: Twenty-five references were chosen by applying selection criteria. Positive and negative predictive values were 85,33% and 97,83%, respectively. Conclusion: These results show the potential usefulness of ELISA method as a screening test for strongyloidiasis, in order to facilitate studies in populations exposed to this potentially lethal parasite. 

Key words: Strongyloides stercoralis; strongyloidiasis; ELISA; diagnosis; serology.

Correspondencia: Pedro Ernesto Huapaya Herreros, Av. Oscar R. Benavides 5050. Dpto. 204 , Urb. Torres de  San José – Torre “A”,  Bellavista – Callao 2, Perú,  E-mail: pedro_huapaya@latinmail.com

INTRODUCCIONCon el fin de comparar la utilidad de los diversos exámenes existentes para el

diagnóstico de la infección por el nemátode Strongyloides stercoralis en seres humanos, revisamos bibliografía a partir de una base de datos internacional, buscando trabajos referidos al diagnóstico de esta infección mediante diversas técnicas comparadas unas con otras. Así tenemos el examen directo, concentración por el método de Baermann, el cultivo de Harada-Mori, el cultivo en agar o en carbón vegetal y otros métodos serológicos, principalmente la técnica de inmunoadsorción asociada a enzimas, conocida comúnmente como ELISA. Para poder determinar cuál de estos métodos podría tener mayor valor para ser utilizado en forma masiva para el diagnóstico de tamizaje, es que realizamos un ensayo de metaanálisis, que nos permitiera obtener una mejor idea. Además, consideramos la relación costo-beneficio, que resulta importante en nuestro país, donde los recursos económicos generalmente son limitados. 

MATERIAL Y METODOSPara este trabajo ubicamos, mediante la base de datos de la Biblioteca Nacional de Medicina de los Estados Unidos de Norteamérica (PubMed-MEDLINE), un total de 797 referencias con alguna mención a Strongyloides stercoralis. Luego, adicionamos al grupo de estudio un total de 93 referencias de nuestro archivo personal y otras 11 provenientes de diversos investigadores amigos interesados en el tema, con las cuales sumamos un total de 901 referencias. Después revisamos los títulos rápidamente para ubicar aquellas que involucraban algún método de diagnóstico, obteniendo 435. Nuevamente se revisó los títulos y parte de los resúmenes y se fue descartando aquellas que representaban reportes de casos aislados, cartas al editor y artículos de revisión bibliográfica; además, aquellos realizados en animales o que revisaban métodos de diagnóstico diversos sin efectuar una comparación entre diferentes técnicas (aunque no fuera este el objetivo inicial), que utilizaban metodología poco práctica o no validada para el diagnóstico, o que requerían equipamiento y/o entrenamiento del personal excesivamente especializado como para ser usados en estudios de población (análisis de ADN, endoscopia seriada, examen de líquido peritoneal, entre otros). Hecho esto, se obtuvo 45 referencias, de las cuales se descartó todas aquellas que se encontraban en revistas inaccesibles en nuestro país o que estaban redactadas en idiomas distintos al español, inglés o portugués (por razones logísticas). Asimismo, se excluyó aquellas referencias cuyo resumen no estaba disponible. Finalmente quedaron 32 títulos, cuyos resúmenes fueron cuidadosamente revisados para evaluar la metodología utilizada. En la Tabla 1 se resume los criterios de selección utilizados.

Tabla 1. Criterios de inclusión de las referencias revisadas 

1. Artículos originales dedicados a comparar métodos de diagnóstico, excluyéndose revisiones, reportes de caso, cartas al editor.

2. Referencia de dos o más métodos de diagn´stico en forma comparativa(aunque no fuera el objetivo principal).

3. Estudios realizados en seres humanos, no en animales.4. contener información suficiente que prmitiera obtener una tabla 2x2 ó para

calcular sensibilidad, y así completar el análisis.5. Referencia a métodos de diagnóstico convenconales, es decir, se exckuyó

técnicas que no hubieran sido validades previamente.6. Estudios realizados dentro de los últimos 20 años (1981-2001).7. Estar redactados en español, inglés o portugués, por facilidad logística.

 

Los 32 resúmenes y/o trabajos fueron revisados detalladamente in extenso, para estimar la posibilidad de comparar los métodos en forma adecuada. Cumplido esto, quedamos con 25 referencias, ya que las restantes 7 habían empleado dos o tres métodos, pero no cuantificaban en forma suficiente los datos de interés.

RESULTADOSCon las 25 referencias finales (10 resúmenes, 15 in extenso), revisamos y

verificamos datos para construir tablas 2x2, para así comparar los distintos métodos utilizados. Los datos obtenidos de sensibilidad y/o especificidad se presentan en la Tabla 2. 

DISCUSIONSe evidencia que los métodos secundarios que son comparados con los parasitológicos son frecuentemente técnicas que se han ido desarrollando en los últimos años, a excepción de las de Baermann (1) y Harada Mori (2,3) que, si bien fueron conocidas desde hace ya largo tiempo, se las compara con fines principalmente académicos. Asimismo tenemos un caso de examen directo del fluido duodenal (4) y un “coprotest” (5) que, al no ser utilizados en forma convencional, se les compara con otros métodos mejor conocidos, con el fin de conocer su utilidad como ayuda diagnóstica. Estos métodos, si bien son sensibles, resultan poco prácticos, ya que no pueden ser empleados en forma rutinaria por demandar cierta sofisticación, que resultaría restrictiva para establecimientos de cierta complejidad. Una excepción a este punto constituye el método de cultivo con carbón vegetal (6), que también mantiene una buena sensibilidad (81,7%) y resulta sumamente módico en comparación con su análogo, el cultivo en agar nutritivo.Si se considera el costo-beneficio, todos apuntan a enfatizar y difundir el uso del cultivo, como método complementario, al ya reconocido método de Baermann, que, si bien brinda buenos resultados, resulta insuficiente para el diagnóstico cuando se le asocia al cultivo en agar nutritivo (7-12) y últimamente al cultivo en carbón vegetal (6). Por ello, una conclusión de este trabajo será difundir que el estudio para descarte de estrongiloidiosis no será suficiente si no se ha aplicado cuando menos una vez el método de Baermann y algún cultivo de heces, que resultan por su costo totalmente accesibles a diversos niveles de atención de salud, teniendo como desventaja que demandan mayor tiempo de evaluación del paciente, que puede variar entre 5 y 10 días.Pero, todos los métodos parasitológicos dependen del uso de muestras de heces para poder desarrollarse. Por ello, los agrupamos para enfrentarlos con aquellos que evitarían este material y que nos permitan estimar un diagnóstico en forma indirecta utilizando otro fluido o muestra, ya que existen circunstancias donde es sumamente difícil obtener una muestra de heces para realizar el estudio. Por ello, se nota un incremento en el desarrollo de estudios que buscan la posibilidad de un estudio serológico, básicamente mediante la técnica de ELISA, que en los últimos años ha alcanzado preferencia de los investigadores debido a su metodología sencilla y que no demanda gran sofisticación de equipos. Por eso decidimos revisar aquellos trabajos que comparaban la técnica de ELISA con los demás métodos parasitológicos (13-24).Revisando nuestros 25 artículos, encontramos un total de 10 con esta característica y que, además, consignaban datos de casos negativos con los cuales establecer la especificidad de la serología (13-16,20-22,24,25). Dejamos de lado el estudio de Costa-Cruz (17), que utilizaba el método de inmunofluorescencia indirecta, que también puede constituirse en una herramienta útil para el diagnóstico por la eficacia que demostró. Con la información obtenida reprodujimos los datos y tratamos de completar la tabla 2x2, para poder calcular luego los valores predictivos positivo y negativo. Todos ellos comparaban al menos dos de los métodos tradicionales con el método de ELISA. Así obtuvimos los valores predictivos que se presenta en la Tabla 3.

 

Tabla 2. Datos relevantes de los artículos revisados

No Autor Método base (a)

Método secundario(b

)

Total Positivos

total Negativos

Sensibilidad (%)

Especificiadd (%)

1 Abdul-Fattah

Baermann Cultivo 1

Elisa (a)=150 (b)=140

(a)=66 (b)=66

  92,7 100,0

2 Amato Faust Coprotest   (a)=119 (b)=115

____ 96,6 ____

3 AssefaDirecto

concentración

Baermann(a)=29

(b)=123 ____ 424,1 ____

4 Bailey Directo Cultivo 1

ELISA (a)=38 (b)=37

(a)=371 (b)=368

97,4 99,2

6 Conway Directo Baermann

ELISA (a)=40 (b)=40

(a)=100 (b)=80

100,0 80,0

5 Carroll Directo Baermann

ELISA (a)=45 (b)=38

(a)=45 (b)=45 84,4 100,0

7 Costa_Cruz Directo Baermann

IFI (a)=54 (b)=51

(a)=69 (b)=45 94,4 94,2

8 De Paula Directo Baermann

ELISA (a)=3    (b)=1

(a)=65 (b)=64 33,3 98,5

9 Dos Santos Baermann Harada Mori (a)=121 (b)=85

(a)=244 (b)=244

70,2 100,0

10 Gam Directo Baermann

ELISA (a)=68 (b)=57

____ 83,8 ____

11 Genta Baermann Cultivo 1

ELISA (a)=268 (b)=260

(a)=571 (b)=542

97,0 95,0

12 Girard Baermann Cultivo 1 (a)=33 (b)=28

____ 84,8 ____

13 Goka Directo Fluido duodenal

(a)=11 (b)=25

____ 227,3 ____

14 Jongwutives Varios Cultivo 1 (a)=191 (b)=186

____ 97,4 ____

15 Lindo Baermann Cultivo 1

ELISA (a)=20 (b)=16

(a)=139 (b)=130

80,0 93,5

16 MahdiDirecto

Concentración

Harada Mori (a)=9 (b)=15 ____ 166,7 ____

17 Mangali Directo Culitvo 1

ELISA (a)=20 (b)=19

(a)=20 (b)=17 95,0 85,0

18 Moustafa Directo Baermann

Cultivo 1 (a)=27 (b)=54

____ 200,0 ____

19 Neva Baermann Cultivo 1

ELISA (a)=51 (b)=43

____ 84,3 ____

20 Polderman Baermann ELISA (a)=26 (b)=26

(a)=167 (b)=146

100,0 87,4

21 Salazar Baermann Cultivo 1 (a)=5    (b)=9

____ 180,0 ____

22 Sato Baermann Cultivo 1

ELISA (a)=29 (b)=28

(a)=100 (b)=82

96,6 82,0

23 Sato Baermann Cultivo 1

Cultivo 1 (a)=256 (b)=246

____ 96,1 ____

24 Terashima Baermann Cultivo 1

Cultivo 1 (a)=170 (b)=149

____ 87,6 ____

25 Terashima Baermann Cultivo 1

Cultivo 2 (a)=169 (b)=138

____ 81,7 ____

 

Tabla 3. Valores predictivos positivos (VPP) y negativo (VPN) de ELISA, con respecto   a métodos parasitológicos

Autor VPP(%) VPN(%)

Abdul-Fattah 100,0 86,84Bailey 92,5 99,73

Carroll 100 86,54

Conway 66,7 100,0

De Paula 50,0 96,9

Genta 89,9 98,5

Lindo 64,0 97,01

Mangali 86,36 94,44

Polderman 55,32 100,0Salto

Total

60,87

85,33

98,8

97.83

 

Encontramos que, de algunos estudios, se puede calcular valores predictivos poco significativos, lo cual puede derivarse de las condiciones en que fueron realizados los mismos. En el caso de Lindo (21), debido a la baja prevalencia de la infección en Jamaica, la selección se realizó a partir de casos positivos de Strongyloides stercoralis, buscando a los contactos familiares y peridomiciliarios en el vecindario, a quienes se examinó en sangre y heces para completar la metodología de trabajo. En cuanto a los artículos de Conway (15) y Polderman (25), los grupos de estudio estaban conformados por ex - prisioneros de la Segunda Guerra Mundial en el Sudeste de Asia, quienes por su condición tuvieron un estado crónico del parasitismo por reinfección continua. En cuanto a los estudios de De Paula (18) y Sato (24), podríamos atribuir el bajo valor predictivo positivo al pequeño número de individuos evaluados en una zona endémica. En todos vemos que estos factores afectarían la representatividad del grupo de estudio en la población total de la que provenían. Sin embargo, pese a estas consideraciones, podemos resumir los datos y plantear un consolidado de valor predictivo positivo de 85,33% y negativo de 97,83%, que resultan importantes y plantearían la necesidad de realizar otro estudio diseñado para comprobar esta situación, usando grupos representativos tanto de una zona endémica como no endémica.A esto último debemos añadir que, si bien en nuestro país el uso de la serología se está difundiendo en diversos problemas de salud, el costo y necesidad de materiales y reactivos aún constituyen limitantes para su desarrollo óptimo, pero que podrían ser eliminados difundiendo su uso en estudios de población, donde retribuirían totalmente la inversión realizada.Finalizando, se puede plantear las siguientes conclusiones:1.    Existen diversas metodologías para el diagnóstico directo e indirecto de estrongiloidiosis humana.2.    Deben combinarse los métodos parasitoló-gicos, para poder asegurar un diagnóstico de certeza positivo o negativo.3.    Los métodos serológicos tienen potencial de ser utilizados como métodos de diagnóstico poblacional o tamizaje, requiriendo ser evaluados en estudios con diseños adecuados para este objetivo.4.    La relación costo-beneficio de los métodos parasitológicos sigue siendo favorable, ya que se encuentran muy difundidos y son accesibles a los distintos niveles de atención.5.    La relación costo-beneficio de los métodos serológicos podría mejorarse notablemente cuando se difunda su uso para la evaluación de grandes poblaciones.

 Evaluación de técnicas parasitológicas en el diagnóstico de estrongiloidiasis por Strongyloides stercoralis.

 

Efficacy of five methods for detection of Strongyloides stercoralisin human stool specimens.

 

Lau Chong Carolina, Samalvides Cuba Frine1, Terashima Iwashita Angélica2

1Profesora Auxiliar del Departamento de Medicina de la Universidad Peruana Cayetano Heredia.

2Profesora Asociada del Departamento de Medicina de la Universidad Peruana Cayetano Heredia.

 

RESUMEN

Objetivos: Comparamos la eficacia de cinco técnicas en el diagnóstico de Strongyloides stercoralis  en muestras fecales. Material

y métodos: Se evaluaron las muestras de heces de 109 pobladores de Nagazú, Pasco (Perú). Cada muestra fue sometida a 5

técnicas parasitológicas: examen directo, técnica de sedimentación espontánea en tubo, técnica de Baermann modificada en copa

por Lumbreras, Cultivo de Dancescu y cultivo en agar. Resultados: De las 109 muestras fecales, 42 (38,5%) presentaron S.

stercoralis en al menos una de las técnicas utilizadas. Al comparar las técnicas entre si el cultivo en agar en placa detectó la

mayoría de los casos: 40, seguido del Cultivo de Dancescu con 39 casos, la técnica de Baermann, con 25 casos, la técnica de

sedimentación espontánea en tubo, con 16 casos, y finalmente, el examen directo, con 2 casos. No hubo diferencia significativa

entre el cultivo en agar en placa y el Cultivo de Dancescu, pero sí entre éstos y el resto de las técnicas estudiadas. Conclusiones: A

partir de estos resultados concluimos que tanto el Cultivo de Dancescu como el cultivo en agar en placa son herramientas bastante

sensibles y de bajo costo para mejorar el diagnóstico de estrongiloidiasis humana por lo que deberían ser implementadas en los

laboratorios cuando esta infección deba descartarse. Estos métodos podrían ser utilizados en ciertas poblaciones seleccionadas,

tales como niños desnutridos, trabajadores en riesgo, alcohólicos y antes de iniciar una terapia inmunosupresora a fin de evitar el

riesgo de una hiperinfección. (Rev Med Hered 2005;16:11-18).

PALABRAS CLAVE: Strongyloides stercoralis, técnica de Baermann modificada en copa por Lumbreras, cultivo de Dancescu, cultivo

en agar en placa.

 

SUMMARY

Objectives: We compared the efficacy of five methods for the detection of Strongyloides stercoralis in human stool

specimens. Methods and materials: We evaluated fecal samples from 109 individuals from Nagazu, Pasco (Perú). Each sample

was directly tested using five parasitological techniques: simple direct smear, spontaneous sedimentation in tube, Baermann

technique modified by Lumbreras, Dancescu culture and agar plate culture technique. Results: From the 109 stool samples, 42

(38.5%) had S. stercoralis for at least one of the methods studied. Comparing techniques, the agar plate culture technique detected

the higher percentage of cases: 40, followed by 39 cases by the Dancescu culture, then 25 cases by the Baermann technique, 16

cases by spontaneous sedimentation in tube and 2 cases by simple direct smear. No significant difference was found between the

agar plate culture technique and the Dancescu culture, but it was found between those and the other techniques

studied. Conclusions: We consider that the Dancescu culture and the agar plate culture provide good sensitivity for the diagnosis

of Strongyloidiasis at a low cost and should be implemented at parasitology laboratories whenever the diagnosis is sought. This

methods could be utilized in special groups of patients such as malnourished children, immunocompromised individuals and patients

who need to be treated with immunosuppressive drugs to prevent the risk of hyperinfection. (Rev Med Hered 2005;16:11-18).

KEY WORDS: Strongyloides stercoralis, Baermann technique modified by Lumbreras, Dancescu culture, agar plate culture technique.

 

INTRODUCCIÓN

La estrongiloidiasis es una helmintiasis producida por el nemátodo Strongyloides stercoralis. Se estima que por lo menos 100

millones de personas están infectadas con Strongyloides stercoralis en el mundo, especialmente en regiones tropicales y

subtropicales (1,2). La estrongiloidiasis es endémica en Africa, India, Sudeste asiático, América del Sur (particularmente Brasil y

Colombia), Bangladesh y Pakistán (3). En el Perú, las regiones de mayor prevalencia se ubican en la selva baja (4,5) y selva central

(6,7) con prevalencias de hasta 96,5% (8,9).

Se han descrito casos autóctonos en Lima de estrongiloidiasis de los cuales el 90% eran procedentes de los distritos de Lima, pero

con antecedente de viajes a la selva en el 63% de los casos (10).

La prevalencia de estrongiloidiasis depende del área geográfica, de las condiciones ambientales, calidad de la vivienda, status socio-

económico, estándares de higiene en la comunidad, hacinamiento y características físicas y químicas del suelo tales como la

temperatura, la humedad, y la vegetación (11,12,13). Además en países pobres la nutrición deficiente puede ocasionar daño en la

mucosa intestinal, afectando la inmunidad humoral y celular, creando condiciones favorables para el parásito y exacerbándose las

deficiencias proteicas, calóricas y vitamínicas (14).

Strongyloides stercoralis es un nemátodo específico del hombre. Presenta varios estadíos: larva rabditoide o rabditiforme, larva

filariforme, adultos de vida libre, en cuya fase se identifican machos y hembras y la hembra adulta (15). La hembra partenogenética

de S. stercoralis pone muy pocos huevos al día, aproximadamente 50 (16), los que maduran a larvas rabditoides que salen con las

heces del paciente y constituyen la forma diagnóstica.

En los pacientes sometidos a terapia con corticosteroides o que presentan inmunosupresión por alguna patología puede presentarse

el cuadro de autoinfestación interna o hiperinfección por Strongyloides stercoralis  (17,18,19,20), que puede conducir a la

estrongiloidiasis diseminada, muchas veces

con desenlace fatal. Asimismo, la autoinfestación permite que el paciente mantenga un curso asintomático de estrongiloidiasis,

permaneciendo así por décadas (21).

La infección de más larga data documentada hasta hoy ha sido de 65 años (22).El diagnóstico definitivo de la estrongiloidiasis se

hace con la visualización directa de las larvas rabditoides. Esto tiene muchas dificultades porque depende del número de larvas

presentes y de la sensibilidad de los métodos diagnósticos. Existen diversos métodos coprológicos para evaluar esta infección. El

examen directo de frotis fecal es un método poco sensible para detectar estrongiloidiasis (23). La técnica de Baermann modificada

en copa por Lumbreras fue introducida en 1955 (24) y ha demostrado su eficacia en el diagnóstico de S. stercoralis  (25), logrando

determinar tasas de prevalencia en la selva peruana que varían entre 8 a 96,5% (4,8,26). Este método aprovecha tanto el

termotropismo como el hidrotropismo positivo de las larvas para concentrarlas biológicamente. El Cultivo de Dancescu, también

conocido como de carbón vegetal, descrito en 1967, muestra una alta sensibilidad para el diagnóstico de estrongiloidiasis (27). La

técnica de sedimentación espontánea en tubo (TSET), descrita por Tello en 1988 (28) tiene como fundamento la sedimentación

espontánea en solución salina fisiológica tanto de protozoarios como de helmintos.

El cultivo en agar en placa data de 1990 (29). Consiste en colocar 2 gramos de heces en el centro de una placa petri conteniendo

agar nutritivo, dejándola reposar sellada a temperatura de ambiente por 48 horas (30). Si la muestra presenta larvas

de Strongyloides stercoralis  éstas se van a desplazar sobre la superficie del agar, diseminando las bacterias que van arrastrando en

su cuerpo, de manera que estos trazos aparecerán marcados por las colonias de bacterias. Si las placas se dejan en incubación más

de 6 días, también se podrán diagnosticar las larvas de Uncinarias y encontrar adultos de vida libre (31).

 

MATERIALES Y MÉTODOS

El presente estudio es de tipo descriptivo comparativo transversal y se llevó a cabo en la Comunidad Nativa de Nagazú, provincia de

Oxapampa, Departamento de Pasco, en los meses de julio a setiembre de 2003.

La Comunidad Nativa de Nagazú se encuentra en el Departamento de Pasco (Perú), aproximadamente a 1480 m.s.n.m. Esta

comunidad fue elegida para el estudio, en virtud de que la selva central es reconocida como una población endémica para S.

stercoralis  (6,7). Se incluyeron las muestras fecales de 109 personas, entre 1 a 75 años, que acudieron voluntariamente al

despistaje parasitológico.

Se calculó el tamaño muestral con ayuda del Software Epi info versión 6.4, 1996 (CDC Atlanta, USA). Se consideró que la posibilidad

de infección por S. stercoralis en la población fuera de 6l,7%. Con una de 92% a 95% y un poder -1 de 90% se determinó un tamaño

muestral de 109 pacientes.

Criterios de inclusión: El criterio de inclusión fue el haber residido en la zona de estudio por un mínimo de un mes, ya que el

periodo calculado entre el ingreso del parásito por la piel y la producción de las primeros huevos es de 28 días (15), tiempo después

del cual es posible obtener las larvas rabditoides en las heces del paciente.

Criterios de exclusión: Se excluyó a todo paciente que hubiese recibido tratamiento antiparasitario con acción efectiva contra

estrongiloidiasis (Tiabendazol o Ivermectina) un mes previo al estudio.

Los datos de 200 personas fueron consignados en una ficha de encuesta epidemiológica. A cada individuo se le entregó un envase

plástico nuevo y limpio, de boca ancha, con tapa rosca y de 250 cc de capacidad, con el fin de que colocara sus heces en éste. Se

puso especial énfasis en que la muestra debería ser del mismo día, que no se hubiese obtenido con purgantes o supositorios y que

ésta perteneciera a la misma persona (ya que posteriormente recibiría el tratamiento antiparasitario gratuito respectivo), con el fin

de no producir sesgos en la recolección de la muestra.

Cada envase fue debidamente rotulado anotándose el nombre, la edad del sujeto y la fecha y la hora de entrega del mismo. Los

envases conteniendo las muestras fecales fueron sellados cuidadosamente con cinta adhesiva e inmediatamente depositados

dentro de cajas de telgopor con la finalidad de mantener un rango de temperatura semejante a la temperatura ambiental y evitar

así la muerte de las larvas durante su transporte previo al examen. Se determinó que la recolección de las muestras debía realizarse

en un lapso de tiempo no mayor de 2 horas, luego del cual se recogieron 143 muestras (n=143 hombres y mujeres entre 1 a 75

años).

Se estimó recolectar un 30 por ciento más de muestras sobre el tamaño muestral calculado, por la probabilidad de tener que excluir

aquellas que no cumpliesen las condiciones para ser analizadas. Todas las muestras fueron trasladadas inmediatamente al

Laboratorio de Parasitología del Instituto de Medicina Tropical Alexander von Humboldt para su procesamiento. El procesamiento se

inició después de 10 horas de recogidas las muestras y el tiempo que tomó procesar todas las muestras fue de 2 a 3 horas. De

acuerdo al tamaño muestral calculado para el estudio, se procesó un número final de muestras de 109 (n=52 varones entre 4 a 75

años de edad y n=57 mujeres entre 1 a 69 años de edad). Las muestras descartadas fueron 34 (n=34 hombres y mujeres entre 5 a

60 años de edad) debido a que eran insuficientes para realizar las cinco técnicas (n=28), a que tenían mezclas con orina (n=3) y a

que correspondían a fichas con datos no verificables o incompletos (n=3).

Debido a que las larvas rabditoides (L1) evolucionan a filariformes (L3) en un lapso de 12 a 15 horas (32) y con el fin de evitar el

riesgo de contagio al manipular las heces, se procuró que el procesamiento de todas las muestras culminase dentro de este periodo

de tiempo. Si a pesar de esto las larvas rabditoides hubieran evolucionado a filariformes no se hubiese afectado el diagnóstico de

estrongiloidiasis pero sí se hubiese confundido el diagnóstico del estadío clínico de la parasitosis.

Se procesó cada muestra fecal por los métodos: Examen directo con solución salina fisiológica al 0,85% y lugol, utilizando 2 mg de

heces para cada emulsión (34), técnica de sedimentación espontánea en tubo, utilizando de 2 a 5 gr de heces para su preparación

(28), Técnica de Baermann modificada en copa por Lumbreras, utilizando de 5 a 10 gr de heces para su elaboración(9), Cultivo de

Dancescu o en carbón, utilizando de 5 a 10 gr de heces (27), cultivo en placa de agar, utilizando 2 gr de heces(30).

Las lecturas de las placas de cultivo, tanto de Dancescu como de agar, se llevaron a cabo dentro de los primeros 6 días luego de

haberse procesado éstas, con el fin de no permitir el desarrollo de larvas de Uncinarias y evitar así posibles falsos positivos (31,33).

Los resultados obtenidos se expresaron en números y porcentajes para la elaboración de las tablas. Para determinar si hubo

diferencia significativa entre la eficacia de las técnicas, se determinó la razón de eficacia (dividiendo el número de casos positivos

por cada una de las técnicas entre el número total de casos de estrongiloidiasis detectados) y luego dichas razones fueron

enfrentadas por parejas en una matriz de comparaciones. Aplicamos la prueba "z" para diferencia de dos proporciones.

Se determinó la sensibilidad para cada una de las técnicas. Para el análisis estadístico se empleó el paquete estadístico SPSS

versión 10 y el programa Win Episcope versión 2 para Windows.

 

RESULTADOS

Se obtuvieron 109 muestras fecales. Estas correspondieron a 52 (48%) de varones y 57 (52%) de mujeres. La población de estudio

comprendió sujetos entre 1 a 75 años (18,82 ± 15,78 años). De las 109 muestras fecales analizadas, 42 presentaron S.

stercoralis  por al menos una de las técnicas efectuadas (Tabla Nº1).

El cultivo en agar en placa permitió detectar el mayor número de casos de estrongiloidiasis (n=40), seguido del Cultivo de Dancescu

(n=39), la técnica de Baermann modificada en copa por Lumbreras (n=25), la Técnica de Sedimentación Espontánea en Tubo

(n=16) y finalmente el examen directo (n=2) (Tabla Nº2).

Todas las larvas recuperadas fueron identificadas como larvas rabditoides (L1) de S. stercoralis, no obteniéndose larvas filariformes

(L3) ni adultos de esa especie. La prueba "z" no demostró diferencia significativa entre el cultivo en agar en placa y el Cultivo de

Dancescu, pero sí entre ellas respecto a la técnica de Baermann, la técnica de sedimentación espontánea en tubo y el examen

directo (Tabla Nº3).

La sensibilidad de cada una las técnicas, cuando se compararon éstas con los casos positivos y negativos detectados por los cinco

métodos fueron los siguientes: cultivo en agar en placa 95,24%, Cultivo de Dancescu 92,86%, técnica de Baermann 59,52%, técnica

de sedimentación espontánea en tubo 38,09% y examen directo 4,76%.

De los 42 casos positivos por cada método para detectar la presencia de Strongyloides stercoralis, se evidencia que sólo 1 caso fue

positivo a través de las cinco técnicas utilizadas; 2 casos fueron positivos sólo por el cultivo en agar en placa; 1 caso sólo por el

Cultivo de Dancescu y 1 caso sólo por la técnica de Baermann. Tanto la técnica de sedimentación espontánea en tubo como el

examen directo no demostraron en forma aislada ningún caso de estrongiloidiasis.

 

DISCUSIÓN

En la práctica rutinaria de la mayoría de laboratorios de parasitología a nivel nacional, se utiliza el examen directo en solución salina

y lugol con una sola muestra fecal cuando se desea realizar un examen parasitológico de forma rápida. Sólo algunos laboratorios

cuentan con facilidades para realizar alguna técnica de concentración (como la técnica de Baermann o la técnica de sedimentación)

o los cultivos (como el cultivo en agar en placa o el Cultivo de Dancescu) para obtener un diagnóstico más confiable. Los índices de

sensibilidad de 4,76% y 38,09% obtenidos en el presente estudio para el examen directo y la técnica de sedimentación espontánea

en tubo confirman la baja eficiencia que demuestran estos métodos en el diagnóstico de estos nemátodos. La baja efectividad de

estas técnicas puede atribuirse a diversos factores, tales como la distribución no uniforme y la intermitencia en la puesta de las

larvas.

Dichos hallazgos coinciden con los determinados por Maco y cols (31) quienes encontraron valores de sensibilidad muy bajos para

ambas técnicas (3% y 18,2% respectivamente). Múltiples estudios habían demostrado que la técnica de Baermann modificada en

copa por Lumbreras era una prueba de alta sensibilidad (80%, 90%) para el diagnóstico de estrongiloidiasis (35,36). Sin embargo,

en el presente estudio se pudo evidenciar la baja sensibilidad de la técnica de Baermann (59,52%) frente a los cultivos. El Cultivo de

Dancescu mostró en este estudio una sensibilidad similar al Cultivo en agar (92,86% y 95,24% respectivamente), lo cual fue

también demostrado por Terashima y cols (81,7%) (27).

Presumiblemente, la superioridad de este resultado se debe al hecho de haber utilizado papel filtro en el Cultivo de Dancescu. El

papel filtro, siendo una base inerte en medio acuoso, simula las condiciones adecuadas para el desarrollo del ciclo de vida libre

del Strongyloides stercoralis. El empleo del papel filtro en el Cultivo de Dancescu y un adecuado sellado de las placas contribuyó

además a mantener la humedad de la muestra y evitar la contaminación en el laboratorio por el desarrollo de larvas filariformes

infectantes dentro de las placas.

Se encontró una sensibilidad para el Cultivo en agar de 95,24%, resultado que concuerda con el estudio de Uparanukraw y cols (37)

quienes encontraron una sensibilidad de 78 a 100%. Asimismo, Koga y colaboradores (30) compararon el cultivo en agar en placa, la

técnica de sedimentación en tubo usando papel filtro y el examen directo, demostrando claramente que el cultivo en agar era 1.7

veces más eficiente que la técnica de sedimentación con papel filtro (96,8% y 58,1% de sensibilidad respectivamente).

Otros estudios encuentran índices de sensibilidad menores para el cultivo en agar como son los obtenidos por Sukhavat y cols (38)

así como por Inga (39) (83,6% y 87,9% respectivamente).

A pesar de que el cultivo en agar en placa detectó 40/42 casos de estrongiloidiasis y el Cultivo de Dancescu 39/42 casos, la prueba

"z" demostró que ambas técnicas fueron igualmente efectivas, al no haber diferencia significativa entre ellas; pero sí entre ellas y la

técnica de Baermann, la técnica de sedimentación espontánea y el examen directo.

Cabe resaltar que la baja sensibilidad obtenida por la técnica de Baermann podría deberse a que la cantidad recomendada para su

ejecución es de 10 g, lo cual en nuestro caso, por la dificultad de obtener una mayor cantidad de heces en las muestras, tuvo que

realizarse con 4 a 5 g. Esto indudablemente representa un inconveniente al realizar la técnica de Baermann, no siendo así para el

cultivo en agar, en el que puede detectarse estrongiloidiasis aún existiendo poca cantidad de heces (2 g) y pocas larvas en ellas.

Con respecto a la evaluación de costos, se determinó que los costos de la placa de agar como los de Dancescu no son tan elevados

(S/.1,28 y S/.1,21 Soles cada una, respectivamente) (Tabla Nº 4); por lo cual, si se considera la superioridad de éstas con respecto a

las demás técnicas, sería altamente beneficioso para los pacientes. Las ventajas del Cultivo de Dancescu frente al cultivo en agar

son: la poca dificultad técnica y la sencillez en su ejecución y en su procesamiento, su bajo costo y su alto rendimiento; en tanto que

el cultivo en agar es un poco más complejo, ya que requiere de mayor tiempo en su elaboración y de una mejor implementación e

infraestructura del laboratorio (agitador automático, autoclave, refrigeradora) lo que puede comprometer su aplicación rutinaria.

Podemos considerar que tanto el cultivo en agar como el Cultivo de Dancescu deberían emplearse como métodos de rutina para el

diagnóstico de S. stercoralis, en grupos de alto riesgo (con Diabetes Mellitus, linfoma, leucemia, desnutrición, alcoholismo,

tratamiento con corticosteroides y cualquier condición inmunosupresora), por la posibilidad de desarrollar una enfermedad

diseminada o hiperinfección con un pronóstico fatal.

Validación del examen en fresco, coloraciones de May 

Grunwald-Giemsa y Gram y medios de cultivo para el 

diagnostico de Trichomonas vaginalis

SIXTO RAUL COSTAMAGNA* y MARIA PRADO FIGUEROA*

VALIDATION TEST OF CONVENTIONAL WET MOUNT EXAMINATION, MAY GRUNWALD-GIEMSA AND GRAM STAINING, 

AND CULTURE MEDIUM TESTS FOR THE DIAGNOSIS OF Trichomonas vaginalis

The goal of the present study was to determine the validity of the following five methods used for the diagnosis of Trichomonas vaginalis  in vaginal secretions at the clinical laboratory: Gram staining; Conventional wet mount examination; May Grunwald-Giemsa staining; Culture in a modified Diamond (Menarini®) medium; Culture in an OXOID® CM 161 medium. We used 89 vaginal-secretion samples extracted with sterile cotton swabs of female subjects between the ages of 25 and 55 at the laboratory of the Hospital de Evacuación 181 of the city of Bahía Blanca, Province of Buenos Aires, Argentina. The samples were stained with Gram and May Grunwald-Giemsa; observed by conventional wet mount examination; and cultured in Diamond (Menarini®) and OXOID® CM 161 media and incubated for 5 days at 37ºC in an anaerobic condition. Results showed that, for a prevalence of disease (Trichomonosis) of 29.21%, the Diamond (Menarini®) culture medium and the immediate conventional wet mount examination at our diagnostic lab have similar sensitivities, predictive negative values, and global values: 80.7%, 92.64%, and 94.38%, respectively. When the four tests were conducted in parallel, the resulting sensitivity was 99.76% with a predictive negative value of 99.90%. As for the OXOID® CM 161 medium, even though the global value of the test was similar, its sensitivity was 76.92%, slightly lower than the results from the conventional wet mount examination, but without a significant statistical difference. The Gram staining showed a diagnostic sensitivity of 19.23%. We conclude that the Diamond (Menarini®) and the OXOID® CM 161 culture media do not improve the etiological diagnosis ofTrichomonas as compared to the conventional wet mount examination and May Grunwald-Giemsa staining tests. While we do not recommend using Gram staining for the study of T. vaginalis, we consider that, if the flagellate were to be identified by this method, its finding could be reported without further testing.

Key words: Trichomonas vaginalis; Trichomonosis; Culture of Trichomonas; Diagnostic.

* Cátedra de Parasitología Clínica. Departamento de Biología, Bioquímica y Farmacia. Universidad Nacional del Sur. San Juan 670. 8000- Bahia Blanca. Argentina. E-mail:  rcostama@criba.edu.ar

INTRODUCCION

La trichomonosis, parasitosis del tracto genitourinario producida por el protozoo Tricho-monas vaginalis1 es una de las enfermedades de transmisión sexual (ETS) más difundidas en todo el mundo. No obstante aún no existe un método para el diagnóstico de laboratorio útil para todas las circunstancias, de bajo costo, rápido, sencillo y con valores de predictibilidad, tanto negativos como positivos, aceptables.

Los medios de cultivos para T. vaginalis, por lo menos en nuestro medio, no han tenido el éxito que autores europeos y norteamericanos han obtenido. Los mayores inconvenientes que restringen su uso son el costo de los mismos y el hecho de que todos necesitan el agregado de suero de caballo, antibióticos y antimicóticos, en el momento de su uso, deben ser incubados en anaerobiosis, o bien no se encuentran disponibles en el mercado.2-8

Para evaluar la utilidad de los mismos en nuestra ciudad, es que procedimos, en este ensayo, a validar las siguientes metodologías comúnmente utilizadas para el

diagnóstico de T. vaginalis en flujo vaginal, por el laboratorio de Análisis Clínicos: 1) Coloración de Gram, 2) Examen en fresco entre porta y cubreobjetos 3) Coloración de May Grunwald-Giemsa. 4) Cultivo en medio de Diamond modificado (Menarini®) y 5) Cultivo en medio OXOID® CM-161.

MATERIAL Y METODOS

Se procesaron 89 muestras de flujo vaginal de mujeres que concurrieron al Servicio de Laboratorio del Hospital de Evacuación 181 de la ciudad de Bahía Blanca (Argentina), cuyas edades oscilaban entre los 25 y 55 años, y sintomatología compatible con vaginitis.

Las muestras fueron extraídas para ser procesadas simultáneamente por los cinco métodos señalados, para lo cual se extrajo flujo vaginal de fondo de saco, evaluando que fuese suficiente y significativo, con hisopos estériles.

Primeramente se efectuaron extendidos para coloraciones de Gram y de May Grunwald-Giemsa (dos extendidos para cada uno). Posteriormente se extrajo nueva muestra para efectuar el examen en fresco entre porta y cubreobjetos (de 24 x 24 mm) y el hisopo fue colocado en un tubo que contenía 0,5 cc de solución fisiológica de cloruro de sodio, el cual se mantuvo en un baño termostatizado a 37ºC hasta el momento de su observación: menos de cinco minutos para todos los casos. Se observó con 400 aumentos por espacio de cinco minutos cada preparado, y se informó la presencia o ausencia del protozoo.9

Finalmente se procedió a la extracción de muestras para los cultivos: un hisopo con flujo vaginal fue colocado en cada uno de los tubos que contenían 10 ml del medio de cultivo correspondiente.

Los medios de cultivos utilizados fueron:

a. Medio de cultivo Diamond2 (Menarini®). Cod Tric-20. Ref 1038. Barcelona-España

b. Medio OXOID® CM 161, Hampshire, England. Este medio fue suplementado con suero de caballo y antibiótico-antimicótico, de acuerdo a instructivos del fabricante.

Ambos medios fueron incubados durante cinco días 37ºC, en anaerobiosis.

Para el análisis estadístico de los resultados, en estas experiencias utilizamos el siguiente software: Epidat, versión 2.0. OPS-OMS, 1997, para análisis de datos tabulados para pruebas diagnósticas simples y para combinación de pruebas.

Definimos, para esta experiencia: los siguientes terminos:

- Sensibilidad: la proporción de individuos con la enfermedad que tienen una prueba positiva. - Especificidad: la proporción de sanos que tienen una prueba negativa. - Valor Predictivo del Resultado Positivo: la probabilidad de que un individuo con resultado positivo en la prueba, tenga la enfermedad. - Valor Predictivo del Resultado Negativo: la probabilidad de que un individuo con resultado negativo en la prueba, no tenga la enfermedad. - Valor Global de la Prueba: la probabilidad de que un individuo sea clasificado correctamente por la prueba.

RESULTADOS

Los resultados, para un nivel de confianza del 95%, fueron los que se muestran en la Tabla 1.

Si las cinco pruebas se efectuaran «en serie», es decir que a los sujetos con resultado negativo en una prueba ya se los considera «negativo» y por lo tanto no se lo somete a una segunda prueba, mientras que a los positivos sí se les realiza otra prueba (o la misma), para «confirmar el caso», los resultados serían los mostrados en la Tabla 2.

Si las cinco pruebas se efectuaran «en paralelo», es decir que a los sujetos con resultado positivo en una prueba ya se consideran como «positivos» y por lo tanto no se someten a una segunda prueba, mientras que a los «negativos» se les efectúa otra prueba diagnóstica, hasta llegar a la quinta en este caso, buscando de esta manera aumentar la sensibilidad del diagnóstico del laboratorio, los resultados serían los mostrados en la Tabla 3.

La prevalencia de la enfermedad en el grupo estudiado, fue del 29,21%, artificialmente aumentada ya que las pacientes fueron seleccionadas en función de la sintomatología que manifestaban presentar al momento de la realización del examen de flujo, en el laboratorio.

Tabla 1. Sensibilidad, especificidad, VPRP, VPRN y valor global de la prueba (VGP) obtenida para el diagnóstico de Trichomonas vaginales 

mediante cinco pruebas

Tabla 2. Resultados de las Sensibilidades y VPRN de las pruebas diagnósticas para 

Trichomonas vaginalis cuando son efectuadas en serie

Tabla 3. Resultados de Sensibilidad y VPRN 

de las pruebas dignósticas paraTrichomonas 

vaginalis cuando son efectuadas en paralelo

Sensibilidad(en serie)

36,65% (Intervalos de confianza: 19,49-57,57)

Sensibilidad(en paralelo)

99,76% (intervalos de confianza: 83,61-99,74)

VPRN (en serie)

79,27% (Intervalos de confianza: 68,42-87,24)

VPRN (en paralelo)

99,90% (intervalos de confianza: 92,68-99,89)

DISCUSION

Del análisis de los resultados obtenidos en esta experiencia, podemos concluir que el medio de cultivo Diamond (Menarini®), para una prevalencia de enfermedad (Trichomonosis) del 29,21%, en nuestro laboratorio de diagnóstico, presenta una sensibilidad, valor predictivo del resultado negativo y valor global de la prueba, similar al examen en fresco; por esta razón es que hasta tanto se disponga de mejores medios de cultivo comerciales, no recomendamos la utilización de los

mismos en la práctica diaria en nuestros laboratorios de diagnóstico microbiológico, en contraposición con lo expresado por otros investigadores quienes aseguraban que si no cultivan los flujos vaginales, perdían la mitad de los diagnósticos positivos de T. vaginalis.3

Con respecto al medio de Oxoid®, si bien el valor global de la prueba es similar, presenta una sensibilidad del 76,92%, ligeramente inferior al examen en fresco, aunque con diferencia estadística no significativa.

Con referencia a la coloración de Gram, no consideramos una coloración recomendable para investigar T. vaginalis como única prueba. Simplemente fue incluida en esta validación ya que es una coloración que rutinariamente efectúan los bacteriólogos en el estudio del flujo vaginal, y que en caso de visualizarse el flagelado en la misma, puede informarse su hallazgo y no se necesitarían efectuar otros exámenes.

Si bien nuestros hallazgos son coincidentes con los de otro artículo,10 es pertinente señalar que en 351 muestras estudiadas en otro estudio, se detectó T. vaginalis por examen en fresco en el 6% de los casos mientras que si se utilizaba cultivos acelulares anaeróbicos la detección llegaba al 13%.11

Un autor12 otorga una «eficiencia relativa» del 100% al cultivo del flujo vaginal en medio de Diamond incubado durante siete días a 37ºC, sin embargo, el mismo autor manifiesta una sensibilidad del 76,9% al medio de Kupferberg13 igual a la hallada por nosotros en esta experiencia, pese a que las muestras son diferentes. El mismo autor,6 si bien reconoce el valor del medio de Diamond, señala que es solamente en condiciones de anaerobiosis y con una incubación de siete días, lo que dificulta aún más su utilización en los laboratorios comunes, ya que no todos disponen de jarras para anaerobiosis, llegándose, luego de un análisis de costo/beneficio, a ser descartado su uso en forma rutinaria por la mayoría de los Laboratorios de Análisis Clínicos.

Por lo expuesto creemos que el medio de Diamond (Menarini®) podría ser recomendable para estudios de cepas axenizadas, para mantenimiento de las mismas en laboratorio para investigación, pero no está disponible en nuestro medio, y su preparación en el laboratorio insume demasiado tiempo.

Es pertinente recordar aquí, que en otros estudios14 los autores demostraron que la coloración fluorescente con naranja de acridina15   tenía una sensibilidad muy superior al examen en fresco, por lo que, teniendo en cuenta que los medios de cultivo aquí ensayados no mejoran significativamente la sensibilidad respecto del examen en fresco, los resultados aquí presentados confirman que el algoritmo para el diagnóstico de T. vaginalis por el laboratorio de Análisis Clínicos es el que incluye: examen en fresco, coloración de May Grunwald-Giemsa y coloración fluorescente con naranja de acridina, efectuados "en paralelo".14

RESUMEN

En el presente estudio se efectuó la validación de las siguientes metodologías utilizadas para el diagnóstico deTrichomonas vaginalis en flujo vaginal, en el laboratorio de Análisis Clínicos: 1) Coloración de Gram, 2) Examen en fresco entre porta y cubreobjetos 3) Coloración de May Grunwald-Giemsa. 4) Cultivo en medio de Diamond modificado (Menarini®) y 5) Cultivo en medio OXOID® CM-161.

Se utilizaron 89 muestras de flujo vaginal extraído con hisopo estéril de fondo de saco, de mujeres que concurrieron al Servicio de Laboratorio del Hospital de Evacuación 181, de la ciudad de Bahía Blanca (Provincia de Buenos Aires) Argentina y cuyas edades oscilaban entre 25 y 55 años.

Las muestras se colorearon con Gram, May Grunwald-Giemsa, se efectuaron observaciones en fresco entre porta y cubreobjetos, y fueron sembradas en los medios de Diamond (Menarini®) y OXOID® CM-161 e incubadas durante cinco días a 37ºC, en anaerobiosis.

Los resultados obtenidos mostraron que el medio de cultivo Diamond (Menarini®) y el examen en fresco inmediato, para una prevalencia de enfermedad (Trichomonosis) del 29,21%, en nuestro laboratorio de diagnóstico, presentan una sensibilidad, valor predictivo del resultado negativo y valor global de la prueba

similares: 80,7%; 92,64% y 94,38% respectivamente. Si las cuatro pruebas son efectuadas en paralelo, la sensibilidad que se obtiene es del 99,76%, con un valor predictivo del resultado negativo del 99,90%.

Para el medio OXOID®, si bien el valor global de la prueba es similar, presenta una sensibilidad del 76,92%, ligeramente inferior al examen en fresco, aunque con diferencia estadística no significativa.

La coloración de Gram presentó una sensibilidad diagnóstica de 19,23%.

Concluimos que los medios de cultivo Diamond (Menarini®) y OXOID® CM 161 no mejoran el diagnóstico etiológico de trichomonosis con relación al examen en fresco y coloración de May Grunwald-Giemsa. La coloración de Gram no la recomendamos para investigar T. vaginalis, no obstante, de visualizarse el flagelado por la misma, puede informarse su hallazgo y no se necesitarían efectuar otros exámenes

Conclusion

Como se puede ver en los anexos los diferentes medios de cultivos son de alguna manera muy útiles para determinación de los parasitos y por ende ayuda al diagnostico podemos dar fe de que contamos que técnicas principales como baermann , los de carbono y los agar .