uji aktivitas antiinflamasi topikal ekstrak metanol … · 2017. 1. 16. · uji aktivitas...

UJI AKTIVITAS ANTIINFLAMASI TOPIKAL EKSTRAK METANOL

DAUN SIRIH MERAH (Piper crocatum Ruiz & Pav.) PADA MENCIT

DIINDUKSI KARAGENIN

SKRIPSI

Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat

Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.)

Program Studi Farmasi

Oleh :

Rafaella Daramika Dwi Esti

NIM : 138114169

FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS SANATA DHARMA

YOGYAKARTA

2016

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

i

HALAMAN JUDUL



DIINDUKSI KARAGENIN

SKRIPSI

Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat

Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.)

Program Studi Farmasi

Oleh :


NIM : 138114169

FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS SANATA DHARMA

YOGYAKARTA

2016


ii


iii


iv


v


vi

HALAMAN PERSEMBAHAN

“Once you choose hope, anything’s possible. The reason so many struggle with

faith is that they lack hope. if you have no hope, faith has nothing to give

substance to. when you don’t know what to do, just continue to trust in GOD, and

know that He is helping you. Persevere even when you feel like you can’t.”

Saya persembahkan skripsi ini untuk:

Tuhan Yesus Kristus yang selalu menguatkan dan mengarahkan setiap

jalan dan langkah yang harus saya tempuh.

Bapak, Ibu, dan Mas Yoga yang selalu mendukung, menyemangati,

dan mendoakan saya.

Teman-teman semua yang senantiasa memberi dukungan, semangat,

dan selalu mengingatkan saya.


vii

PRAKATA

Puji dan syukur kepada Tuhan Yang Maha Esa atas segala berkat, rahmat,

dan karunia yang dilimpahkan sehingga penulis dapat menyelesaikan skripsi yang

berjudul “UJI AKTIVITAS ANTIINFLAMASI TOPIKAL EKSTRAK

METANOL DAUN SIRIH MERAH (Piper crocatum Ruiz & Pav.) PADA

MENCIT DIINDUKSI KARAGENIN” sebagai salah satu syarat untuk

mendapatkan gelar sarjana Farmasi (S.Farm) Fakultas Farmasi Universitas Sanata

Dharma Yogyakarta.

Penyeleseaian skripsi ini tentunya tidak lepas dari bantuan berbagai pihak,

baik secara langsung maupun tidak langsung. Oleh karena itu penulis hendak

mengucapkan terimakasih kepada:

1. Dekan Fakultas Farmasi Sanata Dharma

2. Ibu Dr. Yustina Sri Hartini, M.Si., Apt., selaku dosen pembimbing utama atas

segala kesabaran dan waktu yang telah diberikan untuk memberi masukan,

bimbingan, dukungan, saran, dan motivasi kepada penulis dalam penelitian

dan penyusunan skripsi ini.

3. Ibu drh. Sitarina Widyarini, MP. Ph.D., selaku dosen pembimbing

pendamping atas segala kesabaran dan waktu yang telah diberikan untuk

memberi masukan, bimbingan, dukungan, saran, dan motivasi kepada penulis

dalam penelitian dan penyusunan skripsi ini.

4. Ibu Dr. Erna Tri Wulandari, M.Si., Apt., selaku dosen penguji skripsi yang

telah banyak memberi ide, saran, dan masukkan yang membangun untuk

penelitian ini.

5. Bapak Christianus Heru Setiawan, M.Sc., Apt., selaku dosen penguji skripsi

yang telah banyak memberi ide, saran, dan masukkan yang membangun untuk

penelitian ini.

6. Ibu Agustina Setiawati M.Sc., Apt., dan Bapak Flotentinus Dika Octa

Riswanto, M.Sc., selaku dosen pembimbing akademik penulis atas

pendampingan, pengarahan, dukungan kepada penulis selama ini.

7. Bapak Wagiran, Bapak Heru dan Bapak Parjiman selaku laboran atas segala

bantuan dan dukungan yang diberikan serta dinamika di laboratorium selama

melakukan penelitian.

8. Bapak, Ibu, dan Mas Yoga yang selalu memberikan motivasi, dukungan,

semangat dan kekuatan bagi penulis serta senantiasa mendoakan dan

mengingatkan sehingga penulis dapat menyelesaikan skripsi ini.

9. Frederik Raven Roynaldo yang selalu memotivasi dan senantiasa menemani

penulis untuk menyelesaikan skripsi ini.

10. Teman-teman seperjuangan dalam penelitian Piper crocatum: Rianti Putri

Kinanthi, Dini Angelina Papulung, Eugenia Clarisa Giastini Kerans atas


viii

kebersamaa, kerja sama, bantuan, dan semangat selama penelitian ini

berlangsung.

11. Sahabat-sahabat penulis: Yose dan Zita yang menjadi rekan penulis ketika

awal kuliah di Fakultas Farmasi USD, Inez dan Ria yang menemani dan

memberi semangat penulis selama kuliah, Petra dan Yaya yang menjadi

sahabat sejak SMA yang selalu memberikan semangat.

Penulis menyadari bahwa skripsi ini masih jauh dari sempurna, maka

penulis mengharapkan kritik dan saran dari semua pihak yang membangun

sehingga bisa membuat karya yang lebih baik. Penulis mohon maaf atas segala

kesalahan dan kekurangan yang terdapat dalam skripsi ini. Akhir kata, penulis

berharap penelitian ini dapat bermanfaat bagi semua pihak.

Yogyakarta, 23 Oktober 2016

Penulis


ix

DAFTAR ISI

HALAMAN JUDUL ................................................................................... i

PERSETUJUAN PEMBIMBING ............................................................... ii

PENGESAHAN SKRIPSI BERJUDUL ..................................................... iii

PERNYATAAN KEASLIAN KARYA ..................................................... iv

LEMBAR PERSETUJUAN PUPLIKASI .................................................. v

HALAMAN PERSEMBAHAN ................................................................. vi

PRAKATA .................................................................................................. vii

DAFTAR ISI ............................................................................................... ix

DAFTAR TABEL ....................................................................................... x

DAFTAR GAMBAR .................................................................................. xi

DAFTAR LAMPIRAN ............................................................................... xii

ABSTRAK .................................................................................................. xiii

ABSTRACT ................................................................................................ xiv

PENDAHULUAN ...................................................................................... 1

METODE PENELITIAN ............................................................................ 2

HASIL DAN PEMBAHASAN ................................................................... 5

KESIMPULAN ........................................................................................... 11

DAFTAR PUSTAKA ................................................................................. 11

LAMPIRAN ................................................................................................ 13

BIOGRAFI PENULIS ................................................................................ 40


x

DAFTAR TABEL

Tabel I. Rata-rata AUC total tebal lipat kulit dalam mm.jam (X ± SE) pada

setiap kelompok perlakuan dengan hasil uji Mann Whitney ........... 6


xi

DAFTAR GAMBAR

Gambar 1. Diagram batang perbandingan persen penghambatan inflamasi

antar kelompok perlakuan ........................................................... 8

Gambar 2. Hasil KLT EMDPc dengan standar senyawa neolignan PC-1

dan PC-2 ..................................................................................... 9

Gambar 3. Proses terjadinya inflamasi ......................................................... 9

Gambar 4. Daun dan serbuk Piper crocatum ............................................... 17

Gambar 5. Shaker dan Penyaringan maserat ................................................ 17

Gambar 6. Rotary evaporator dan Ekstrak metanol Piper crocatum ........... 17

Gambar 7. Pemotongan dan penyukuran bulu mencit menggunakan

Veet® .......................................................................................... 18

Gambar 8. Penyuntikan karagenin secara subkutan dan edema yang

terbentuk di kulit punggung mencit ............................................ 18

Gambar 9. Pengukuran tebal kulit normal dan tebal edema pada

punggung mencit menggunakan jangka sorong digital ............... 18

Gambar 10. Krim ekstrak metanol daun Piper crocatum konsentrasi

2%, 4%, dan 8% .......................................................................... 19

Gambar 11. Uji homogenitas krim ekstrak metanol daun Piper crocatum

konsentrasi 2%, 4%, dan 8% ....................................................... 19

Gambar 12. Pengolesan krim ekstrak metanol daun Piper crocatum

pada kulit punggung mencit ........................................................ 19

Gambar 13. Alat moisture balance ............................................................... 20

Gambar 14. Kurva pengukuran edema setiap 1 jam hingga 6 jam dari 3

konsentrasi karagenin secara subkutan ....................................... 21

Gambar 15. Kurva Rata-rata Selisih Tebal Kulit Punggung Mencit ............ 26


xii

DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran 1. Surat Determinasi Piper crocatum Ruiz & Pav. ........................ 13

Lampiran 2. Surat Ethical Clearance ............................................................. 14

Lampiran 3. Surat Kalibrasi Jangka Sorong .................................................. 15

Lampiran 4. Surat legalitas penggunaan aplikasi SPSS untuk pengujian data

secara statistik ............................................................................. 16

Lampiran 5. Daun Piper crocatum dan Ekstrak Metanol Piper crocatum .... 17

Lampiran 6. Penyukuran, Penyuntikan dan Pengukuran Tebal Kulit Mencit

Betina Galur Swiss ..................................................................... 18

Lampiran 7. Krim Ekstrak Metanol Daun Piper crocatum, Uji Homogenitas,

dan Pengolesan Krim Ekstrak Pada Punggung Mencit .............. 19

Lampiran 8. Uji Kadar Air Dengan Moisture Balance .................................. 20

Lampiran 8. Uji Pendahuluan ......................................................................... 21

Lampiran 9. Data perhitungan AUC tebal lipat kulit punggung mencit ........ 22

Lampiran 10. Data perhitungan persen penghambatan inflamasi (%PI) ....... 24

Lampiran 11. Kurva Rata-rata Selisih Tebal Kulit Punggung Mencit ........... 26

Lampiran 12. Hasil analisis statistik AUC total rata-rata ............................... 27

Lampiran 13. Hasil analisis statistik % Penghambatan Inflamasi.................. 36


xiii



DIINDUKSI KARAGENIN


Fakultas Farmasi, Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta, Indonesia

ABSTRAK

Piper crocatum Ruiz & Pav. atau yang sering dikenal dengan sirih merah

merupakan tanaman yang memiliki banyak manfaat salah satunya sebagai

antiinflamasi. Inflamasi biasanya diobati menggunakan non-steroid anti-

inflammatory (NSAID) dan kortikosteroid, tetapi penggunaan secara oral dapat

mengakibatkan efek samping secara signifikan. Maka dari itu pengobatan

antiinflamasi secara topikal bisa dijadikan alternatif untuk mengurangi efek

samping yang ditimbulkan. Pengujian anti inflamasi secara topikal dimaksudkan

untuk menghindari first pass metabolism dan mengurangi efek samping obat yang

dapat mengiritasi lambung. Penelitian ini dilakukan untuk melihat efek

antiinflamasi ekstrak metanol daun Piper crocatum pada mencit betina galur Swiss

yang diinduksi karagenin 3% secara topikal. Ekstrak daun sirih merah dibuat

menggunakan metode maserasi dengan pelarut metanol kemudian dipekatkan

menggunakan rotary evaporator. Penelitian ini merupakan jenis penelitan

eksperimental murni dengan rancangan acak lengkap pola searah menggunakan 25

ekor mencit dibagi ke dalam 5 kelompok. Kelompok I merupakan kontrol negatif

dengan memberikan karagenin 3%, kelompok II merupakan kontrol basis

Biocream®, kelompok III-V diberikan ekstrak metanol daun Piper crocatum

(EMDPc) dengan konsentrasi 2%, 4%, dan 8%. Aktivitas antiinflamasi diamati

setiap 1 jam selama 6 jam dengan mengukur tebal kulit punggung mencit yang

diinduksi karagenin menggunakan jangka sorong. Hasil penelitian ini menunjukkan

bahwa EMDPc memberikan efek antiinflamasi secara topikal pada mencit yang

diinduksi karagenin. EMDPc 8% memberikan efek antiinflamasi tertinggi dengan

nilai rata-rata AUC total sebesar 16.63 ± 0.72 dan mampu menghambat inflamasi

sebesar 36.45 ± 2.75 %.

Kata kunci: Piper crocatum Ruiz & Pav., Ekstrak, Antiinflamasi, Topikal


xiv

ABSTRACT

Piper crocatum Ruiz & Pav. or often known as red betel is a plant that has

many benefits one of them as anti-inflammatory. Inflammation is usually treated

with non-steroidal anti-inflammatory (NSAIDs) and corticosteroids, but the use of

orally can cause side effects significantly. Thus the anti-inflammatory topical

treatment could be an alternative to reduce side effects. Testing a topical anti-

inflammatory manner intended to avoid first pass metabolism and reduce the side

effects of drugs can irritate the stomach. This study was conducted to see the effect

topical antiinflammatory of the methanol extract of leaves Piper crocatum in female

mice Swiss induced carragenan 3%. The extract of red betel leaf was made using

maceration with methanol and then concentrated using a rotary evaporator.This

study was to determine the topical anti-inflammatory activity of methanol extract

of leaves of Piper crocatum (EMDPc) in female mice Swiss strain induced

karagenin 3%. This study is a purely experimental design with direct samling design

using 25 mice were divided into 5 groups. The first group was a negative control

by giving karagenin 3%, group II was the control Biocream® basis, the group III-

V given EMDPc with a concentration of 2%, 4% and 8%. Anti-inflammatory

activity observed every 1 hour for 6 hours by measuring thickness the skin backs of

mice induced karagenin using a caliper.The results of this study indicate that

EMDPc provide topical anti-inflammatory effects in mice induced karagenin.

EMDPc 8% provides the highest anti-inflammatory effect with an average value of

AUC total of 16.63 ± 0.72 and and is able to inhibit inflammation of 36.45 ± 2.75%.

Keywords: Piper crocatum Ruiz & Pav., Extract, Anti-inflammatory, Topical


1

PENDAHULUAN

Piper Crocatum Ruiz & Pav. atau lebih dikenal dengan sirih merah merupakan

tanaman yang memiliki potensi menyembuhkan berbagai penyakit. Tanaman sirih merah

berpotensi menjadi antiinflamasi karena dalam bentuk ekstrak metanolnya mengandung

berbagai senyawa aktif diantaranya minyak atsiri, alkaloid, terpenoid, dan flavanoid

(Hartini, at al., 2013; Fitriyani dkk, 2011).

Menurut penelitian Hartini, et al., (2013) menunjukkan bahwa ekstrak metanol daun

sirih merah pada dosis 75 μg/mL mampu meningkatkan aktivitas fagositosis makrofag yang

setara dengan produk-X® 100 μg/mL yang mengandung ekstrak Echinacea. Makrofag

adalah sel yang berperan penting dalam sistem imunitas tubuh melawan patogen. Salah satu

peran utama makrofag dalam sistem imunitas alami adalah fungsi fagositosis, yang bertujuan

untuk mengeliminasi partikel ekstraseluler, sel yang rusak atau mati, dan juga bakteri

patogen. Aktivasi makrofag merupakan bagian integral dari reaksi inflamasi yang terjadi

selama infeksi berlangsung (Haniastuti, 2009). Selain itu, penelitian Hartini, at al., (2014)

mengenai efek imunnomodulator dua senyawa neolignan hasil isolasi dari ekstrak metanol

daun sirih merah menunjukkan bahwa isolat neolignan daun sirih merah yaitu isolat Pc-1

dan isolat Pc-2 memiliki aktivitas fagositosis makrofag yang relatif tinggi, akan tetapi tidak

memproduksi NO yang berlebihan yang dikatalisis oleh enzim inducible nitric oxide

synthase (INOS). Bila terjadi peningkatan ekspresi INOS dalam jaringan, hal ini dapat

menunjukkan adanya proses peradangan pada jaringan (Lukiati, 2012). Namun pada kedua

isolat tidak terjadi produksi NO berlebih oleh sebab itu, kedua isolat kemungkinan dapat

menjaga fungsi sel-sel imun dan melindungi dari dampak aktivitas fagositosis makrofag

yang berlebihan yang mengindikasikan adanya aktivitas antioksidan dan antiinflamasi. Hal

ini menunjukkan bahwa ekstrak metanol daun sirih juga mengandung senyawa neolignan

yang diduga bisa berpotensi menjadi antiinflamasi. Hasil penelitian yang dilakukan Fitriyani

dkk. (2011) juga menunjukkan bahwa ekstrak metanol daun sirih merah yang diberikan

secara oral memiliki aktivitas antiinflamasi pada tikus putih yang diinduksi karagenin dan

aktivitas antiinflamasi tertinggi terjadi pada dosis 50 mg/kg BB.

Inflamasi atau peradangan merupakan suatu respon terhadap gangguan pada tubuh

yang disebabkan oleh faktor luar pada jaringan hidup. Respon ini dapat ditimbulkan oleh

infeksi mikroba, agen fisik, zat kimia, jaringan nekrotik atau juga oleh reaksi imun (Mitchell,

Kumar, Abbas, dan Fausto, 2006). Peradangan akan berhenti apabila agen penyebab telah

tereliminasi dan mediator-mediator yang dilepaskan telah diuraikan atau disingkirkan


2

(Kumar, et al., 2005). Inflamasi atau peradangan biasanya diobati menggunakan non-steroid

anti-inflammatory (NSAID) dan kortikosteroid, tetapi efek sampingnya bisa terjadi secara

signifikan (Gutiérrez, et al, 2012). Penggunaan obat NSAID (COX-2) secara peroral dapat

menimbulkan berbagai efek samping seperti masalah lesi pada lambung dan efek trombotik

pada kardiovaskular (Alam, et al., 2013). Maka dari itu pengobatan antiinflamasi secara

topikal bisa dijadikan alternatif untuk mengurangi efek samping yang ditimbulkan. Terapi

topikal merupakan metode yang nyaman serta terhindar dari jalur metabolisme obat pertama

(first-pass metabolism) di hati. Terapi topikal digunakan untuk menghindari risiko yang

mempengaruhi penyerapan obat pada terapi peroral, misalnya perubahan pH, aktivitas

enzim, dan pengosongan lambung yang dapat mengiritasi saluran cerna (Asmara dkk, 2012).

Identifikasi aktivitas dari senyawa alam dimulai melalui proses ekstraksi (Deharo

dan Ginsburg, 2011). Semua bahan tanaman yang digunakan harus benar serta pemiilihan

prosedur ekstraksi tergantung pada sifat dari bahan tanaman dan komponen yang akan

diisolasi. Alkohol adalah pelarut umum bagi banyak konstituen tanaman (Evans, 2002).

Aktivitas biologis senyawa fitokimia yang ada di tanaman merupakan hasil dari kombinasi

dari beberapa senyawa, proses isolasi malah akan mengarah pada berkurangnya atau hilang

dari aktivitas biologis tersebut. Terkadang penggunaan campuran senyawa yang kompleks

dalam bentuk ekstrak memiliki efek yang lebih besar dari pada senyawa hasil isolasi.

Komponen yang terkandung di dalamnya memiliki beberapa aktivitas yang dapat

menghasilkan efek yang lebih kuat karena adanya efek sinergis serta adanya sifat adiktif dari

senyawa didalamnya (Carmona dan Pereira, 2013).

Maka dari itu dilakukan penelitian untuk mengetahui apakah ekstrak dari daun sirih

merah (Piper crocatum Ruiz & Pav.) memiliki aktivitas antiinflamasi topikal pada mencit

diinduksi karagenin. Hasil penelitian ini diharapkan dapat memberikan informasi mengenai

manfaat daun sirih merah di masyarakat sebagai antiinflamasi.

METODE PENELITIAN

Bahan penelitian

Daun sirih merah yang diperoleh dari kebun obat “MERAPI FARMA”, Yogyakarta,

metanol grade teknis dan grade pro analisis (pa), KLT, akuades, hewan uji berupa mencit

betina galur Swiss berumur sekitar 6-8 minggu dengan bobot sekitar 20-30 gram dalam

kondisi sehat yang diperoleh dari Laboratorium Immuno Universitas Sanata Dharma


3

Yogyakarta, karagenin tipe I (Sigma Chemical co.) sebagai inflamatogen, NaCl 0,9%

sebagai pelarut karagenin, biocream® sebagai basis krim, Veet® sebagai perontok bulu.

Alat Penelitian

Maserator/orbital shaker, vacuum rotary evaporator “BUCHI”, waterbath, chamber,

deteksi UV, spuit injeksi, mortir dan stamper, stopwatch, jangka sorong Digital Caliper

“TORA”.

Pembuatan Ekstrak Metanol Daun Piper crocatum (EMDPc)

Daun sirih merah dicuci dengan cara dialiri air sambil dibersihkan kotoran yang

melekat pada daun sampai bersih kemudian dikeringkan dalam oven dengan suhu 50o C

sampai kering, ditunjukkan dengan mudah hancurnya daun ketika diremas. Daun sirih merah

dibuat menjadi serbuk dengan blender, kemudian dilakukan pengayakan dengan ayakan

nomor mesh 40. Serbuk simplisia daun sirih merah sebanyak 100 gram ditimbang kemudian

dimaserasi dengan pelarut metanol hingga simplisia terendam sempurna. Maserasi dilakukan

selama 24 jam pada suhu ruangan dan terlindung dari cahaya matahari langsung sambil

sesekali dilakukan penggojogan secara otomatis dengan menggunakan shaker. Setelah 24

jam dimaserasi, filtrat disaring dengan corong Buchner dan ampasnya diremaserasi dengan

metanol selama 24 jam lalu disaring. Pelarut pada filtrat dihilangkan dengan cara diuapkan

dengan menggunakan vacuum rotary evaporator pada suhu 40oC. Kemudian diuapkan

kembali dengan menggunakan waterbath untuk diperoleh ekstrak kental daun sirih merah

sampai mendapatkan bobot tetap.

Pembuatan krim ekstrak daun sirih merah

Menentukan tiga konsentrasi EMDPc dalam krim yaitu 2; 4; dan 8% 𝑏 𝑏⁄ . Pembuatan

krim ekstrak daun sirih merah 2; 4; 8% dibuat dengan menimbang ekstrak metanol daun

sirih merah seberat 0,1; 0,2; dan 0,4 g kemudian dilarutkan dalam 5 g basis Biocream®.

Setelah itu krim EMDPc di uji homogenitasnya untuk memastikan bahwa ekstrak tercampur

secara merata.

Uji Pendahuluan

Uji pendahuluan bertujuan untuk menetapkan konsentrasi karagenin optimal yang

akan digunakan sebelum peneliti melakukan uji efek antiinflamasi topikal. Digunakan 3

kelompok mencit, masing-masing kelompok terdiri dari 2 mencit. Kelompok I menggunakan

konsentrasi karagenin sebesar 1%, kelompok II 2%, dan kelompok III 3%. Pembuatan

karagenin untuk pra studi dilakukan dengan melarutkan 1; 2; 3 g karagenin dalam larutan


4

NaCl 0,9% hingga 100 mL sehingga diperoleh larutan karagenin 1; 2; 3% b/v. Diinjeksikan

masing-masing konsentrasi karagenin pada masing-masing kelompok di kulit punggung

mencit, kemudian diukur lipat kulit setiap 1 jam selama 6 jam. Edema pada kulit punggung

mencit dari pemberian karagenin yang mengalami peningkatan tebal kulit selama 2-3 kali

dari tebal awal dipilih konsentrasi penginduksi inflamasi.

Penyiapan hewan uji dan pengujian EMDPc

Hewan uji yang digunakan sebanyak 25 ekor mencit yang dibagi secara acak menjadi

5 kelompok perlakukan (masing-masing kelompok terdiri dari 5 ekor mencit). Bulu

punggung hewan uji digunting terlebih dahulu kemudian dioleskan Veet® untuk

merontokkan bulu yang belum tercukur sempurna. Kulit punggung yang telah tercukur

dibiarkan selama 1 hari untuk menghindari adanya inflamasi yang disebabkan oleh

pencukuran dan pemberian Veet®. Pembagian kelompok secara berturut-turut yaitu

kelompok 1: kontrol negatif (karagenin) yang diinjeksikan secara subkutan dan diukur

edema yang muncul dengan jangka sorong digital setiap 1 jam selama 6 jam, kelompok 2:

kontrol basis krim (Biocream®), dan kelompok 3,4, dan 5: kelompok krim EMDPc dengan

konsentrasi berturut-turut 2; 4; dan 8% 𝑏 𝑏⁄ yang dioleskan pada area suntikan karagenin

dengan luas area ± 2,25 cm2 kemudian diukur tebal lipatan kulit punggung mencit dengan

jangka sorong digital setiap 1 jam selama 6 jam untuk melihat penghambatan inflamasi.

Pengukuran tebal edema kulit punggung mencit dilakukan dengan mengukur ketebalan

edema kulit punggung mencit menggunakan jangka sorong digital.

Perhitungan AUC selisih tebal lipat kulit punggung mencit

Nilai selisih edema tiap jam diukur dan dihitung nilai AUC dengan rumus:

Keterangan :

AUC0-6 = area di bawah kurva dari jam ke-0 sampai jam ke-6

(cm2.jam)

yn-1 = luas area pigmentase pada jam ke-(n-1)(cm2)

yn = luas are pigmentase pada jam ke-n (cm2)

xn = jam ke-n (jam)

xn-1 = jam ke-(n-1) (jam)

(Ikawati, Supardjan, dan Asmara, 2007).

Menghitung presentase penghambatan inflamasi

𝐴𝑈𝐶0−6 = ∑ [(𝑦𝑛−1 + 𝑦𝑛)(𝑥𝑛 − 𝑥𝑛−1)

2]

6

0

𝑃𝑒𝑛𝑔ℎ𝑎𝑚𝑏𝑎𝑡𝑎𝑛 𝑖𝑛𝑓𝑙𝑎𝑚𝑎𝑠𝑖 (%) = (𝐴𝑈𝐶0−6)0 − (𝐴𝑈𝐶0−6)𝑛

(𝐴𝑈𝐶0−6)0


5

Keterangan :

(AUC0-6)0 = AUC0-6 rata-rata kontrol negatif (mm.jam)

(AUC0-6)n = AUC0-6 masing-masing mencit pada kelompok yang diberi

senyawa uji dengan konsentrasi sebesar n (mm.jam).

(Ikawati, Supardjan, dan Asmara, 2007)

Rata- rata AUC total masing-masing perlakuan kemudian dianalisis menggunakan

uji Shapiro-Wilk untuk melihat distribusi data. Jika data terdistribusi secara normal maka

dilanjutkan dengan analisis Anova dengan taraf kepercayaan 95%, jika data tidak

terdistribusi normal maka dilanjutkan dengan analisis Kruskall-Wallis. Apabila uji Kruskall-

Wallis menunjukkan paling tidak terdapat perbedaan antara dua kelompok, maka dilanjutkan

dengan analisi Post hoc Mann-Whitney (Dahlan, 2014).

HASIL DAN PEMBAHASAN

Sirih merah umumnya ditemukan di daerah tropis dan daunnya secara konvensional

digunakan oleh penduduk asli di sekitarnya sebagai pengobatan medis untuk mengatasi

beberapa penyakit seperti diabetes, inflamasi, dan penyembuhan luka (Maslikah, et al.,

2016). Dalam penelitian Fitriyani dkk (2011), EMDPc mengandung minyak atsiri, alkaloid,

terpenoid, dan flavanoid. Pada penelitian Hartini, et al., (2014) menyatakan bahwa EMDPc

mengandung dua senyawa neolignan yang termasuk golongan polifenol yang berfungsi

sebagai immunomodulator dan memiliki aktivitas fagositosis yang tinggi namun tidak

memproduksi NO yang berlebih, sehingga diduga bahwa senyawa tersebut memiliki

aktivitas antiinflamasi.

Ekstraksi menggunakan metode maserasi dengan mengunakan pelarut metanol

terhadap 100 g serbuk kering. Nilai rendemen ekstrak terhadap serbuk kering sebesar 11,51

% . Hasil uji kadar air dengan moisture balance adalah 8.5% (batas kadar air tidak boleh >

10%). Metode maserasi dipilih karena prosedurnya sederhana dan cocok untuk skala kecil

maupun besar. Proses remaserasi dilakukan guna mendapatkan sebanyak mungkin senyawa

yang terekstraksi. Menurut Sammuelsson (1999), bahwa pemilihan pelarut juga

mempengaruhi jenis dan jumlah senyawa yang terekstraksi karena pelarut akan berdifusi ke

dalam sel dan melarutkan moleku-molekul yang diinginkan. Proses ekstraksi dilakukan pada

suhu kamar supaya senyawa yang tidak tahan terhadap pemanasan tidak rusak.

Pengujian Efek Antiinflamasi Topikal Ekstrak Metanol Daun Piper crocatum

(EMDPc)

Metode yang digunakan untuk mengukur efek antiinflamasi adalah Inflammation-

assosiated edema (Vetriselvan, et al., 2013) menggunakan jangka sorong yang sudah


6

dikalibrasi terlebih dahulu. Pengukuran edema dilakukan dengan mengukur tebal lipat kulit

pada bagian middrosal (tengah punggung) hewan uji. Tebalnya edema dilakukan pada

penebalan lipatan kulit punggung hewan uji yang diukur menggunakan jangka sorong

(Widyarini., et al 2001). Prinsip dari metode ini adalah dengan mengukur tebal lipat kulit

punggung mencit yang meningkat dari tebal kulit punggung normal setiap 1 jam selama 6

jam setelah diinjeksikan karagenin menggunakan jangka sorong. Dari hasil uji pendahuluan,

konsentrasi karagenin yang digunakan untuk menginduksi inflamasi sebesar 3% karena pada

konsentrasi ini menunjukkan ketebalan lipat kulit yang mencapai lebih dari tiga kali lipat

kulit normal dan mampu mempertahankan edema selama 6 jam.

Hasil dari perhitungan rata-rata AUC total tebal lipat kulit dalam mm.jam (X ± SE)

tiap kelompok dianalisis secara statistik. Dari nilai rata-rata AUC total dilakukan uji Shapiro

Wilk untuk melihat data terdistribusi normal atau tidak, karena data terdistribusi normal

kemudian dilanjutkan dengan uji ANOVA untuk melihat perbedaan antar kelompok. Setelah

itu, dilanjutkan dengan uji Post Hoc Mann Whitney untuk mengetahui perbedaan masing-

masing kelompok berbeda bermakna (p < 0,05) atau tidak berbeda bermakna (p > 0,05).

Tabel I. Rata-rata AUC total tebal lipat kulit dalam mm.jam (X ± SE) pada setiap kelompok perlakuan

dengan hasil uji Mann Whitney

Kelompok Rata-rata AUC total tebal lipat kulit

Kontrol Negatif 26.18 ± 1.18

Kontrol Biocream® 29.41 ± 1.12

EMDPc 2% 18.11 ± 1.01*

EMDPc 4% 18.36 ± 0.66*

EMDPc 8% 16.63 ± 0.72*

Nilai yang disajikan merupakan mean ± SE (n=5); *p < 0,05 yang berarti berbeda bermakna dengan kontrol

negatif

Kontrol negatif (karagenin 3%)

Pada kelompok negatif karagenin 3% memiliki rata-rata AUC total 26.18 ± 1.18.

Bila dibandingkan dengan kelompok perlakuan EMDPc, hasilnya menunjukkan bahwa

kontrol negatif memiliki nilai rata-rata AUC total kedua setelah kontrol Biocream® dan

memiliki nilai persen penghambatan negatif yang menunjukkan bahwa kontrol negatif

menunjukkan terjadinya proses inflamasi dengan adanya injeksi karagenin 3% secara

subkutan.

Kontrol Biocream®

Kelompok kontrol Biocream® diujikan untuk melihat apakah Biocream® sebagai

basis EMDPc memiliki kemampuan untuk menghambat inflamasi yang ditimbulkan oleh


7

karagenin 3%. Nilai rata-rata AUC total yang didapatkan sebesar 29.41 ± 1.12 (tabel I),

hasilnya menunjukkan bahwa Biocream® tidak memiliki efek antiinflamasi pada mencit

yang sudah diinduksi karagenin. Hal ini dilihat dari nilai rata-rata AUC total yang besar serta

nilai persen penghambatan inflamasi yang negatif.

Kelompok perlakuan EMDPc 2%

Kelompok perlakuan EMDPc 2% memiliki nilai rata-rata AUC total 18.11 ± 1.01

yang memperlihatkan bahwa EMDPc 2% mampu memberikan efek antiinflamasi

dibandingkan dengan kontrol negatif dan kontrol Biocream®. Dari tabel I menunjukkan nilai

rata-rata AUC total EMDPc 4%terhadap kontrol negatif dan kontrol Biocream®

memberikan perbedaan bermakna, yang artinya bahwa EMDPc 2% memiliki kemampuan

antiinflamasi.





rata-rata AUC total EMDPc 4% terhadap kontrol negatif dan kontrol Biocream®


antiinflamasi.





rata-rata AUC total EMDPc 8% terhadap kontrol negatif dan kontrol Biocream®


antiinflamasi.

Perbandingan antar kelompok perlakuan EMDPc 2%, 4%, dan 8%

Pada uji Mann Whitney perbandingan nilai rata-rata AUC total EMDPc 2%, EMDPc

4% dan EMDPc 8% menunjukkan perbedaan tidak bermakna, yang artinya bahwa pada

kosentrasi 2%, 4%, maupun 8% memiliki kemampuan antiinflamasi yang sebanding. Dilihat

dari nilai persen penghambatan inflamasi berdasarkan pada tabel I, EMDPc 2% , EMDPc

4%, dan EMDPc 8% masing-masing memiliki nilai persen penghambatan berturut-turut

sebesar 30.79 ± 3.87; 29.83 ± 2.51; dan 36.45 ± 2.75 dari ketiga peringkat konsentrasi yang

memiliki efek antiinflamasi tertinggi terjadi pada konsentrasi 8% (Gambar 1). Menurut


8

0

5

10

15

20

25

30

35

40

2% 4% 8%

%P

EN

GH

AM

BA

TA

N I

NF

LA

MA

SI

Konsentrasi Ekstrak Metanol Daun Piper crocatum Tiap Kelompok

Carmona dan Pereira (2013), bahwa aktivitas biologis dari hasil kombinasi beberapa

senyawa yang terkandung dalam suatu ektrak bila dibandingkan dengan senyawa tunggal

hasil isolasi akan menghasilkan bioavailabilitas yang lebih kuat karena adanya efek sinergis

maupun aditif, sehingga diharapkan semakin tinggi konsentrasi yang diberikan maka akan

menghasilkan efek yang semakin besar pula. Namun pada penelitian ini, pada tiga tingkat

konsentrasi yang diberikan tidak memberikan efek yang linier dan justru memberikan efek

yang sebanding hal ini bisa terjadi dikarenakan pada tiga konsentrasi ini telah masuk dalam

kisaran dosis (konsentrasi) dari senyawa aktif yang memunculkan respon terapi tanpa efek

samping yang tidak dapat diterima atau yang sering disebut dengan therapeutic window

(Golan, et al., 2012). Sehingga perlu dilakukan penelitian lebih lanjut untuk mengetahui

sejauh mana konsentrasi yang diberikan untuk melihat batasan konsentrasi yang mempu

mempertahankan dosis efektif tanpa melebihi tingkat yang dapat menghasilkan toksisitas.

Gambar 1. Diagram batang perbandingan persen penghambatan inflamasi antar kelompok

perlakuan

Efek antiinflamasi EMDPc

EMDPc memiliki efek antiinflamasi dikarenakan adanya senyawa-senyawa

metabolit sekunder yang terkandung didalamnya diantaranya yaitu, flavonoid, terpenoid,

alkaloid, dan neoligan yang termasuk dalam golongan polifenol non flavanoid. Senyawa

neolignan tersebut dibuktikan melalui KLT dengan mengelusikan EMDPc bersama dengan

standar neolignan PC-1 dan PC-2 seperti yang tertera pada gambar 2. Flavonoid merupakan

senyawa golongan polifenol yang bertindak sebagai antioksidan yang kuat, memberikan

tingkat perlindungan yang tinggi terhadap oksidasi dan kerusakan radikal bebas, dan

aktivitas antiinflamasi (Houghton and Mukerjee, 2009). Siklooksigenase dan lipoksigenase

memainkan peran penting sebagai mediator inflamasi. Mereka terlibat dalam pelepasan asam


9

arakidonat, yang merupakan titik awal untuk respon inflamasi. Senyawa fenolik

menunjukkan mampu menghambat jalur siklooksigenase dan 5-lipoksigenase.

Penghambatan ini mengurangi pelepasan asam arakidonat. Flavonoid merupakan senyawa

golongan polifenol yang bertindak sebagai antioksidan yang kuat, memberikan tingkat

perlindungan yang tinggi terhadap oksidasi dan kerusakan radikal bebas, dan aktivitas

antiinflamasi (Houghton and Mukerjee, 2009). Siklooksigenase dan lipoksigenase

memainkan peran penting sebagai mediator inflamasi. Mereka terlibat dalam pelepasan asam

arakidonat, yang merupakan titik awal untuk respon inflamasi. Senyawa fenolik

menunjukkan mampu menghambat jalur siklooksigenase dan 5-lipoksigenase.

Penghambatan ini mengurangi pelepasan asam arakidonat. Selain itu, flavonoid juga

menghambat biosintesis prostaglandin yang terlibat dalam berbagai respon imun (Agrawal,

2011). Terpenoid juga berperan dalam aktivitas antiinflamasi dengan memodulator jalur NF-

KB. NF-KB berperan untuk mengendalikan sebagian besar proses seluler organisme normal

seperi respon imun dan respon inflamasi. Hal ini memungkinkan bahwa NF-KB bertindak

sebagai kelompok pertama yang merespon bila ada gangguan pada sel (Heras and Hortelano,

2009).

(a) (b) (c)

Gambar 2. Hasil KLT EMDPc dengan standar senyawa

neolignan Pc-1 dan Pc-2 menggunakan fase diam silika gel GF 254 dengan panjang elusi 10 cm (a) KLT

setelah dielusikan di fase gerak kloroform : etil asetat 9:1 (b) deteksi sinar UV 254nm (c) deteksi dengan

reagen serium IV sulfat

Pc 1 Pc 2 Ekstrak Pc 1 Pc 2 Ekstrak Pc 1 Pc 2 Ekstrak


10

Gambar 3. Proses terjadinya inflamasi

(Houghton and Mukerjee, 2009).

Selain itu, alkaloid juga berperan dalam penghambatan produksi NO serta menghambat

pelepasan PGE2 di jaringan yang mengalami inflamasi (Souto, et al., 2011). Seperti yang

terlihat pada gambar.1 pada hasil KLT bahwa EMDPc juga mengandung senyawa neolignan

Pc-1 dan Pc-2. Menurut Konishi, et al., (2005) bahwa senyawa neolignan mempunyai peran

menghambat produksi Nitric oxide (NO) merupakan radikal bebas yang dibentuk dari asam

amino L-arginin oleh Nitric Oxide Synthase (NOS). NO disintesis oleh inducible nitric oxide

synthase (iNOS). Peningkatan ekspresi iNOS mengindikasikan adanya inflamasi dari suatu

jaringan (Luqmana dkk, 2014).

Berbagai senyawa yang terkandung dalam EMDPc dimungkinkan sama-sama

memiliki peran sebagai antiinflamasi. Hal ini sering disebut dengan sinergi yang artinya

bekerja sama dilihat dari kombinasi perannya sehingga diharapkan kontribusi senyawa

dalam ekstrak menjadi lebih besar (Houghton and Mukherjee, 2009).

Penelitian ini merupakan penelitian skrining awal untuk menunjukkan bahwa ekstrak

metanol daun Piper crocatum memiliki efek antiinflamasi topikal. Penelitian ini tidak

menggunakan senyawa aktif tunggal namun beberapa senyawa aktif yang terkandung di

dalam ekstrak yang dapat mempengaruhi hasil penelitian. Oleh karena itu, perlu adanya

penelitian lebih lanjut untuk mengetahui senyawa aktif yang bertanggung jawab sebagai

antiinflamasi.


11

KESIMPULAN

Berdasarkan penelitian yang sudah dilakukan dapat disimpulkam bahwa ekstrak

metanol daun Piper crocatum memiliki efek antiinflamasi pada mencit yang diinduksi

karagenin. Pada konsentrasi 8% memberikan efek antiinflamasi tertinggi dengan nilai rata-

rata AUC total sebesar 16.63 ± 0.72 dan nilai persen penghambatan inflamasi sebesar 36.45

± 2.75 %.

DAFTAR PUSTAKA

Agrawal, A.D, 2011, Pharmacological Activities of Flavonoids, International Journal of

Pharmaceutical Sciences and Nanotechnology, Volume 4.

Alam, Badru., et al., 2012, Antioxidant, analgesic and anti-inflammatory activities of the

methanolic extract of Piper betle leaves, Avicenna Journal of Phytomedicine, Vol.

3, No. 2, 112-125.

Asmara, Anjas, Sjaiful Fahmi Daili, Tantien Noegrohowati, dan Ida Zubaedah, 2012,

Vehikulum Dalam Dermatoterapi Topikal, Departemen Ilmu Farmasi Kedokteran

FKUI/ RSCM, Vol.39. No.1. Tahun 2012: 25-35.

Carmona, Fabio and Ana Maria Soares Pereira, 2013, Herbal Medicines: Old And New

Concepts, Truths, And Misunderstandings, Revista Brasileira de Farmacognosia

Brazilian Journal of Pharmacognosy 23(2): 379-385.

Dahlan, M. S., 2014, Statistik untuk Kedokteran dan Kesehatan, Epidemiologi Indonesia,

Jakarta, 92-135.

Deharo, Eric, and Hagai Ginsburg, 2011, Analysis of Additivity And Synergism in The

Anti-Plasmodial Effect of Purified Compounds From Plant Extracts, Deharo and

Ginsburg Malaria Journal 2011, 10(Suppl 1):S5.

Fitriyani, Atik, Lina Winarti, Siti Muslichah dan Nuri, 2011, Uji Antiinflamasi Ekstrak

Metanol Daun Sirih Merah (Piper crocatum Ruiz & Pav ) Pada Tikus Putih, Majalah

Obat Tradisional, 16(1), 34 – 42.

Golan, David, et al., 2012, Principles of Pharmacology, Third Edition, Lippincot Williams

& Wilkins, Philadelphia, USA, 25 – 26.

Gutiérrez, Salud Pérez., et al, 2012, A New Anti-inflammatory Compound Isolated from

Krameria cytisoides, Molecules 2012, Universidad Autónoma Metropolitana-

Xochimilco Mexico, 2049-2057.

Haniastuti, Tetiana, 2009, Penurunan Aktivitas Fagositosis Sel Makrofag Mencit Setelah

Distimulasi Minyak Atsiri Kencur Terhadap Actinobacillus Actinomycetemcomitans,

dentika Dental Journal, Vol 14, No. 1, 2009: 11-14.


12

Hartini, Yustina Sri , Subagus Wahyuono, Sitarina Widyarini and Agustinus Yuswanto,

2013, Uji Aktivitas Fagositosis Makrofag Fraksi-fraksi dari Ekstrak Metanol Daun

Sirih Merah (Piper crocatum Ruiz & Pav.) Secara In Vitro, Jurnal Ilmu Kefarmasian

Indonesia, Vol. 11, No. 2hlm. 108-115.

Hartini, Yustina Sri , Subagus Wahyuono, Sitarina Widyarini and Agustinus Yuswanto,

2014, In vivo Immunomodulatory Effect and Histopathological Features of Mouse

Liver and Kidney Treated with Neolignans Isolated from Red Betel (Piper crocatum

Ruiz &Pav) Leaf, Tropical Journal of Pharmaceutical Research October 2014; 13

(10): 1609-1614.

Heras, B. de las and Sonsoles Hortelano, 2009, Molecular Basis of the Anti-Inflammatory

Effects of Terpenoids, Inflammation & Allergy - Drug Targets, Vol. 8, No. 1.

Houghton, Peter and Pulok K. Mukherjee, 2009, Evaluation of Herbal Medicinal Products,

Pharmaceutical Press, London, UK.

Ikawati, Z., Supardjan, A. M., Asmara, L. S., 2007, Pengaruh Senyawa Heksagamavunon-1

(HGV-1) Terhadap Inflamasi Akut Akibat Reaksi Anafilaksis Kutaneus Aktif pad

Tikus Wistar Jantan Terinduksi Ovalbumin, Laporan Penelitian, Fakultas Farmasi

Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta.

Konishi, Tenji, et al., 2005, Neolignans from Piper futokadsura and Their Inhibition of

Nitric Oxide Production, Pharmaceutical Society of Japan, Vol. 53, No. 1.

Kumar, Vinay, Abdul K. Abbas, dan Nelson Fausto, 2005, Robbins & Cotran Dasar

Patologis penyakit, Ed. 7, Penerbit buku kedokteran EGC, Jakarta. 49, 50.

Luqmana, Candra, dkk, 2014, Studi Ekspresi Inducible Nitric Oxide Synthase (Inos) Dan

Kadar Malondialdehid (Mda) Pada Ginjal Tikus (Rattus Norvegicus) Hasil Induksi

Streptokinase, Program Kedokteran Hewan, Universitas Brawijaya

Mitchell, Kumar, Abbas, dan Fausto, 2006, Buku Saku Dasar Patologis Penyakit, Penerbit

Buku Kedokteran EGC, Jakarta, 29.

Samuelsson G. Drugs of natural origin. 4th Ed. Sweden: Swedish Pharmaceutical Press;

1999.

Souto, Augusto Lopes, et al., 2011, Anti-Inflammatory Activity of Alkaloids: An Update

from 2000 to 2010, Molecules, 16, 8515-8534

Vetriselvan S, et al., 2013, Anti-Inflammatory Activity Of Cucumis Sativus Seed In

Carrageenan And Xylene Induced Edema Model Using Albino Wistar Rats,

International Journal of Biopharmaceutics. 2013; 4(1): 34-37.

Widyarini, S., Spinks, N., Husband, A.J., and Reeve, V.E., 2001, Isoflavonoid Compound

from Red Clover (Trifolium pretense) Protect from Inflammation and Immune

Suppression Induced by UV Radiation, Photochemistry and Photobiology, 74(3),

465-470.


13

LAMPIRAN

Lampiran 1. Surat Determinasi Piper crocatum Ruiz & Pav.


14

Lampiran 2. Surat Ethical Clearance


15

Lampiran 3. Surat Kalibrasi Jangka Sorong


16

Lampiran 4. Surat legalitas penggunaan aplikasi SPSS untuk pengujian data

secara statistik


17

Lampiran 5. Daun Piper crocatum dan Ekstrak Metanol Piper crocatum

Gambar 4. Daun dan serbuk Piper crocatum

Gambar 5. Shaker dan Penyaringan maserat

Gambar 6. Rotary evaporator dan Ekstrak metanol Piper crocatum


18

Lampiran 6. Penyukuran, Penyuntikan dan Pengukuran Tebal Kulit Mencit

Betina Galur Swiss

Gambar 7. Pemotongan dan penyukuran bulu mencit menggunakan Veet®

Gambar 8. Penyuntikan karagenin secara subkutan dan edema yang terbentuk di

kulit punggung mencit

Gambar 9. Pengukuran tebal kulit normal dan tebal edema pada punggung

mencit menggunakan jangka sorong digital


19

Lampiran 7. Krim Ekstrak Metanol Daun Piper crocatum, Uji Homogenitas,

dan Pengolesan Krim Ekstrak Pada Punggung Mencit

Gambar 10. Krim ekstrak metanol daun Piper crocatum konsentrasi 2%, 4%, dan

8%

Gambar 11. Uji homogenitas krim ekstrak metanol daun Piper crocatum

konsentrasi 2%, 4%, dan 8%

Gambar 12. Pengolesan krim ekstrak metanol daun Piper crocatum pada kulit

punggung mencit


20

Lampiran 8. Uji Kadar Air Dengan Moisture Balance

Gambar 13. Alat moisture balance

Pengujian kadar air pada serbuk dilakukan terlebih dahulu sebelum di

ekstraksi. Kadar air pada serbuk diuji dengan alat moisture balance. Prinsip dari

alat tersebut adalah thermogravimetri, yaitu pengeringan sampel dengan cara

pemanasan hingga diperoleh bobot sampel yang konstan. Tujuan penetapan kadar

air adalah untuk memastikan serbuk simplisia yang digunakan memenuhi

persyaratan simplisia yang baik sehingga mengurangi resiko kontaminasi jamur dan

kapang. Menurut farmakope herbal, kadar air yang terkandung dalam serbuk

simplisia < 10%.


21

Lampiran 9. Uji Pendahuluan

Sebelum dilakukan uji efek antiinflamasi ekstrak metanol daun Piper

crocatum, dilakukan uji pendahuluan terlebih dahulu. Tujuan uji pendahuluan

adalah untuk orientasi konsentrasi optimal yang dapat digunakan dalam penelitian

ini.

Gambar 14. Kurva pengukuran edema setiap 1 jam hingga 6 jam dari 3

konsentrasi karagenin secara subkutan

Pada gambar 9 dapat dilihat bahwa pada karagenin konsentrasi 3% menunjukkan

ketebalan lipat kulit yang mencapai lebih dari tiga kali lipat dari tebal lipat kulit

normal yaitu dari 1,09 mm menjadi 4,48 mm pada jam ke-3 dan mampu

mempertahankan ketebalannya hingga jam ke-6. Walaupun pada konsentrasi 2%

juga menunjukkan ketebalan lipat kulit mencapai lebih dari tiga kali lipat namun

bila dibandingkan dengan konsentrasi 3% maka lebih optimal yang konsentrasi 3%

karena pada konsentrasi tersebut lebih mampu mempertahankan udema sampai jam

ke-6.

0

0.5

1

1.5

2

2.5

3

3.5

4

4.5

5

0 1 2 3 4 5 6 7

Ket

eba

lan

Ku

lit

Men

cit

(mm

)

Jam ke-

Kons 1%

Kons 2%

Kons 3%


22

Lampiran 10. Data perhitungan AUC tebal lipat kulit punggung mencit

Keterangan :

AUC0-6 = area di bawah kurva dari jam ke-0 sampai jam ke-6

(cm2.jam)

yn-1 = luas area pigmentase pada jam ke-(n-1)(cm2)

yn = luas are pigmentase pada jam ke-n (cm2)

xn = jam ke-n (jam)

xn-1 = jam ke-(n-1) (jam)

Contoh perhitungan :

AUC pada jam ke-1

y1 (luas area pigemtasi pada jam ke-1) = 3,81 mm

yn-1 (luas area pigmentasi pada jam ke-0 (1-1) = 0,96 mm

𝐴𝑈𝐶1 = ∑ [(3,81𝑚𝑚+0,96𝑚𝑚)(1−0)

2]10 =2,39mm.jam

a. Hasil Edema Kontrol Negatif (Karagenin 3%)

Jam/Mencit 1 2 3 4 5

0 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00

1 2.39 2.25 2.91 2.77 2.82

2 3.95 3.94 5.01 4.91 5.00

3 4.25 4.33 5.21 5.28 5.27

4 4.36 4.47 5.25 5.32 5.24

5 4.16 4.40 5.06 5.17 4.88

6 3.97 4.18 4.90 4.92 4.37

AUC total 23.07 23.57 28.32 28.36 27.56

b. Hasil Edema Kontrol Biocream

Jam/Mencit 1 2 3 4 5

0 0 0 0 0 0

1 3.25 2.365 3.065 2.5 2.74

2 5.89 4.775 5.82 4.73 5.05

3 6.455 5.635 6.35 5.5 5.58

4 6.08 5.16 6.095 5.49 5.585

5 5.4 4.285 5.505 5.03 5.21

6 4.815 3.93 5.035 4.73 5

𝐴𝑈𝐶0−6 = ∑ [(𝑦𝑛−1 + 𝑦𝑛)(𝑥𝑛 − 𝑥𝑛−1)

2]

6

0


23

AUC total 31.89 26.15 31.87 27.98 29.165

c. Hasil edema EMDPc 2%

Jam/mencit 1 2 3 4 5

0 0 0 0 0 0

1 2.545 2.58 2.79 2.11 2.63

2 3.83 4.05 4.19 3.115 4.065

3 3.385 3.465 3.77 2.75 3.615

4 3.035 2.985 3.49 2.39 3.255

5 2.86 2.665 3.235 2.12 3.005

6 2.54 2.39 2.98 1.955 2.765

AUC total 18.195 18.135 20.455 14.44 19.335

d. Hasil edema EMDPc 4%


0 0 0 0 0 0

1 2.79 2.71 2.55 2.43 2.615

2 4.52 4.325 4.195 3.925 3.765

3 4.2 3.78 3.535 3.505 3.01

4 3.52 3.37 2.815 3.17 2.625

5 2.75 3.075 2.355 2.885 2.385

6 2.29 2.31 1.885 2.345 2.18

AUC total 20.07 19.57 17.335 18.26 16.58

e. Hasil edema EMDPc 8%


0 0 0 0 0 0

1 2.67 2.375 2.69 2.56 2.66

2 4.04 3.4 4.24 3.975 4.28

3 3.435 2.67 3.69 3.235 3.77

4 3.04 2.345 3.135 2.58 3.175

5 2.39 2.04 2.325 1.8 2.49

6 1.69 1.785 1.65 1.105 1.92

AUC total 17.265 14.615 17.73 15.255 18.295


24

Lampiran 11. Data perhitungan persen penghambatan inflamasi (%PI)

Menghitung presentase penghambatan inflamasi

Keterangan :

(AUC0-6)0 = AUC0-6 rata-rata kontrol negatif (mm.jam)

(AUC0-6)n = AUC0-6 masing-masing mencit pada kelompok yang diberi

senyawa uji dengan konsentrasi sebesar n (mm.jam).

Contoh perhitungan:

Diketahui:

(AUC0-6)0 AUC total rata-rata dari jam ke-0 sampai jam ke-6 = 26,17

(AUC0-6)n AUC total dari jam ke-0 sampai jam ke-6 tiap menit = 18,20

𝑃𝐼(%) = 26,17 𝑚𝑚. 𝑗𝑎𝑚 − 18.20 𝑚𝑚. 𝑗𝑎𝑚

26.17 𝑚𝑚. 𝑗𝑎𝑚× 100 = 30, 45%

a. Kontrol Negatif

Mencit AUC K.NEG NILAI AUC %PI

1 26.17 23.07 11.84562

2 26.17 23.57 9.93504

3 26.17 28.32 -8.21551

4 26.17 28.36 -8.36836

5 26.17 27.56 -5.31143

b. Kontrol Biocream


1 26.17 31.89 -21.8571

2 26.17 26.15 0.076423

3 26.17 31.87 -21.7807

4 26.17 27.98 -6.91632

5 26.17 29.165 -11.4444

𝑃𝑒𝑛𝑔ℎ𝑎𝑚𝑏𝑎𝑡𝑎𝑛 𝑖𝑛𝑓𝑙𝑎𝑚𝑎𝑠𝑖 (%) = (𝐴𝑈𝐶0−6)0 − (𝐴𝑈𝐶0−6)𝑛

(𝐴𝑈𝐶0−6)0


25

c. Kelompok Perlakuan EMDPc 2%


1 26.17 18.195 30.47382

2 26.17 18.135 30.7031

3 26.17 20.455 21.83798

4 26.17 14.44 44.82232

5 26.17 19.335 26.11769

d. Kelompok Pelakuan EMDPc 4%


1 26.17 20.07 23.30913

2 26.17 19.57 25.21972

3 26.17 17.335 33.76003

4 26.17 18.26 30.22545

5 26.17 16.58 36.64501

e. Kelompok Pelakuan EMDPc 8%


1 26.17 17.265 34.02751

2 26.17 14.615 44.15361

3 26.17 17.73 32.25067

4 26.17 15.255 41.70806

5 26.17 18.295 30.09171


26

0

1

2

3

4

5

6

0 1 2 3 4 5 6 7

Rat

a-ra

ta S

elis

ih T

ebal

Kuli

t (m

m)

Jam ke-

KN

KB

EMDPC 2%

EMDPc 4%

EMDPc 8%

Lampiran 12. Kurva Rata-rata Selisih Tebal Kulit Punggung Mencit

Gambar 15. Kurva Rata-rata Selisih Tebal Kulit Punggung Mencit

Pada tiap kelompok kontrol dan perlakuan diinjeksikan 3% karagenin secara

subkutan setelah pengukuran tebal kulit normal punggung mencit dan dibiarkan

selama 1 jam kemudian dilakukan pengukuran kembali 1 jam setelah pemberian

karagenin supaya karagenin dapat meresap dengan maksimal pada bagian

punggung mencit sehingga cairan pembentukan edema dapat terakumulasi dengan

optimal. Injeksi karagenin akan menyebabkan terbentuknya edema dan inflamasi

secara cepat, yaitu mencapai maksimal 3-5 jam setelah pemberian karagenin.

Gambar 10 memperlihatkan bahwa semua kelompok perlakuan terjadi penebalan

lipat kulit pada jam ke-1 setelah injeksi karagenin 3% secara subkutan. Menurut

Necas (2013) mekanisme pembentukan edema oleh karagenin terjadi secara dua

tahap. Tahap pertama terjadi pelepasan histamin dan serotonin yang dimulai segera

setelah diinduksi dan berkurang setelah dua jam. Tahap kedua terjadi pelepasan

bradikinin dan prostaglandin yang dimulai pada akhir tahap pertama dan bertahan

pada jam ketiga sampai jam kelima. Pada gambar 10 terlihat bahwa pada kontrol

negatif dan Biocream® terjadi peningkatan edema yang besar sampai jam ke-3 dan

pada jam ke-6 belum kembali ke tebal lipat kulit normalnya. Pada kelompok

perlakuan EMDPc konsentrasi 8% menunjukkan selisih tebal kulit yang paling

kecil dibandingkan kelompok perlakuan lainnya.

Keterangan :

KN : Kontrol Negatif

KB : Kontrol Biocream

EMDPc : Ekstrak Metanol Daun Piper crocatum


27

Lampiran 13. Hasil analisis statistik AUC total rata-rata

a. Uji normalitas

Case Processing Summary

Kelompok

Cases

Valid Missing Total

N Percent N Percent N Percent

AUC Kontrol Negatif 5 100,0% 0 0,0% 5 100,0%

Kontrol Biocream 5 100,0% 0 0,0% 5 100,0%

EMDPc 2% 5 100,0% 0 0,0% 5 100,0%

EMDPc 4% 5 100,0% 0 0,0% 5 100,0%

EMDPc 8% 5 100,0% 0 0,0% 5 100,0%

Tests of Normality

Kelompok

Kolmogorov-Smirnova Shapiro-Wilk

Statistic df Sig. Statistic df Sig.

AUC Kontrol Negatif ,300 5 ,159 ,784 5 ,060

Kontrol Biocream ,238 5 ,200* ,906 5 ,446

EMDPc 2% ,304 5 ,147 ,898 5 ,397

EMDPc 4% ,195 5 ,200* ,949 5 ,727

EMDPc 8% ,253 5 ,200* ,896 5 ,388

*. This is a lower bound of the true significance.

Sig./p > 0,05 distribusi normal


28

b. Nilai Standar error (SE) dan mean AUC total tiap perlakuan

Descriptives

Kelompok Statistic Std. Error

AUC Kontrol Negatif Mean 26,1760 1,17730

95% Confidence Interval for

Mean

Lower Bound 22,9073

Upper Bound 29,4447

5% Trimmed Mean 26,2272

Median 27,5600

Variance 6,930

Std. Deviation 2,63251

Minimum 23,07

Maximum 28,36

Range 5,29

Interquartile Range 5,02

Skewness -,565 ,913

Kurtosis -3,140 2,000

Kontrol Biocream Mean 29,4110 1,11657


Mean

Lower Bound 26,3109

Upper Bound 32,5111


Median 29,1650

Variance 6,234


Minimum 26,15


29

Maximum 31,89

Range 5,74


Skewness -,201 ,913

Kurtosis -1,836 2,000

EMDPc 2% Mean 18,1120 1,01184


Mean

Lower Bound 15,3027

Upper Bound 20,9213


Median 18,1950

Variance 5,119


Minimum 14,44

Maximum 20,46

Range 6,01


Skewness -1,253 ,913

Kurtosis 2,217 2,000

EMDPc 4% Mean 18,3630 ,65640


Mean

Lower Bound 16,5405

Upper Bound 20,1855


Median 18,2600

Variance 2,154


30


Minimum 16,58

Maximum 20,07

Range 3,49


Skewness -,003 ,913

Kurtosis -2,119 2,000

EMDPc 8% Mean 16,6320 ,71890


Mean

Lower Bound 14,6360

Upper Bound 18,6280


Median 17,2650

Variance 2,584


Minimum 14,62

Maximum 18,30

Range 3,68


Skewness -,465 ,913

Kurtosis -2,495 2,000


31

Test of Homogeneity of Variances

AUC

Levene Statistic df1 df2 Sig.

1,095 4 20 ,386

ANOVA

AUC

Sum of Squares df Mean Square F Sig.

Between Groups 645,903 4 161,476 35,071 ,000

Within Groups 92,085 20 4,604

Total 737,987 24


32

Post Hoc Tests

Multiple Comparisons

Dependent Variable: AUC

Scheffe

(I) Kelompok (J) Kelompok

Mean Difference

(I-J) Std. Error Sig.

95%

Confidence

Interval

Lower Bound

Kontrol Negatif Kontrol Biocream -3,23500 1,35709 ,264 -7,8300

EMDPc 2% 8,06400* 1,35709 ,000 3,4690

EMDPc 4% 7,81300* 1,35709 ,000 3,2180

EMDPc 8% 9,54400* 1,35709 ,000 4,9490

Kontrol Biocream Kontrol Negatif 3,23500 1,35709 ,264 -1,3600

EMDPc 2% 11,29900* 1,35709 ,000 6,7040

EMDPc 4% 11,04800* 1,35709 ,000 6,4530

EMDPc 8% 12,77900* 1,35709 ,000 8,1840

EMDPc 2% Kontrol Negatif -8,06400* 1,35709 ,000 -12,6590

Kontrol Biocream -11,29900* 1,35709 ,000 -15,8940

EMDPc 4% -,25100 1,35709 1,000 -4,8460

EMDPc 8% 1,48000 1,35709 ,876 -3,1150



EMDPc 2% ,25100 1,35709 1,000 -4,3440

EMDPc 8% 1,73100 1,35709 ,802 -2,8640




33

EMDPc 2% -1,48000 1,35709 ,876 -6,0750

EMDPc 4% -1,73100 1,35709 ,802 -6,3260

Multiple Comparisons

Dependent Variable: AUC

Scheffe

(I) Kelompok (J) Kelompok

95% Confidence Interval

Upper Bound

Kontrol Negatif Kontrol Biocream 1,3600

EMDPc 2% 12,6590

EMDPc 4% 12,4080

EMDPc 8% 14,1390

Kontrol Biocream Kontrol Negatif 7,8300

EMDPc 2% 15,8940

EMDPc 4% 15,6430

EMDPc 8% 17,3740

EMDPc 2% Kontrol Negatif -3,4690

Kontrol Biocream -6,7040

EMDPc 4% 4,3440

EMDPc 8% 6,0750



EMDPc 2% 4,8460

EMDPc 8% 6,3260



34


EMDPc 2% 3,1150

EMDPc 4% 2,8640

*. The mean difference is significant at the 0.05 level.

Homogeneous Subsets

AUC

Scheffea

Kelompok N

Subset for alpha = 0.05

1 2

EMDPc 8% 5 16,6320

EMDPc 2% 5 18,1120

EMDPc 4% 5 18,3630

Kontrol Negatif 5 26,1760

Kontrol Biocream 5 29,4110

Sig. ,802 ,264

Means for groups in homogeneous subsets are displayed.

a. Uses Harmonic Mean Sample Size = 5.000.


35


36

Lampiran 14. Hasil analisis statistik % Penghambatan Inflamasi

Case Processing Summary

Kelompok

Cases

Valid Missing Total

N Percent N Percent N Percent

PI Kontrol Negatif 5 100,0% 0 0,0% 5 100,0%

Kontrol Biocream 5 100,0% 0 0,0% 5 100,0%

EMDPc 2% 5 100,0% 0 0,0% 5 100,0%

EMDPc 4% 5 100,0% 0 0,0% 5 100,0%

EMDPc 8% 5 100,0% 0 0,0% 5 100,0%

Descriptives

Kelompok Statistic Std. Error

PI Kontrol Negatif Mean -,0229 4,49865


Mean

Lower Bound -12,5132

Upper Bound 12,4673

5% Trimmed Mean -,2187

Median -5,3114

Variance 101,189


Minimum -8,37

Maximum 11,85

Range 20,21



37

Skewness ,565 ,913

Kurtosis -3,140 2,000

Kontrol Biocream Mean -12,3844 4,26660


Mean

Lower Bound -24,2304

Upper Bound -,5384

5% Trimmed Mean -12,5504

Median -11,4444

Variance 91,020


Minimum -21,86

Maximum ,08

Range 21,93


Skewness ,201 ,913

Kurtosis -1,836 2,000

EMDPc 2% Mean 30,7910 3,86641


Mean

Lower Bound 20,0561

Upper Bound 41,5259


Median 30,4738

Variance 74,746


Minimum 21,84

Maximum 44,82


38

Range 22,98


Skewness 1,253 ,913

Kurtosis 2,217 2,000

EMDPc 4% Mean 29,8319 2,50821


Mean

Lower Bound 22,8680

Upper Bound 36,7958


Median 30,2255

Variance 31,456


Minimum 23,31

Maximum 36,65

Range 13,34


Skewness ,003 ,913

Kurtosis -2,119 2,000

EMDPc 8% Mean 36,4463 2,74703


Mean

Lower Bound 28,8193

Upper Bound 44,0733


Median 34,0275

Variance 37,731



39

Minimum 30,09

Maximum 44,15

Range 14,06


Skewness ,465 ,913

Kurtosis -2,495 2,000

Tests of Normality

Kelompok

Kolmogorov-Smirnova Shapiro-Wilk

Statistic df Sig. Statistic df Sig.

PI Kontrol Negatif ,300 5 ,159 ,784 5 ,060

Kontrol Biocream ,238 5 ,200* ,906 5 ,446

EMDPc 2% ,304 5 ,147 ,898 5 ,397

EMDPc 4% ,195 5 ,200* ,949 5 ,727

EMDPc 8% ,253 5 ,200* ,896 5 ,388

*. This is a lower bound of the true significance.

a. Lilliefors Significance Correction


40


41

BIOGRAFI PENULIS

Penulis skripsi dengan judul “Uji Aktivitas

Antiinflamasi Topikal Ekstrak Metanol Daun Sirih Merah

(Piper Crocatum Ruiz & Pav.) Pada Mencit Diinduksi

Karagenin” memiliki nama lengkap Rafaella Daramika

Dwi Esti, merupakan anak kedua dari dua bersaudara

pasangan Andreas Sudarto dan T.A Amrih Bekti Rahayu.

Penulis dilahirkan di Kabupaten Semarang, 21 September

1995.

Pendidikan formal yang telah ditempuh, yaitu TK

Kanisius Kurmosari Semarang (1999-2001), kemudian

melanjutkan pendidikan tingkat Sekolah Dasar di SD

Kanisius Kurmosari Semarang (2001-2007). Pendidikan Sekolah Menengah

Pertama ditempuh oleh penulis di SMP PL Domenico Savio Semarang, kemudian

melanjutkan pendidikan Sekolah Menengah Atas di SMA Kolese Loyola

Semarang. Penulis kemudian melanjutkan pendidikan sarjana di Fakultas Farmasi,

Universitas Sanata Dharma Yogyakarta pada tahun 2013. Semasa kuliah, penulis

cukup aktif dalam berbagai kegiatan kepanitiaan di dalam fakultas. Penulis pernah

menjadi sie acara “SEMNAS JMKI 2014”, koordinator sie acara “Pelepasan

Wisuda II tahun 2014”, sie dekorasi dan dokumentasi “TITRASI 2015”, sie

dekorasi dan dokumentasi “Lomba Cerdas Cermat Kimia 2015” dan koordinator

divisi Medfar Badan Eksekutif Mahasiswa Fakultas Farmasi 2014/2015.


uji aktivitas antiinflamasi topikal ekstrak metanol … · 2017. 1. 16. · uji aktivitas...

Documents