UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE MÉXICO FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES ZARAGOZA

FISIOLOGÍA DE LEVADURAS

INTEGRANTES:CAMACHO GONZÁLEZ MARIO ALBERTO

GÓMEZ LARIOS LORENA PAZ GARCES IVONNE

MENDOZA ESPINOSA ADRIAN

EQUIPO: 1

GRUPO: 2752

LEVADURAS Resistentes a actidiona y

ciclohexidina. Inactivadas entre 7 y 20

MPa. Aerobios. Algunas levaduras forman

hifas verdaderas Presentan sistemas

enzimáticos pH óptimo de 4.5 a 6.5 Temperatura óptima de

35-37°C

En medios sólidos crecen dando lugar a colonias compactas y visibles a las 24 – 48 hrs. de incubación.

Unicelulares. Redondos u ovalados, con

un diámetro de entre 3 y 30 μm

Algunos presentan dimorfismo

Crecen en concentraciones de azúcar.

Reproducción sexual y asexual.

Unidad funcional

Célula aislada

Tamaño 2 a 10 um (diámetro)

FormaOvoideas, esféricas o rectangulares.

Puede formarse una pseudohifa.

Estructuras

Puede presentar una cápsula de poslisacáridos.

Forma una pared celular de polisacáridos, lípidos y quitina.

ReproducciónAsexual: gemación, tabicamiento o una

combinación de ambos.Sexual: células haploides que se unen.

ColoniasPastosas, cremosas,  3 mm (d).

Se requieren pruebas bioquímcas para poder diferencias las levaduras.

P, paredcelular; Vac, vacuola; CG, cicatriz de una gemación; M,mitocondria; CL, cuerpo lipídico; AGaparato de Golgi; RE,retículo endoplasmático; V, vesícula; CHP, corpúsculo huso-polar; N, núcleo

ESQUEMA DE UNA LEVADURA EN PROCESO DE GEMACIÓN.

Candida albicans Es un microorganismo unicelular, de

forma elipsoidal, ovoide u ovalada de 3 a 5 µ de diámetro: se reproduce asexualmente por gemación multipolar (blastoconidios) y en ciertas condiciones produce pseudomicelios.

Candida albicans

Candida krusei

Candida tropicalis

Cryptococcus sp

Rhodotorula

Rhodotorula rubra

Trichosporon

Saccharomyces cerevisiae

Tomada de:Lim, D. 1998. Microbiology. Mc Graw-Hill. Estados Unidos

Pruebas de identificación

AGAR ALPISTE

Es utilizada para aislar Cryptococcus spp y Cryptococcus neoformans, C neoformans es el unico que al metabolizar la Guizotia abyssinica(alpiste) produce melanina originando un color marrón oscuro

El agar glucosado de Sabouraud (SDA)El agar glucosado de Sabouraud (SDA)

Es el medio de aislamiento por excelencia para laEs el medio de aislamiento por excelencia para laidentificación de levaduras.identificación de levaduras.

En ocasiones puede aparecer prolongaciones aracneiformes en la periferia de las colonias. Si se observa un micelio aéreo definido debe considerarse la posibilidad de que se trate de un hongo dimórfico.

Una colonia de aspecto y consistencia mucoide sugiere la formación de capsulas

Las colonias de color rojo-anaranjado o naranja, de aspecto cremoso o rugoso, son características de las especies del género Rhodotorula (del gr. rhodo, rojo), color que manifiestaesta levadura por su riqueza en carotenoides.

Pero no todas las colonias blancas y cremosas son levaduras; las especies de algas aclorofílicas del género Prototheca, tras incubación a 28 °C durante 3-4 días, desarrollan unas colonias blancas cremosas muy parecidas a las producidas por el género Candida

PRODUCCIÓN DE CLAMIDIOESPORAS PRODUCCIÓN DE CLAMIDIOESPORAS (MORFOLOGIA EN AGAR HARINA DE MAÍZ)(MORFOLOGIA EN AGAR HARINA DE MAÍZ)

Ayuda a determinar si la levadura produce blastoconidios, artroconidios, seudohifas o clamidioesporas.

Las clamidioesporas en este medio es característico de C. albicans.

Plato de agar harina de maíz para C. Plato de agar harina de maíz para C. albicans albicans

Con resiembra de los cultivos en agar harina

de maíz, en 24 a 48 h se observan producción

clamidiosporas características de

distribución intercalar o terminal.

Clamidioesporas de C. albicansClamidioesporas de C. albicansFundamento: se la agrega polisorbato para reducir la Fundamento: se la agrega polisorbato para reducir la

tensión superficial a fin de permitir el desarrollo de tensión superficial a fin de permitir el desarrollo de clamidioesporas clamidioesporas

Prueba del tubo germinativoPrueba del tubo germinativo

Está prueba es el método más aceptado y económico en el laboratorio clínico para identificación de levaduras.

Ya que determina la formación de seudohifas o tubo germinativo en Candida albicans.

El tubo germinativo parecen extensiones de las células levaduriformes similares a hifas.

Producidos por lo general sin un estrechamiento en el punto origen de la célula.

TUBOS GERMINALES (TUBOS GERMINALES (C. albicans)C. albicans)Fundamento: Las cepas c. albicans forman tubos Fundamento: Las cepas c. albicans forman tubos

germinales en medios nutritivos.germinales en medios nutritivos.

AGAR BIGGYAGAR BIGGYFórmula:Fórmula:Glucosa Glucosa 10g 10g Extracto de levadura Extracto de levadura 1g1gGlicina Glicina 10g10gCitrato de bismuto amónico Citrato de bismuto amónico 5g5gSulfito de sodio Sulfito de sodio 3g3gCloranfenicol Cloranfenicol 5g 5g Agar Agar 20g20gAgua destilada Agua destilada 1000mL1000mL

pH 6.8 ± 0.2pH 6.8 ± 0.2

USOSUSOS

Fue descrito por Nickerson y se basa Fue descrito por Nickerson y se basa en la propiedad de algunas levaduras en la propiedad de algunas levaduras para reducir las sales inorgánicas.para reducir las sales inorgánicas.

Con este medio se forma sulfuro de Con este medio se forma sulfuro de bismuto y las colonias de bismuto y las colonias de CandidaCandida adoptan una coloración que varía de adoptan una coloración que varía de marrón a negro.marrón a negro.

CHROMagar CandidaCHROMagar Candida

Fórmula: Fórmula: Cromopeptona Cromopeptona 10g 10g Glucosa Glucosa 20g 20gMezcla cromógena Mezcla cromógena 2g 2g Cloranfenicol Cloranfenicol 0,5g 0,5g

Agar Agar 15g 15g Agua purificada 1000mLAgua purificada 1000mL

pH 6,0 ± 0,3pH 6,0 ± 0,3

USOSUSOS Se trata de un medio selectivo Se trata de un medio selectivo

empleado para el aislamiento e empleado para el aislamiento e identificación de las levaduras.identificación de las levaduras.

Sobre una base de peptona y glucosa Sobre una base de peptona y glucosa incorpora cloranfenicol y una mezcla incorpora cloranfenicol y una mezcla de sustratos cromogénicos que lo de sustratos cromogénicos que lo convierten en un medio selectivo y convierten en un medio selectivo y diferencial, que permite la diferencial, que permite la identificación de las diferentes identificación de las diferentes especies de Candidas.especies de Candidas.

Asimilación y fermentación de carbohidratos

Asimilación: valoran la capacidad de la levadura para metabolizar en condiciones aerobias, azúcares,

alcoholes y ácidos orgánicos. (Auxonograma)

Fermentación: estas pruebas demuestran la capacidad de la

levadura, para utilizar determinados carbohidratos, en condiciones

anaerobias. (Zimograma

A) cada cepa de levadura se suspende en solución salina estéril.

Auxonograma

B) se introduce en cada tubo un hisopo estéril y se siembra masivamente cada levadura en su respectiva caja.

C) se humedecen los discos de papel filtro, con c/u de las soluciones de los carbohidratos, se deja secar el exceso y se colocan los discos en la caja petri ya sembrada.

D) Se incuba a 37ºC por 28 a 48 horas.

E) se reporta el crecimiento de cada levadura alrededor de c/u de los discos.

F) Se interpreta de la siguiente forma

1.- Un crecimiento indica que

hubo asimilación de

ese carbohidrato por parte del

hongo.

2.-Un halo de inhibición

alrededor del disco indica que

no hubo asimilación de

azúcar por parte del hongo

A) Se inocula cada cepa de levadura en cada tubo que contiene el carbohidrato más púrpura de bromocresol.

Zimograma

B) Se incuba a 37º C por 24 a 48 horas, se leen y se reportan los carbohidratos.

C) Se interpreta como cualquier cambio o gas detectado, indica fermentación del carbohidrato

Púrpura de bromocresol (indicador de pH)

pH abaixo de 5.2

pH acima

de 6.8

amarelo

⇌viole

ta

SISTEMAS COMERCIALES PARA LA IDENTIFICACION DE LEVADURAS

SISTEMA API-20

Sistema. uni-yeast-tek

Estos sistemas se basan en la asimilación de carbohidratos

Son pruebas muy eficientes. Pruebas costosas

Sistema Uni-Yeast-Tek® (Remel):está constituidopor una placa plástica con múltiples compartimentosque contienen un medio con agar para laasimilación diferencial de siete hidratos de carbono.También incorpora una cubeta central con agar harina

demaíz-Tween 80 para determinar el crecimiento

micelial y laproducción de clamidosporas. Además, está provisto

deagar urea, agar para la asimilación y reducción de

nitratosy de un caldo con extracto de carne al 2,6% (con

0,05% deglucosa) para realizar la prueba del tubo germinal.

Sistema Uni-Yeast-Tek (Remel).

API 20C AUX® (bioMérieux):La galería API 20 C AUX (bioMérieux) se compone de 20 cúpulas con sustratos deshidratados que permiten realizar 19 pruebas de asimilación. Las cúpulas se inoculan con un medio mínimo semisólido y las levaduras sólo se reproducen si son capaces de utilizar el

sustrato correspondiente La lectura de la prueba genera un código

numérico que facilita la identificación de 34, especies de levaduras distintas

Dos tubos 13 X 100 con caldo maltosado más PBC Dos tubos 13 X 100 con caldo maltosado más PBC con campana de Durhamcon campana de Durham

Dos tubos 13 X 100 con caldo sacarosa más PBC Dos tubos 13 X 100 con caldo sacarosa más PBC con campana de Durhamcon campana de Durham

Dos tubos 13 X 100 con caldo trealosa más PBC Dos tubos 13 X 100 con caldo trealosa más PBC con campana de Durhamcon campana de Durham

Dos tubos 13 X 100 con caldo lactosa más PBC con Dos tubos 13 X 100 con caldo lactosa más PBC con campana de Durhamcampana de Durham

TUBO GERMINATIVOTUBO GERMINATIVO

PRODUCCION DE CLAMIDIOESPORAS

AUXONOGRAMAAUXONOGRAMA

ZIMOGRAMAZIMOGRAMA

BIBLIOGRAFÍA

Prats, Guillem. Microbiología clínica. Editorial Medica Panamericana. España, 2006.

Elmer W. Koneman: Diagnostico Microbiologico texto y atlas color. 5ª edicion,Editorial panamericana Mexico.2003