• Géneros: Haemophilus: influenzae, ducreyi y Bordetella

pertussis.

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Dr. Antonio Vásquez Hidalgo, Ph.D.Médico /Microbiólogo /Salubrista/Investigador

Depto de Microbiología Facultad de Medicina

Universidad de El Salvador

Características entre Haemophilus y Bordetella

Especie Tipo Crecimiento Capsula Factores

de

adheren

cia

Toxinas Aspectos

epidemiol

ógicos

enfermedad

Haemophilus

H. Influenzae A-f X V Polisacári

d

Pili - Flora

normal

Meningitiis

artiritis

Sepsis

Otitis

media

H. ducreyi - X V - pili Toxina Contacto

sexual

Chancroide

Otras especies - X V - - - Flora

normal

Bronquitis

Bordetella

B. pertussis - Nicotinamida - Pertactin

a

Adenilciclasa Patogeno

estricto

Tosferina

B. parapertussis - Nicotinamida - - Semejante

a pertussis

Rinitis

B broquiseptica - Nicotinamida - - Perros

conejos

Rinitis,tos

GENERALIDADES

• Pleomórficos.

• Medio enriquecido, sangre o derivados.

• 9 especies patógenas en humanos y 5 en animales

• H. influenzae – tipo b, patógeno más importante para el ser

humano.

• H. ducreyi – vía sexual y causa chancroide.

• Otros Haemophilus están en membranas mucosas, flora normal.

Familia Pasteurellaceae

3 Géneros mas importantes de la familia

Pasteurellaceae, son:

1.Haemophilus

2.Actinobacillus

3.Pasteurella

Haemophilus: influenzae

1. Haemophilus influenzae

GENERO: HAEMOPHILUS

ESPECIES:

Haemophilus influenzae

Haemophilus parainfluenzae

Haemophilus haemoliticus

Haemophilus parahemoliticus

Haemophilus aphrophilus

Haemophilus paraphrophilus

Haemophilus segnis

Haemophilus ducreyi

Haemophilus aegyptus

Morfología e identificación

• Pleomorfos e inmóviles.

Cocobacilo corto de 0,2 a 0,3 x 1 a 2 µm. no esporulados inmóviles.

Gramnegativo

Extremos incurvados

Son las mas pequeñas.

Tiene 6 serotipos. A hasta la f

Tiene 8 Biotipos de desde I hasta VIII

Tiene 1 Biogrupos : aegypticus

• Temperatura óptima de crecimiento a 37

H. influenzae

Serotipos Biotipos

Serogrupos

Fisiología

Del griego Haema: sangre y

philos: amor o deseo .Amante de la sangre

H.aemophilus influenzaecrece en:

factores presentes en sangre Factor X =hemina Factor V=NAD (nucleotico

de nicotinamida y adenina) Crece en Agar chocolate

• Oxidasa positiva

Requiere 5-10% CO2

Características y requerimientos para el desarrollo

de algunas especies de Haemophilus.

IDENTIFICACION DE ESPECIES

Especies Requerimientos Hemólisis

X V

H.Influenzae + + -

H. parainfluenzae - + -

H. ducreyi + - -

H. haemolyticus + + +

H. parahaemolyticus - + +

H. aphrophilus - - -

Factores de virulencia.

• El H. influenzae contiene tres clases principales de antígenos de

superficie: el polisacárido capsular, el lipopolisacárido y las

proteínas de membrana externa.

• Estos seria responsables de la virulencia, adherencia y

resistencia a la fagocitosis.

• Elaboran proteasas de Ig A que son enzimas capaces de

hidrolizar la cadena pesada de Ig A1 humana.

• L.O.S Actúan como un factor siliostático, daña el epitelio ciliado y

hace que las células epiteliales se desprendan.

Patogénesis

1. Polisacárido capsular tipo bprincipal factor de virulencia

Contiene ribosa,ribitol y fosfato.

1. Cápsula:*Resistente a Fagocitosis

2. Cepas sin cápsula:1. Menos invasivas

2. Capaces de generar respuesta inflamatoria que causa enfermedad.

Sin capsulaCon capsula

Patogenia

• Hábitat: Tracto respiratorio

superior.

• Niños 85 %.

• Invasión por inflamación y

edema.

• Se difunde en tejidos

profundos. Ej Celulitis,

Meningitis y otras.

• No produce exotoxina pero

fabrica proteasa IgA que

favorece la colonización.

Estructura antigénica.

El Haemophilus influenzae posee en sus

envolturas 3 factores antigénicos

importantes ellos son:

El polisacárido capsular

El LPS (endotoxina)

La proteína de la membrana externa

(proteasas de Ig A humanas)

Los componentes más importantes son: el

polisacárido capsular y la endotoxina.

Estos seria responsables de la virulencia,

adherencia y resistencia a la fagocitosis.

Se fija a las mucosas mediado por Ig A. Factores antigénicos

Inmunidad

• Se producen Acs contra los siguientes antígenos de la a hasta f.

• La composición química de la

capsula de Haemophilus

influenzae . Fosfato de

polirribitol (PRF) Ribosa, ribitol y

fosfato.

Enfermedades clínicas

1. Meningitis Aguda.

2.Epiglotitis

Obstrucción de vías aéreas en niños de 2-4 años

3. Celulitis,

4. Osteomielitis, e infecciones articulares

5. Otitis media y sinusutis

6. Bronquitis, bacteremia, neumonía,

7. Conjuntivitis.

Epidemiología

1. Flora nasofaringea normal 20 – 80 %.

Frecuente en niños menores de dos años.

1. MECANISMO DE TRANSMISIÓN: Es por vía inhalatoria .

2. penetran a los tejidos por vías respiratorias superiores.

3. Enfermedad invasora a otros tejidos.

4. Coloniza mucosas de vías respiratorias.

MECANISMO DE TRANSMISION

Epidemiología

• FUENTE DE INFECCIÓN: Es humano.

• Época del año.

• DISTRIBUCIÓN GEOGRAFICA: Mundial-pobreza

70 %

35%

Al Gram

• Cocobacilos gramnegativos.

• Inmóviles.

• No esporulados

• Aerobios y anaerobios

facultativos

• .

Al Gram

Pruebas de laboratorio.

• Catalasa positiva. La enzima catalasa convierte el peróxido de

hidrógeno (H2O2) en oxígeno y agua.

• Indol positivo. la presencia de la enzima Triptofanasa en nuestras

bacterias. Esta enzima cataliza la reacción de desanimación, atacando la

molécula triptófano. Anillo rosado.

Positivo negativo

• Ureasa positivo. El agente desdobla la urea en C02 y amoníaco

por acción de la enzima ureasa.

Cultivo

• Agar chocolate es el más

utilizado.

• Se añade sangre y se calienta.

Calor libera factores X y V.

• Colonias traslucidas, mucoides

luego rugosas.

Satelitismo: crecimiento de Staphylococcus

aureus alrededor de las colonias en agar

sangre no calentado.

Exámenes de laboratorio clínico de Indicación

Médica. Análisis e interpretación.

1. Gram: R/ se observan cocos bacilos

gramnegativos.

2. Cultivos.( Hemocultivo. 50 – 90

%) R/ se aisla Haemophilus

influenzae . (barrera

hematoencefalica.)

3. Punción lumbar R/

análisis e interpretación del LCR

Parámetro Normal Meningitis

Presión 70-200 mmhg aumentada

Aspecto Agua de roca Turbio o

purulento

Células 0-10 mayor de 500

Tipo de células Mononucleares PMN

Proteínas 15-45 mg/100

ml

Aumentados

Glucosa 50-90 mg/100

ml

Muy baja o

ausente

Lactato 0,97 mg/100 ml aumentado

pH 7.34- 7.4 Bajo

Sensible Intermedio Resistent

e

Vancomicina +

Rifampicina +

Gentamicina +

Oxacilina +

Lincomicina +

Haemophilus ducreyi

2. Haemophilus ducreyi

• Bacilos o cocobacilos pleomorfos.

• Gram negativo, Inmóviles pequeños.

• Anaerobios facultativos• Catalasa positivos. Crece en

Agar chocolate.

• Causante del chancroide o

Chancro blando ETS

Recolección y transporte de la muestra

Muestra de úlceras• El raspado de la úlcera o pus.

• Se puede colocar directamente el portaobjetos en la ulcera.

1.- Limpie la úlcera con un hisopo o gasa estéril y humedecida con solución salina.

2.- Con un hisopo de algodón o Dacron estéril y seco, frote la úlcera.

3.- Introduzca el hisopo en el tubo con el medio de transporte.

4.- Enviar muestra a laboratorio .

Examen Médico a indicar para laboratorio.

• Tinción de Gram: Hallazgo de pequeños grupos o cadenas de bacilos gram negativos.

• Cultivo: Requerimientos especiales de crecimiento, el aislamiento es difícil.

• El H.ducreyi se desarrolla en Agar chocolate con vancomicina, y

• Agar Sangre + inhibidores en un ambiente de 10% CO2.

• Un cultivo positivo confirma el diagnóstico clínico.

H. ducreyi en agar chocolate con

vancomicina. Tincion Gram de H. ducreyi

Frotis teñidos con Gram.positivos

Son pleomorficos

Enfermedad clínica: Chancroide

Pápula dolorosa a la palpación ,eritematosa que se

transforma en una ulcera dolorosa con linfadenopatia

asociada.

Epidemiologia

• El agente se trasmite por contacto sexual.

• No hay datos estadísticos en El Salvador reportados por MISPAS.

• Frecuente mas en hombres. Pobres y mala higiene.

• En mujeres es asintomático.

Bordetella pertussis

3. Bordetella pertussis

• Es el único microorganismo con significancia clínica dentro de este

género; causa la tosferina en niños menores de cinco años

• Especies del genero Bordetella: pertussis, parapertussis y

bronchisepica.

B. pertussis

Morfología:

• Son pequeños cortos.

• Cocobacilos gramnegativos

• Aerobios estricto

• No móviles.

• Oxidasa positivo.

• Miden de 0,2 a 0,3 micras x

0.5 a 1 micra.

• Se presentan solas, en

pares o racimos.• Posee capsula.

B. pertussis

Fisiologìa

• Son muy contagiosos. Cilios

• Se multiplica en los cilios de las

células epiteliales.

• Hombre es único hospedero de

pertussis y parapertussis, la

bronchiseptica es de animales.

• Son aerobios estrictos con

metabolismo respiratorio.

• .

• .

B. pertussis

Adherencia mediada por pili,pertactina y

subunidades de la toxina tosferina.

• Tiene adherencia y crecimiento sobre las

células ciliadas.

• El microorganismo llega al tracto

respiratorio y se adhiere a la superficie

epitelial (cilios) de la tráquea y bronquios.

Esta unión esta mediada, fundamentalmente,

por la hemaglutinina, y la pertactina, las

fimbrias y la toxina Pertusis.

• Se multiplica con rapidez e interfiere con la

acción ciliar pero no invade la sangre.

• Produce toxinas y sustancias que irritan

las células superficiales (toxina

dermonecrotica, citotoxina traqueal)

produciendo tos y linfocitosis. La citotoxina

traqueal produce también ciliostasis, por lo

que se altera la defensa mucociliar.

• Aparecen zonas de necrosis en el epitelio.

Los bronquios más pequeños se obstruyen

con moco. (La toxina pertusis y la

adenilato ciclasa son capaces de inhibir a

las células fagocíticas.)

Exámenes de laboratorio por indicación Médica.

• Gram: bacilos o cocobacilos gramnegativos.

• Cultivo: zona de hemolisis

B. pertussis

Cultivo • Las colonias son en punta de

alfiler, lisas, convexas, brillantes,

casi transparentes de aspecto

perlado.

• Las tres especies presentan zona

de hemolisis.• Crecimiento lento

B. pertussis

Factores de virulencia

B. pertussis

• Hemaglutinina filamentosa. B. pertussis tienen la capacidad de adherirse a los cilios del epitelio

respiratorio. Es capaz de aglutinar diversos tipos de eritrocitos

• Citotoxina traqueal. Es un monómero de peptidoglucano de la pared celular, que tiene afinidad

por las células epiteliales ciliadas. A bajas concentraciones produce cilio-estasis y a

concentraciones elevadas provoca extrusión de las células ciliadas. La citotoxina traqueal

interfiere de forma específica en la síntesis de DNA, por lo que impide la regeneración de las

células dañadas.

• Toxina dermonecrótica. Es una toxina termolábil y se considera contribuye a la destrucción

tisular localizada en la infección en el humano.

• Pertactina. Se relaciona con la adherencia del microorganismo al epitelio respiratorio.

• Lipopolisacárido. Posee toxicidad e inducción inespecífica de interferón. Esta compuesto de dos

lípidos llamados “A” y “X” y dos cadenas de oligosacáridos.

B. pertussis

• Lipopolisacarido.

• La endotoxinas causan varios efectos fisiopatológicos.

• Toxina en gran cantidad mas lisis celular bacteriana causa colapso

cardiovascular.

• En cantidades más pequeñas, activan una variedad de

mediadores de la inflamación y genera productos de la

activación del complemento.

• Capsula: es antifagocitica.

• Proteasa IgA: la fabrica para colonización.

B. pertussis

Epidemiología

• Enfermedad en el humano: Tosferina.

• Es una enfermedad endémica de distribución

mundial, con brotes epidémicos cada 4 años.

• Es mas frecuentes en el sexo femenino y en clima

frio.

• Disminución por la vacunación.

• Es endémica.

• Mundial.

• Afecta 60 millones de personas/año.

• Frecuente en niños menores de 1 año.

• La enfermedad es más transmisible durante la fase

catarral.

B. pertussis

Enfermedades clínicas

• Fase catarral: Catarro común

• Fase paroxística: Tos

• Fase convalecencia. Tosferina.

B. pertussis

….. gracias

BIBLIOGRAFIA REFERENCIA:

Murray , Microbiología Médica. 6ª edición.2009

Sherris. Microbiología Médica. 4ª edic 2004

Basualdo, Microbiología Biomédica.1ª edic 2008

Brooks, Microbiología Médica de Jawetz.18

ed.2005

Zinsser . Microbiología. 2ª edic. 1997

Y otros de consulta…………………………….